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        胃癌組織中Vav3表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及臨床意義研究

        2016-07-27 02:06:59檀碧波劉慶偉
        中國(guó)全科醫(yī)學(xué) 2016年21期
        關(guān)鍵詞:免疫組化胃癌淋巴結(jié)

        溫 轉(zhuǎn),王 曉,檀碧波,李 勇,劉慶偉,賈 楠

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        ·論著·

        胃癌組織中Vav3表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及臨床意義研究

        溫 轉(zhuǎn),王 曉,檀碧波,李 勇,劉慶偉,賈 楠

        目的探討胃癌組織中Vav3表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其臨床意義。方法選取2014年5月—2015年5月于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科住院并行腫瘤切除的胃癌患者92例。收集患者胃癌組織及癌旁正常組織(距腫瘤邊緣>3 cm,鏡檢無(wú)癌細(xì)胞)的石蠟標(biāo)本,采用免疫組化法檢測(cè)Vav3、RelA、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá);分析胃癌組織中Vav3表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征的關(guān)系;Vav3、RelA、PCNA、MMP-2表達(dá)之間的關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)分析。結(jié)果胃癌組織中Vav3的陽(yáng)性表達(dá)率為78.3%(72/92),高于癌旁正常組織的40.2%(37/92)(χ2=27.572,P<0.001);胃癌組織中RelA的陽(yáng)性表達(dá)率為88.0%(81/92),高于癌旁正常組織的52.2%(48/92)(χ2=28.242,P<0.001);胃癌組織中PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率為73.9%(68/92),高于癌旁正常組織的47.8%(44/92)(χ2=13.143,P<0.001);胃癌組中MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率為69.6%(64/92),高于癌旁正常組織的48.9%(45/92)(χ2=8.125,P=0.004)。Vav3強(qiáng)表達(dá)患者性別、年齡、浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況與Vav3弱表達(dá)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Vav3強(qiáng)表達(dá)患者腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度與Vav3弱表達(dá)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Vav3表達(dá)與RelA、PCNA、MMP-2表達(dá)均呈正相關(guān)(rs=0.338,P<0.001;rs=0.225,P=0.031;rs=0.267,P=0.010);RelA表達(dá)與PCNA表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.336,P=0.001);RelA表達(dá)與MMP-2表達(dá)無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(rs=0.176,P=0.094);PCNA表達(dá)與MMP-2表達(dá)無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(rs=0.188,P=0.072)。結(jié)論胃癌組織中Vav3存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象,Vav3表達(dá)增強(qiáng)與腫瘤轉(zhuǎn)移及進(jìn)展有關(guān)。Vav3可能通過(guò)調(diào)節(jié)RelA、PCNA、MMP-2表達(dá)而參與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移。

        胃腫瘤;腫瘤浸潤(rùn);腫瘤轉(zhuǎn)移;Vav3蛋白

        溫轉(zhuǎn),王曉,檀碧波,等.胃癌組織中Vav3表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及臨床意義研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2016,19(21):2509-2512,2521.[www.chinagp.net]

        WEN Z,WANG X,TAN B B,et al.Relation between Vav3 expression and tumor invasion and metastasis in gastric cancer tissue and the clinical significance[J].Chinese General Practice,2016,19(21):2509-2512,2521.

        胃癌的發(fā)病率和病死率一直居我國(guó)惡性腫瘤的前列,對(duì)人們健康危害極大。胃癌惡性程度較高,且進(jìn)展迅速,多數(shù)患者就診時(shí)已處于進(jìn)展期,存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。胃癌患者的治療效果常較差,即使接受手術(shù)和放化療等綜合治療,預(yù)后亦不理想,進(jìn)展期胃癌患者5年生存率約30%[2-3]。胃癌侵襲轉(zhuǎn)移迅速是多種基因共同作用的結(jié)果,但該領(lǐng)域研究一直無(wú)突破性進(jìn)展[4-5]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Vav3與惡性腫瘤關(guān)系密切,在乳腺癌、口腔癌、皮膚癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中異常表達(dá)[6-9]。也有研究發(fā)現(xiàn),Vav3在胃癌中存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象[10]。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn),在胃癌細(xì)胞株中Vav3表達(dá)增高,抑制Vav3表達(dá)后腫瘤細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力均明顯降低[11-12]。本研究為了解Vav3在胃癌組織中表達(dá)情況與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,檢測(cè)了臨床患者胃癌組織中Vav3、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白家族的主要成員RelA、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表達(dá)情況,并分析了Vav3與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及可能機(jī)制,從臨床實(shí)驗(yàn)角度為了解胃癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制提供依據(jù)。

        本研究要點(diǎn):

