韓慰，蔣莉，何蓉，宋曉潔，程莉

（重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院神經內科，兒童發(fā)育疾病研究教育部重點實驗室，兒童發(fā)育重大疾病國家國際科技合作基地，兒科學重慶市重點實驗室，重慶 400014）

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口服補液鹽降低氯化鋰-匹羅卡品驚厥持續(xù)狀態(tài)大鼠死亡率的研究

韓慰，蔣莉*，何蓉，宋曉潔，程莉

（重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院神經內科，兒童發(fā)育疾病研究教育部重點實驗室，兒童發(fā)育重大疾病國家國際科技合作基地，兒科學重慶市重點實驗室，重慶 400014）

【摘要】目的 探討通過胃管灌胃改良口服補液鹽（oral rehydration salts，ORS）降低氯化鋰-匹羅卡品誘發(fā)驚厥持續(xù)狀態(tài)（status epilepticus，SE）模型的死亡率的方法。方法 選用成年組（60 d）SD大鼠30只和幼年組（20 d）SD大鼠45只，隨機分為成年SE+ORS組、成年SE組、幼年SE+ORS組、幼年SE組、幼年血糖組各15只。經腹腔注射氯化鋰和匹羅卡品，誘發(fā)大鼠驚厥發(fā)作，驚厥60 min后，給予安定止驚。各ORS組于SE后1、12、24 h根據不同年齡予以不同劑量改良ORS灌胃。其余各組不給予處理。記錄實驗大鼠驚厥發(fā)作情況，驚厥前后體重變化及死亡情況；血糖測定組于SE后8 h取血檢測血糖，探索降低該模型死亡率的方法。結果 （1）各組驚厥后體重均降低，約占體重的5% ～8%。（2）氯化鋰-匹羅卡品驚厥持續(xù)狀態(tài)模型死亡率較高，幼年組40.00%，成年組57.14%；死亡發(fā)生時間集中在驚厥后24 h內，72 h后死亡數趨于平穩(wěn)。（3）SE后實驗大鼠血糖明顯降低，給予ORS液灌胃后，血糖趨于正常水平。（4）以改良ORS灌胃后，幼年組和成年組72 h內死亡率明顯降低。結論 SE后改良ORS液灌胃有效改善實驗動物死亡率，是有效提高其生存率的方法。

【關鍵詞】氯化鋰-匹羅卡品；驚厥持續(xù)狀態(tài)模型；大鼠；死亡率

氯化鋰-匹羅卡品誘發(fā)大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)模型具有與人類顳葉癲癇相似的行為和腦電圖改變，是研究驚厥持續(xù)狀態(tài)較為理想的動物模型。由于驚厥持續(xù)狀態(tài)要求足夠長的發(fā)作時間，實驗大鼠的死亡率高，國內外學者從匹羅卡品劑量的選擇、使用M膽堿能樣受體拮抗劑進行預處理、采用不同止驚劑適時中止發(fā)作等方面對該模型進行改良［1-4］，但實驗動物急性期死亡率仍可高達55%［5］。

目前的改良方法多集中在驚厥發(fā)作期如何止驚，而在驚厥后處理方面研究甚少。驚厥持續(xù)狀態(tài)可造成全身缺氧致代謝性酸中毒、糖代謝紊亂、脫水、窒息等病理生理改變。驚厥持續(xù)狀態(tài)大鼠予以止驚劑后處于昏睡狀態(tài)，而清醒后活動減少、反應遲鈍、精神欠佳，進食能力減弱、體重明顯減少。我們認為這可能是造成驚厥后急性期大鼠死亡的重要原因。因此，驚厥后處理對降低其死亡率有重要意義。

口服補液鹽（oral rehydration salts，ORS），簡稱ORS液。本實驗用改良的ORS液糾正大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)后水鹽代謝紊亂，補充血糖，探討能否降低急性期實驗大鼠死亡率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物與分組

20日齡SPF級雄性 SD大鼠75只，其中，體重在35～52 g的45只；體重在180～230 g的30只，均來源于重慶醫(yī)科大學實驗動物中心【SCXK（渝）2012-0001】，在重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院動物中心SPF級屏障實驗設施中進行【SYXK（渝）2012-0015】。

根據大鼠日齡和SE后是否用改良ORS處理采用隨機數字法分為以下5個組：成年 SE+ORS組、成年SE組、幼年SE+ORS組、幼年SE組、幼年血糖測定組各15只。其中血糖測定組又分3個亞組，分別是正常對照組、SE組、SE+0RS組各5只。

