陳 健
(重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所,重慶 408000)
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HPLC法測(cè)定抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量
陳健
(重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所,重慶408000)
摘要:目的建立抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素含量測(cè)定的高效液相色譜方法。方法色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50);柱溫:30 ℃;流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm。結(jié)果槲皮素質(zhì)量濃度在1.034~20.68 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 3),加樣回收率為97.14%,RSD值為0.84%(n=6);山柰素質(zhì)量濃度在2.061~41.22 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 1),加樣回收率為98.05%,RSD值為0.59%(n=6)。結(jié)論該方法定量準(zhǔn)確可靠,操作簡(jiǎn)便,靈敏度高,可用于抗菌消炎膠囊的質(zhì)量控制。
關(guān)鍵詞:槲皮素;山柰素;抗菌消炎膠囊;高效液相色譜法
抗菌消炎膠囊是由金銀花、大黃、大青葉、金錢草等7味中藥制成,具有清熱、瀉火、解毒的功效。方中的金錢草是主藥,有效成分為槲皮素和山柰素等。筆者參考文獻(xiàn)[1-6],采用高效液相色譜法對(duì)抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量進(jìn)行測(cè)定,建立了該產(chǎn)品有效成分含量測(cè)定的方法。
1儀器與試藥
1.1儀器Sartorius-ME215S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司);Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技(中國(guó))有限公司)。
1.2試藥抗菌消炎膠囊,伊春五加參藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號(hào)分別為20140902,20150101和20150301;槲皮素和山柰素對(duì)照品,由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供,批號(hào)為100081-200406和110861-200808,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.5%和93.2%;甲醇為色譜純;水為超純水;其余試劑為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱:安捷倫Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm;流動(dòng)相:甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50),使用前經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜抽濾并脫氣;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。
2.2溶液制備
2.2.1供試品溶液取樣品2 g,精密稱定,置于錐形瓶中,加鹽酸3 mL,再加入體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇40 mL,密塞,加熱回流1 h,放冷,移至50 mL量瓶中,用體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇定容,搖勻,過濾。取續(xù)濾液,即得。
2.2.2對(duì)照品溶液取槲皮素對(duì)照品及山柰素對(duì)照品適量,精密稱定,加體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇制成1 mL含槲皮素10 μg、山柰素20 μg的混合溶液,即得。
2.2.3陰性對(duì)照品溶液按照抗菌消炎膠囊制備工藝,制備缺少金錢草的陰性樣品溶液,按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。
2.3方法學(xué)考察
2.3.1專屬性考察取2.2項(xiàng)下3種溶液,依照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果樣品與槲皮素對(duì)照品和山柰素對(duì)照品在相同時(shí)間內(nèi)有色譜峰出現(xiàn),而陰性對(duì)照品溶液在此處未出現(xiàn)色譜峰,表明該方法專屬性良好。見圖1。
2.3.2線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液1,5,10,15和20 mL,加體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇分別定容于100 mL量瓶中,按照2.1項(xiàng)下色譜條件HPLC法進(jìn)行分析。以峰面積Y和質(zhì)量濃度X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:槲皮素Y=48.524X+8.023 4,r=0.999 3,質(zhì)量濃度在1.034~20.68 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。山柰素Y=51.420X-19.361,r=0.999 1,質(zhì)量濃度在2.061~41.22 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。
圖1HPLC圖
A.陰性對(duì)照; B.對(duì)照品; C.供試品;1.槲皮素;2.山柰素
Fig.1 HPLC chromatograms
A.negative sample;B.reference substances;C.sample;1.quercetin;2.kaempferol
2.3.3精密度實(shí)驗(yàn)取同一質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,計(jì)算槲皮素和山柰素峰面積的RSD值分別為0.52%和0.46%(n=6)。
2.3.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取樣品(批號(hào)為20140902)6份,每份2 g,按照2.2.3項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液,測(cè)定含量,計(jì)算槲皮素和山柰素含量的RSD值分別為0.89%和0.82%(n=6)。
2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液,室溫放置,分別于配制后0,2,4,8,12和24 h進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算槲皮素和山柰素峰面積的RSD值分別為0.96%和0.84%(n=6)。
2.3.6加樣回收實(shí)驗(yàn)取同一批樣品(批號(hào)為2014 0902)6份,精密加入槲皮素對(duì)照品(質(zhì)量濃度為0.103 4 mg·mL-1)和山柰素對(duì)照品(質(zhì)量濃度為0.206 1 mg·mL-1)適量,按照供試品溶液制備方法進(jìn)行制備,并依法測(cè)定,結(jié)果見表1。
表1回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
Tab.1 Results recovery tests
(n=6)
2.4樣品測(cè)定依法測(cè)定3批樣品,計(jì)算含量。結(jié)果顯示,批號(hào)為20140902,20150101和20150301的抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量分別為0.247 2和0.303 1,0.250 8和0.311 7,0.247 5和0.320 3 mg·g-1。
3討論
取槲皮素對(duì)照品溶液和山柰素對(duì)照品溶液,用島津UV-2006型紫外分光光度計(jì)在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,結(jié)果在254和360 nm波長(zhǎng)處有最大吸收;在360 nm處吸收更靈敏,參考《中國(guó)藥典》2010年版,采用360 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)[7]。
取槲皮素對(duì)照品溶液和山柰素對(duì)照品溶液,用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行光譜掃描,同時(shí)樣品也進(jìn)行光譜掃描,在相應(yīng)保留時(shí)間內(nèi)掃描結(jié)果峰形一致,無雜質(zhì)峰干擾。
考察水解時(shí)間,在0.5,1,2和5 h水解后測(cè)定槲皮素和山柰素的含量,在水解1 h后含量無明顯增加,所以采用水解時(shí)間為1 h。
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doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.017
中圖分類號(hào):R927.2
文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A
文章編號(hào):1004-2407(2016)04-0383-03
(收稿日期:2015-10-14)
Determination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules by HPLC
CHEN Jian
(Fuling Institute for Food and Drug Control,Chongqing 408000,China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the content ditermination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules.Methods Agilent Eclipse XDB-C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm) was used with methanol-4 mL·L-1phosphoric acid solution(50∶50) as the mobile phase;The column temperature was 30 ℃;The flow rate was 1.0 mL·min-1;The detection wavelength was 360 nm.Results The sample of quercetin in the range of 1.034-20.68 μg·mL-1showed a good linear relation-ship with the peak area(r=0.999 3),The addition recovery rate was 97.14%,RSD was 0.84%(n=6);The sample of kaempferol in the range of 2.061-41.22 μg·mL-1showed a good linear relationship with the peak area(r=0.999 1).The addition recovery rate was 98.05%,RSD was 0.59%(n=6).Conclusion The method is simple,rapid, accurate,and suitable for the determination of Kangjunxiaoyan Capsules.
Key words:quercetin;kaempferol;Kangjunxiaoyan Capsules;HPLC