俞發(fā)榮，張?jiān)娝?，張振?，連秀珍，謝明仁，李登樓，楊博

（甘肅省證據(jù)科學(xué)技術(shù)研究與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅政法學(xué)院，蘭州 730070

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瑪咖提取物對小鼠毒性及免疫器官的影響

俞發(fā)榮，張?jiān)娝?，張振?，連秀珍，謝明仁，李登樓，楊博

（甘肅省證據(jù)科學(xué)技術(shù)研究與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅政法學(xué)院，蘭州 730070

【摘要】目的 探討瑪咖提取物對小鼠毒性及免疫器官的影響。方法 給予BALB/c小鼠瑪咖提取物15 d，觀察瑪咖對小鼠的毒性作用，稱量胸腺和脾重量。結(jié)果 24 h內(nèi)小鼠口服累計(jì)劑量為320 g/（kg·bw），未見動(dòng)物出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)。給予瑪咖提取物16.0、32.0、64.0 g/（kg·bw）15 d，胸腺重量比對照組分別增加了36.84%、89.47%、107.89%，脾臟重量分別增加了44.83%、62.01%、89.66%，小鼠碳粒廓清指數(shù)分別增加了30.85%、42.55%、54.79%，血清溶血素值分別增加了11.64%、20.03%、31.51%，與對照組相比，差異有顯著性（P＜0.05～0.01）。結(jié)論 瑪咖提取物具有增加免疫器官重量和提高免疫功能的作用，且毒性較低。

【關(guān)鍵詞】瑪咖提取物；免疫器官；毒性作用；小鼠

瑪咖 （Maca），十字花科（Brassicaceae）獨(dú)行菜屬（Lepidium）植物，原產(chǎn)于海拔3500～4500 m的南美安第斯山區(qū)。瑪咖在南美的食用歷史已經(jīng)有5800多年，是一種純天然食品，營養(yǎng)成份豐富，有

1 材料和方法

1.1 材料

瑪咖提取物：稱取云南玉龍雪山產(chǎn)的瑪咖塊根200 g，加水800 mL，得煎液600 mL，再隔水加熱濃縮為50 mL（含生藥4 g/mL），實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水稀釋成所需濃度。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境：SPF級BALB/c品系小鼠，150只（雌雄各半），體重20～22 g，購于甘肅省中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心［SCXK（甘）2011-0001］。全部實(shí)驗(yàn)均在甘肅省證據(jù)科學(xué)技術(shù)研究與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室SPF級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室完成［SYXK（甘）2015-0006］。

1.2 瑪咖提取物毒性實(shí)驗(yàn)

1.2.1 半數(shù)致死量（LD50）測定

BALB/c小鼠在獨(dú)立通氣籠（individual ventilated cages，IVC）內(nèi)飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食，人工光照12 h。實(shí)驗(yàn)室溫度 20～22℃，IVC內(nèi)溫度（22± 0.2）℃，濕度55% ～65%，適應(yīng)7 d。按照《中藥藥理研究方法學(xué)》“孫氏綜合法（改進(jìn)寇氏法）”將50 只BALB/c小鼠（雌雄各半）隨機(jī)分為5組，每組10只，組間劑量比值為1∶0.8。給藥前禁食12 h，不禁水。經(jīng)一次灌胃（ig）給藥，給藥容積為0.2 mL/10 g體重，給藥后連續(xù)觀察7 d。

1.2.2 最大耐受量（MTD）測定

取20只BALB/c小鼠（雌雄各半），給藥前禁食12 h，不禁水。在24 h內(nèi)灌胃（ig）給藥4次，每次給藥80.00 g/（kg·bw），累計(jì)給藥320.0 g/（kg·bw）。給藥后連續(xù)觀察7 d。

1.3 瑪咖提取物對小鼠免疫器官的影響

選取BALB/c小鼠80只（雌雄各半）。隨機(jī)分為4組，每組20只（雌雄各半）。對照組：正常飼養(yǎng)，灌胃（ig）等量蒸餾水；給藥前禁食12 h，不禁水?，斂崛∥锝M（高劑量組：給予最大耐受量的1/5瑪咖提取物64.0 g/（kg·bw）；中劑量組：給予最大耐受量的1/10瑪咖提取物32.0 g/（kg·bw）；低劑量組：給予最大耐受量的1/20瑪咖提取物16.0 g/ （kg·bw）），連續(xù)給藥15 d。第16天，各組取10只BALB/c小鼠，尾i.v.1∶10印度墨汁0.1 mL/10 g體重，5 min和10 min分別從眼底取血20 μL加入2 mL Na2CO3（1 g/L）溶液中混勻，置680 nm處測定吸收值，計(jì)算廓清指數(shù)（K）；各組另10只BALB/c小鼠按0.2 mL/20 g體重給予5%雞紅細(xì)胞懸液（ip）致敏，第23天摘眼球采血，測A值，并計(jì)算血清半數(shù)溶血素值（HC50）。