1.1.2 試劑

氯化鋰、匹羅卡品（美國 Sigma-Aldrich公司）；硫酸阿托品、安定（天津金耀氨基酸有限公司）；口服補液鹽III（ORS）液（西安安健藥業(yè)有限公司），每袋成分：氯化鈉0.65 g、枸櫞酸納0.725 g、氯化鉀0.375 g、無水葡萄糖3.375 g。實驗用改良配方：葡萄糖10 g+1袋ORS+250 mL蒸餾水。

1.2 模型建立方法

采用氯化鋰-匹羅卡品建立驚厥持續(xù)狀態(tài)模型，幼年組（20 d）、成年組均在腹腔注射氯化鋰 127 mg/kg，18～20 h后，分別采用腹腔注射匹羅卡品30、50 mg/kg。按照 Racine［6］分級法進行驚厥分級，當發(fā)作達到IV級或V級并持續(xù)60 min為驚厥持續(xù)狀態(tài)，驚厥發(fā)作15 min后腹腔注射硫酸阿托品（10 mg/kg）拮抗其M膽堿能樣作用，發(fā)作60 min后給予安定（10 mg/kg）止驚。腹腔注射匹羅卡品30 min后，未達到IV級發(fā)作者，等量追加1次，若仍未達到IV級發(fā)作者退出實驗。血糖組的對照組，予以腹腔注射等量生理鹽水。

幼年和成年SE+ORS組的實驗大鼠均于SE后1，12，24 h以改良ORS液灌胃，劑量分別以每只0.5、2.0 mL。血糖（SE+ORS）組于SE后1 h灌胃改良ORS液，劑量為每只0.5 mL。其余實驗大鼠不給予該處理。SE前后各組均用普通飼料喂養(yǎng)。記錄各組實驗大鼠驚厥前后體重及發(fā)作情況，分別以SE后1、12、24、48、72、96、120 h等7個時間點觀察各組實驗動物死亡數。血糖組于SE后12 h采用眼底靜脈取血方法取血約1 mL，然后離心取血清送本院檢驗科檢測血糖。

1.3 統(tǒng)計學方法

用SSPS17.0軟件包對數據進行統(tǒng)計學處理，所有計量資料均用均數±標準差表示，各組實驗動物的死亡率采用卡方檢驗，驚厥前后體重均值比較采用配對t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

腹腔注射匹羅卡品后，各組實驗大鼠均出現相似的表現，即不同程度的膽堿能反應：流涎、稀便、結膜充血出血、全身濕潤等；以及不同程度的癇性發(fā)作表現：早期出現豎毛、搔抓癥狀，后出現面部抽搐、節(jié)律性點頭和咀嚼，繼之出現雙側前肢抬起陣攣，全身強直陣攣伴站立和跌倒、翻滾甚至尖叫等。

2.1 驚厥發(fā)作情況

各組大鼠均在匹羅卡品注射后30 min左右達到Ⅴ級發(fā)作。幼年組注射安定后1～11 min完全止驚，成年組約在給藥后1～28 min終止發(fā)作。各組驚厥發(fā)作情況詳見表1。幼年SE+ORS組有1只實驗大鼠在達到V級發(fā)作后持續(xù)20 min后死亡，成功建模14只。幼年SE組15只實驗大鼠均造模成功。成年SE+ORS組成年造模13只，其中1只在達到V級發(fā)作后27 min后死亡，另1只實驗大鼠腹腔注射匹羅卡品后出現搔抓、點頭癥狀，但30 min后未達到IV級發(fā)作，等量追加1次，30 min后仍未達到IV級發(fā)作故退出實驗。成年SE組有1只大鼠達到Ⅴ級發(fā)作后持續(xù)38 min后死亡，成功造模14只。血糖測定組10只幼年大鼠造模成功。

2.2 體重變化

各組實驗大鼠驚厥前后體重均減輕（詳見表2），幼年組減輕占驚厥前體重的7% ～8%，成年組體重減輕驚厥前體重的5%左右。造模前后體重差異有顯著性（P＜0.001）。

表1 各組實驗動物驚厥持續(xù)狀態(tài)發(fā)作情況（±s）Tab.1 Status epilepticus in the experimental rats

表1 各組實驗動物驚厥持續(xù)狀態(tài)發(fā)作情況（±s）Tab.1 Status epilepticus in the experimental rats

