陳　健

(重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶　408000)

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HPLC法測(cè)定抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量

陳健

(重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶408000)

摘要：目的建立抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素含量測(cè)定的高效液相色譜方法。方法色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm。結(jié)果槲皮素質(zhì)量濃度在1.034～20.68 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 3)，加樣回收率為97.14%，RSD值為0.84%(n=6)；山柰素質(zhì)量濃度在2.061～41.22 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 1)，加樣回收率為98.05%，RSD值為0.59%(n=6)。結(jié)論該方法定量準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，可用于抗菌消炎膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：槲皮素；山柰素；抗菌消炎膠囊；高效液相色譜法

抗菌消炎膠囊是由金銀花、大黃、大青葉、金錢草等7味中藥制成，具有清熱、瀉火、解毒的功效。方中的金錢草是主藥，有效成分為槲皮素和山柰素等。筆者參考文獻(xiàn)[1-6]，采用高效液相色譜法對(duì)抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量進(jìn)行測(cè)定，建立了該產(chǎn)品有效成分含量測(cè)定的方法。

1儀器與試藥

1.1儀器Sartorius-ME215S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技(中國(guó))有限公司)。

1.2試藥抗菌消炎膠囊，伊春五加參藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為20140902，20150101和20150301；槲皮素和山柰素對(duì)照品，由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)為100081-200406和110861-200808，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.5%和93.2%；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：安捷倫Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；流動(dòng)相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50)，使用前經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜抽濾并脫氣；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2溶液制備

2.2.1供試品溶液取樣品2 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加鹽酸3 mL，再加入體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇40 mL，密塞，加熱回流1 h，放冷，移至50 mL量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇定容，搖勻，過濾。取續(xù)濾液，即得。

2.2.2對(duì)照品溶液取槲皮素對(duì)照品及山柰素對(duì)照品適量，精密稱定，加體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇制成1 mL含槲皮素10 μg、山柰素20 μg的混合溶液，即得。

2.2.3陰性對(duì)照品溶液按照抗菌消炎膠囊制備工藝，制備缺少金錢草的陰性樣品溶液，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性考察取2.2項(xiàng)下3種溶液，依照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果樣品與槲皮素對(duì)照品和山柰素對(duì)照品在相同時(shí)間內(nèi)有色譜峰出現(xiàn)，而陰性對(duì)照品溶液在此處未出現(xiàn)色譜峰，表明該方法專屬性良好。見圖1。

2.3.2線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液1，5，10，15和20 mL，加體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇分別定容于100 mL量瓶中，按照2.1項(xiàng)下色譜條件HPLC法進(jìn)行分析。以峰面積Y和質(zhì)量濃度X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：槲皮素Y=48.524X+8.023 4，r=0.999 3，質(zhì)量濃度在1.034～20.68 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。山柰素Y=51.420X-19.361，r=0.999 1，質(zhì)量濃度在2.061～41.22 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1HPLC圖

A.陰性對(duì)照； B.對(duì)照品； C.供試品；1.槲皮素；2.山柰素

Fig.1 HPLC chromatograms

A.negative sample；B.reference substances；C.sample；1.quercetin；2.kaempferol

2.3.3精密度實(shí)驗(yàn)取同一質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算槲皮素和山柰素峰面積的RSD值分別為0.52%和0.46%(n=6)。

2.3.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取樣品(批號(hào)為20140902)6份，每份2 g，按照2.2.3項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算槲皮素和山柰素含量的RSD值分別為0.89%和0.82%(n=6)。

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，室溫放置，分別于配制后0，2，4，8，12和24 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算槲皮素和山柰素峰面積的RSD值分別為0.96%和0.84%(n=6)。

2.3.6加樣回收實(shí)驗(yàn)取同一批樣品(批號(hào)為2014 0902)6份，精密加入槲皮素對(duì)照品(質(zhì)量濃度為0.103 4 mg·mL-1)和山柰素對(duì)照品(質(zhì)量濃度為0.206 1 mg·mL-1)適量，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，并依法測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Results recovery tests

(n=6)

2.4樣品測(cè)定依法測(cè)定3批樣品，計(jì)算含量。結(jié)果顯示，批號(hào)為20140902，20150101和20150301的抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量分別為0.247 2和0.303 1，0.250 8和0.311 7，0.247 5和0.320 3 mg·g-1。

3討論

取槲皮素對(duì)照品溶液和山柰素對(duì)照品溶液，用島津UV-2006型紫外分光光度計(jì)在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在254和360 nm波長(zhǎng)處有最大吸收；在360 nm處吸收更靈敏，參考《中國(guó)藥典》2010年版，采用360 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)[7]。

取槲皮素對(duì)照品溶液和山柰素對(duì)照品溶液，用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行光譜掃描，同時(shí)樣品也進(jìn)行光譜掃描，在相應(yīng)保留時(shí)間內(nèi)掃描結(jié)果峰形一致，無雜質(zhì)峰干擾。

考察水解時(shí)間，在0.5，1，2和5 h水解后測(cè)定槲皮素和山柰素的含量，在水解1 h后含量無明顯增加，所以采用水解時(shí)間為1 h。

參考文獻(xiàn)：

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[3]李洪斌，余翔，李洪剛.HPLC法測(cè)定尿毒清顆粒中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量 [J].西北藥學(xué)雜志，2012，27(3)：221-222.

[4]衛(wèi)星星，王轉(zhuǎn)花.高效液相色譜法測(cè)定苦蕎籽殼中蘆丁和槲皮素的含量 [J].藥物分析雜志，2007，27(12)：1909-1910.

[5]徐國(guó)防，郭娜，李俊明，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定泌感顆粒中小檗堿和槲皮素的含量 [J].藥物分析雜志，2008，28(3)：394-397.

[6]陳健.HPLC法測(cè)定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量 [J].西北藥學(xué)雜志，2015，30(3)：251-252，317.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010年版[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:248.

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.017

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-2407(2016)04-0383-03

(收稿日期：2015-10-14)

Determination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules by HPLC

CHEN Jian

(Fuling Institute for Food and Drug Control，Chongqing 408000，China)

Abstract:Objective To establish an HPLC method for the content ditermination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules.Methods Agilent Eclipse XDB-C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with methanol-4 mL·L-1phosphoric acid solution(50∶50) as the mobile phase；The column temperature was 30 ℃；The flow rate was 1.0 mL·min-1；The detection wavelength was 360 nm.Results The sample of quercetin in the range of 1.034-20.68 μg·mL-1showed a good linear relation-ship with the peak area(r=0.999 3)，The addition recovery rate was 97.14%，RSD was 0.84%(n=6)；The sample of kaempferol in the range of 2.061-41.22 μg·mL-1showed a good linear relationship with the peak area(r=0.999 1).The addition recovery rate was 98.05%，RSD was 0.59%(n=6).Conclusion The method is simple，rapid, accurate，and suitable for the determination of Kangjunxiaoyan Capsules.

Key words：quercetin；kaempferol；Kangjunxiaoyan Capsules;HPLC