上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)均用乙醚麻醉，無痛死亡后，剝?nèi)バ叵?、脾稱重，計(jì)算10 g體重器官指數(shù)（器官重/10 g體重）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以 P＜0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 瑪咖提取物毒性實(shí)驗(yàn)

對瑪咖提取物進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，按80.0 g/（kg·bw）灌胃給藥，未測出半數(shù)致死量（LD50）值。在小鼠可接受的最大容積下進(jìn)行最大耐受量（MTD）實(shí)驗(yàn)，結(jié)果在24 h內(nèi)小鼠口服累計(jì)劑量為320 g/（kg·bw），未見動(dòng)物出現(xiàn)任何中毒癥狀。

2.2 瑪咖提取物對小鼠免疫器官的影響

2.2.1 瑪咖提取物對小鼠胸腺和脾重量的影響

給予BALB/c小鼠瑪咖提取物16.0、32.0、64.0g/（kg·bw） 15 d，胸腺重量比對照組分別增加了36.84%、89.47%、107.89%，脾重量比對照組分別增加了44.83%、62.01%、89.66%（圖1）。

2.2.2 瑪咖提取物對小鼠免疫功能的影響

給予瑪咖提取物16.0、32.0、64.0 g/（kg·bw）15 d，小鼠碳粒廓清指數(shù)比對照組分別增加了30.85%、42.55%、54.79%，血清溶血素值比對照組分別增加了11.64%、20.03%、31.51%，與對照組相比，差異有顯著性（P＜0.05～0.01）（圖2）。

圖1 瑪咖提取物對小鼠胸腺和脾重量的影響（與對照組比：**P＜0.01）Fig.1 Effect of Maca extract on weight of thymus and spleen in the mice（**P＜0.01 vs.the control group）

圖2 瑪咖提取物對小鼠免疫功能的影響（與對照組比：*P＜0.05，**P＜0.01）Fig.2 Effects of maca extract on immune function of the mice（*P＜0.05，**P＜0.01，vs.the control group）

3 討論

近年來，瑪咖的功效及營養(yǎng)價(jià)值［5］等相繼被發(fā)掘出來［6］。研究發(fā)現(xiàn)，瑪咖具有強(qiáng)壯身體、改善性功能［7］，增強(qiáng)性行為［8］、治療抑郁癥［9］、減輕疲勞［10］、提高記憶能力［11］等功能，是一種藥食兩用植物資源［12］。給予志愿者瑪咖提取物和安慰劑，采用雙盲法研究發(fā)現(xiàn)，瑪咖能顯著提高男性精子數(shù)量［13］，降低血糖水平［14］，改善女性生殖功能［15］，提高血雌激素水平［16］，減輕女性更年期癥狀，用瑪咖天然植物替代激素療法［17］。生活在高海拔（4000 m以上）地區(qū)的人食用瑪咖，可抑制高海拔誘導(dǎo)血白細(xì)胞介素-6水平升高［18］，保護(hù)免疫系統(tǒng)免受損傷。有關(guān)瑪咖毒性方面的研究，Chung等［19］將瑪咖水提取物5 g/（kg·bw）給予成年大鼠，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，各組織器官重量與對照組差異無顯著性（P＞0.05）。急性毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，按80.0 g/（kg·bw）灌胃給藥，未測出小鼠半數(shù)致死量（LD50）值，在小鼠可接受的最大容積下進(jìn)行最大耐受量（MTD）實(shí)驗(yàn)，結(jié)果在24 h內(nèi)小鼠口服累計(jì)量達(dá)320.0 g/（kg· bw），未見動(dòng)物出現(xiàn)任何中毒癥狀。給予BALB/c小鼠不同劑量的瑪咖提取物，胸腺重量、脾重量、碳粒廓清指數(shù)、血清溶血素值均顯著增加，與對照組相比，差異有顯著性（P＜0.05～0.01）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，云南玉龍雪山瑪咖按急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)屬無毒級植物；該瑪咖提取物具有增加免疫器官重量、提高免疫功能的作用。