組別Groups動物數Number of rats驚厥潛伏時間/min Seizure latency未成功誘發(fā)驚厥數Number of onset failure達到IV級發(fā)作未持續(xù)60 min Number of rats lasting ＜60 min安定控制驚厥發(fā)作時間/min Time of seizure controlled by diazepam成功建模數Number of successful models幼年SE+ORS組Young SE+ORS　15　30.08±9.42　0　1　5.84±2.84　14幼年SE組Young SE　15　30.65±8.43　0　0　5.74±2.35　15成年SE+ORS Adult SE+ORS　15　41.21±16.64　1　1　12.45±9.44　13成年SE組Adult SE　15　39.04±17.03　0　1　12.07±9.32　14血糖組Blood glucose　10　36.06±9.95　0　0　6.01±2.83　10

表2 各組實驗動物驚厥前后體重變化情況（±s）Tab.2 Changes of body weight of the rats before and after status epilepticus

表2 各組實驗動物驚厥前后體重變化情況（±s）Tab.2 Changes of body weight of the rats before and after status epilepticus

注：*驚厥前體重與驚厥后體重相比，P＜0.001。Note.*P＜0.001，comparison between the body weights before and after seizure.

組別Groups驚厥前體重/g Body weight before seizure驚厥后體重/g Body weight after seizure減少體重/g Body weight loss減少體重占驚厥前體重百分比/% Body weight loss/ b.w.before seizure幼年SE+ORS組Young SE+ORS　41.62±3.34　38.72±3.12*　2.96±0.94　7.11幼年SE組Young SE　41.60±4.46　38.23±4.31*　3.36±0.88　8.09成年SE+ORS組Adult SE+ORS　212.09±20.65　200.46±21.79*　10.38±6.74　4.94成年SE組Adult SE　221.70±21.87　210.11±21.43*　11.59±6.18　5.23

2.3 死亡情況

SE后1、12、24、48、72、96、120 h等7個時間點觀察各組實驗動物死亡數、記錄死亡時間及死亡率。幼年組共死亡7只，成年組共死亡10只。幼年SE +ORS組和成年SE+ORS組死亡率分別為7.14%和15.38%，明顯低于幼年SE組、成年SE組。另外，幼年SE組與SE+ORS組、成年SE組與SE+ ORS組之間死亡率差異具有顯著性（P＜0.05），各組實驗大鼠死亡情況及死亡率見表3。

表3 各組實驗動物死亡情況Tab.3 Mortality of the experimental animals

2.4 血糖水平

SE組血糖（4.69±0.59 mmol/L）較對照組（9.37±3.09 mmol/L）明顯降低，與對照組差異具有顯著性（P＜0.01）；SE+ORS組（7.12±2.13 mmol/L）血糖高于SE組、稍低于正常對照組，與對照組血糖差異無顯著性（P＞0.05），與SE組血糖差異具有顯著性（P＜0.05）。

3 討論

驚厥持續(xù)狀態(tài)（status epilepticus，SE），是神經系統(tǒng)常見危重癥，可導致驚厥性腦損傷，繼發(fā)癲癇、認知障礙等后遺癥。目前臨床上尚沒有有效的觀察指標和方法，主要借助于對動物驚厥模型的研究。氯化鋰-匹羅卡品誘發(fā)大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)模型是公認的較理想的動物模型。

本研究中，幼年組死亡率達到40%，成年組甚至達57.4%。這對需要觀察驚厥后遠期實驗指標的研究造成了較大的工作量、較高的經濟費用，且實驗一致性較低。

目前的改良方法多集中在驚厥發(fā)作期如何止驚，而在驚厥后處理方面研究甚少。本研究發(fā)現，盡管應用阿托品拮抗M膽堿能作用，成年組體重減輕量從胡越等［2］研究發(fā)現的每只30～50 g減少至10 ～20 g，但是體重仍然是明顯減少的，約占體重的5%，而幼年組減少量甚至占體重7% ～8%。從實驗大鼠驚厥發(fā)作時腺體分泌增加，出現流涎、稀便、全身毛濕潤等表現可見，驚厥持續(xù)狀態(tài)后大鼠體重減輕最可能是由于體液丟失造成。而機體處于脫水、電解質紊亂的病理狀態(tài)，這可能是SE后急性期實驗大鼠死亡的原因之一，因此SE后給予補液對提供大鼠生存率具有重要意義。

另外，本研究發(fā)現無論是幼年組還是成年組SE后死亡發(fā)生時間多集中在SE后72 h內，尤其是SE 后24 h內，與王東梅等［7］的報道一致。由于幼年較成年大鼠驚厥易感且耐受性更好，因此本實驗對幼年大鼠SE后8 h血糖情況作了檢測發(fā)現，SE后實驗大鼠血糖水平較正常對照組明顯降低。我們認為雖然SE后有效止驚，但是一方面實驗大鼠精神尚未恢復，另一方面由于強直陣攣發(fā)作時間長，有些實驗大鼠自主活動嚴重受損，在SE后24 h內進食能力減弱造成低血糖可能是死亡原因之一。