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【中圖分類號(hào)】Q95-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1005-4847（2016）03-0279-04

Doi：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.012

Corresponding author：ZHANG Zhen-nan，E-mail：zzn@gsli.edu.cn

［基金項(xiàng)目］國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：31060283）；國家社會(huì)科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：07BSH054）；甘肅省基礎(chǔ)研究創(chuàng)新群體項(xiàng)目（編號(hào)：145RJIA333）；甘肅省科技支撐計(jì)劃-社會(huì)發(fā)展類項(xiàng)目（編號(hào)：1304FKCA082）；甘肅政法學(xué)院重點(diǎn)項(xiàng)目（編號(hào)：GZF2014XZDLW17）；蘭州市科技計(jì)劃資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2014-1-128）。

［作者簡介］俞發(fā)榮（1959-），男，博士，研究員。研究方向：法醫(yī)生物學(xué)、社會(huì)環(huán)境壓力對人類健康的影響、藥理學(xué)和毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)。E-mail：tim9898@163.com.

［通訊作者］張振南，E-mail：zzn@gsli.edu.cn.“南美人參”之譽(yù)，傳統(tǒng)上用于強(qiáng)壯身體，提高生育力，改善性功能，抗抑郁，抗貧血等。從20世紀(jì)60年代初期到80年代，關(guān)于瑪咖植物學(xué)和藥用價(jià)值的研究逐步系統(tǒng)化，瑪咖的一些傳統(tǒng)作用得到德國和北美植物學(xué)研究者的科學(xué)驗(yàn)證，尤其是20世紀(jì)80年代以后，隨著瑪咖的營養(yǎng)和藥用價(jià)值被歐美科學(xué)家揭示，聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）給予瑪咖很高的評價(jià)并將其大力推廣。在中、南美洲國家、如厄瓜多爾、秘魯、墨西哥等國瑪咖作為民間藥物用于增強(qiáng)精力、提高生育力、緩解更年期綜合癥、抑郁癥、哮喘癥和促進(jìn)傷口愈合等。在美國、歐洲、日本、臺(tái)灣、澳大利亞等國際科學(xué)研究者也加快了對瑪咖化學(xué)成分、藥效藥理研究的步伐，每年都在不斷揭開產(chǎn)生瑪咖神奇功效的神秘面紗，給瑪咖具有獨(dú)特藥效的醫(yī)藥產(chǎn)品的開發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。近年來，隨著植物藥的開發(fā)和人民生活水平的提高，瑪咖因其具有良好的保健功能和多方面的奇特功效，越來越受到人們的廣泛關(guān)注，復(fù)合保健茶［1］、保健飲料［2］及食品膠囊［3］相繼面市，為保障人們身體健康，有必要對瑪咖的食品安全質(zhì)量［4］、毒性作用以及對免疫器官的影響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，以期為瑪咖的開發(fā)利用提供科學(xué)的參考依據(jù)。

［收稿日期］2016-01-14

Effect of Maca extract on the toxicity and immune organs in mice

YU Fa-rong，ZHANG Shi-shuang，ZHANG Zhen-nan*，LIAN Xiu-zhen，XIE Ming-ren，LI Deng-lou，YANG Bo
（Key Laboratory of Evidence of Science and Technology Research and Application，Gansu Province Institute of Political Science and Law，Lanzhou 730070，China）

【Abstract】Objective To study the effect of Maca extract on toxicity and immune organs in mice.Methods One hundred and fifty SPF BALB/c mice（male：female=1∶1，body weight 20-22 g）were used in this study.The mice received Maca extract for 15 days，and the maca toxic effect on mice，and the thymus and spleen weights were observed. Results At 24 hours after oral administration of Maca extract in an accumulated dose of 320 g/kg·bw，no toxic response was seen in the mice.After administration of Maca extract in a dose of 16.0，32.0，and 64.0 g/kg·bw for 15 days，the thymus weight was increased by 36.84%，89.47%and 107.89%，respectively，the spleen weight was increased by 44.83%，62.01%，and 89.66%，respectively，the carbon clearance index was increased by 30.85%，30.85%and 42.55%，respectively，and the serum hemolysin value was increased by 11.64%，20.03%and 31.51%，respectively，in the experimental mice，significantly higher than those of the control group（P＜0.05 or P＜0.01 for all）.Conclusions Maca extract exerts an enhancing effect on the immune organ weights and improve the immune function，and is associated with a lower toxicity.

【Key words】Maca extract；Immune organs；Toxic effect；Mice