ORS液是臨床上較常用的口服補液鹽，對輕、中度脫水，補充鈉、鉀、氯、具有治療作用。改良的ORS液即加入葡萄糖，配置成5%葡萄糖-ORS液，在SE后1，12，24 h根據不同年齡大鼠的胃內容量給予不同劑量灌胃后發(fā)現：（1）SE后以改良ORS液灌胃可以有效升高SE后血糖水平，甚至接近正常水平。（2）SE后給予改良ORS液補液可以降低實驗大鼠死亡率，幼年組降至7.14%，成年組降至15.38%，顯著低于 Goodman等［8］發(fā)現的通過改良該模型止驚方法后的死亡率45%。本改良方法并沒有改變該模型的病理基礎，Lemos等［9］認為大劑量匹羅卡品誘導的癲癇狀態(tài)持續(xù)60 min者，100%產生反復自發(fā)性癲癇，盡管張小東等［4］通過重復低劑量注射匹羅卡品降低死亡率9.7%，接近本研究結果，但慢性癲癇的發(fā)生率卻低于該模型。（3）改良ORS液主要改善SE后實驗大鼠急性期（72 h）死亡情況，尤其是48 h之內，48 h之后，實驗大鼠進食能力基本恢復。

因此，氯化鋰-匹羅卡品誘導的大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)模型中，除了重復低劑量注射匹羅卡品、聯用膽堿受體拮抗劑以及根據實驗需要選擇適當的止驚劑來提高大鼠存活率以外，對SE后糾正水電解質平衡的紊亂，預防低血糖對降低實驗大鼠SE后急性期死亡率具有重要意義。SE后24 h內用改良ORS液灌胃能有效改善實驗動物死亡率，是有效提高其生存率的方法。

參考文獻

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【中圖分類號】Q95-33

【文獻標識碼】A

【文章編號】1005-4847（2016）03-0243-05

Doi：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.005

［基金項目］國家自然科學基金（NO.81371452）；重慶市科委自然科學基金重點項目（cstc2013jjB0031）；教育部博士點基金課題（20125503110011）。

［作者簡介］韓慰（1990-），女，研究生，研究方向：小兒神經疾病Email：hanweitqx@126.com

［通訊作者］蔣莉（1964-），女，教授，研究方向：小兒神經系統(tǒng)疾病Email：dr_jiangli@126.comcose level was significantly decreased in the SE rats，and ORS gavage made the blood glucose returning to normal in the SE rats.（4）ORS gavage apparently decreased the mortality rate of young and adult groups during the 72 hours after seizure onset.Conclusions ORS gavage effectively reduces the mortality of SE rats，and is an effective method to improve the survival of SE rats.

Corresponding author：Jiang Li，Email：dr_jiangli@126.com

［收稿日期］2015-12-29

Mortality of rat models of LiCl-pilocarpine-induced status epilepticus can be reduced by oral rehydration salt solution

HAN Wei，JIANG Li*，HE Rong，SONG Xiao-jie，CHENG Li
（Department of Neurology，Children Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400014，China）

【Abstract】Objective To explore a new method of reducing the mortality of rat models of LiCl-pilocarpine-induced status epilepticus（SE）by oral gavage of rehydration salts（ORS）liquid.Methods Forty-five young SD rats（20-dayold）and 30 adult SD rats（60-day-old）were enrolled in this study.They were randomly divided into five groups：the adult SE rats received ORS gavage（adult SE+ORS），adult SE rats（adult SE）and young SE rats received ORS gavage（young SE+ORS），young SE rats（young SE）and young blood glucose group.Seizures were induced in both young and adult SE groups with i.p.LiCl-pilocarpine was injected i.p.to induce SE，which was interrupted by diazepam at 60 minutes after SE onset.ORS gavage was conducted in all the ORS groups in different doses according to their ages at 1 hour，12 hours or 24 hours after the onset of SE.The other groups were not given any treatment.The latency of seizure onset，changes in body weight，level of blood glucose at 8 hours after SE onset and finally the death rate of the rats were recorded.Results （1）The body weight of the rats with seizures was reduced by 5%-8%.（2）The mortality rate of the SE groups was high，especially at 24 hours after the SE onset，which was 40%in the young group and 57%in the adult group.（3）The blood glu-

【Key words】LiCl-pilocarpine；Statue epilepticus；Rat；Mortality