        Vav3具有原癌基因的特征,在胃癌等惡性腫瘤中表達(dá)增高。本課題組前期體外研究也發(fā)現(xiàn),Vav3在胃癌細(xì)胞株中表達(dá)增高,抑制該基因后腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡等過(guò)程均出現(xiàn)改變。但這些體外研究的證據(jù)與臨床組織結(jié)果有較大差距,故本研究以臨床組織為樣本,分析了Vav3與患者臨床病理特征的關(guān)系,并探討了Vav3與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因之間可能存在的調(diào)控關(guān)系。本研究從臨床角度證實(shí)了Vav3參與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移,也為今后的體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)試驗(yàn)的開(kāi)展提供了方向。

        1 資料與方法

        1.1一般資料選取2014年5月—2015年5月于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科住院并行腫瘤切除的胃癌患者92例。其中男68例,女24例;年齡21~86歲,平均年齡(59.7±10.5)歲;中高分化腺癌63例,低分化腺癌29例;術(shù)后分期:I~Ⅱ期28例,Ⅲ~Ⅳ期64例。納入標(biāo)準(zhǔn):有完整的臨床病理資料,術(shù)前未接受過(guò)放化療、生物治療等與腫瘤相關(guān)的治療;有明確的病理學(xué)診斷;通過(guò)手術(shù)切除了原發(fā)病灶,有完整的臨床病理資料。排除標(biāo)準(zhǔn):未行手術(shù)或手術(shù)未能切除原發(fā)病灶;合并其他惡性腫瘤;術(shù)前接受過(guò)放化療等治療;腫瘤復(fù)發(fā)再次手術(shù)的胃癌患者。本研究取得所有患者的知情同意,并經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

        1.2免疫組化法檢測(cè)Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)收集患者胃癌組織及癌旁正常組織(距腫瘤邊緣>3 cm,鏡檢無(wú)癌細(xì)胞)的石蠟標(biāo)本,采用免疫組化法檢測(cè)Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá),操作嚴(yán)格按免疫組化試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果均由兩位病理專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行評(píng)分。判斷標(biāo)準(zhǔn):Vav3、MMP-2以細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色或棕色顆粒為陽(yáng)性表達(dá);RelA、PCNA以細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或棕色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。參照文獻(xiàn)[13]對(duì)各蛋白的染色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分:0分記為陰性(-)、1~2分記為弱陽(yáng)性(+)、3~4分記為陽(yáng)性(++)、5~6分記為強(qiáng)陽(yáng)性(+++),(+)、(++)、(+++)均計(jì)為陽(yáng)性表達(dá);同時(shí)以(-)和(+)為弱表達(dá),(++)和(+++)為強(qiáng)表達(dá)。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析?;颊呶赴┙M織Vav3表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn);Vav3、RelA、PCNA、MMP-2表達(dá)之間的關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織及癌旁正常組織的表達(dá)胃癌組織中Vav3的陽(yáng)性表達(dá)率為78.3%(72/92),高于癌旁正常組織的40.2%(37/92),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.572,P<0.001);胃癌組織中RelA的陽(yáng)性表達(dá)率為88.0%(81/92),高于癌旁正常組織的52.2%(48/92),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.242,P<0.001);胃癌組織中PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率為73.9%(68/92),高于癌旁正常組織的47.8%(44/92),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.143,P<0.001);胃癌組織中MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率為69.6%(64/92),高于癌旁正常組織的48.9%(45/92),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.125,P=0.004,見(jiàn)圖1、2,本文圖1、2彩圖見(jiàn)本刊官網(wǎng) www.chinagp.net電子期刊相應(yīng)文章附件)。

        2.2Vav3表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征的關(guān)系Vav3強(qiáng)表達(dá)患者性別、年齡、浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況與Vav3弱表達(dá)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Vav3強(qiáng)表達(dá)患者腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度與Vav3弱表達(dá)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表1)。

        2.3相關(guān)性分析Vav3表達(dá)與RelA、PCNA、MMP-2表達(dá)均呈正相關(guān)(rs=0.338,P<0.001;rs=0.225,P=0.031;rs=0.267,P=0.010);RelA表達(dá)與PCNA表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.336,P=0.001);RelA表達(dá)與MMP-2表達(dá)無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(rs=0.176,P=0.094);PCNA表達(dá)與MMP-2表達(dá)無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(rs=0.188,P=0.072)。

        3 討論

        近年來(lái),胃癌的綜合治療已取得很大進(jìn)展,但胃癌患者總體生存率仍不能令人滿意[2-3]。胃癌存在進(jìn)展快、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、治療后易復(fù)發(fā)等特點(diǎn),均是導(dǎo)致其綜合治療效果不佳的主要原因。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),Vav3在胃癌細(xì)胞株存在表達(dá)增高現(xiàn)象,而抑制胃癌細(xì)胞株中Vav3表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲、耐藥能力均有積極影響[11-12,14]。本研究檢測(cè)了Vav3在胃癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,胃癌組織中Vav3陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁正常組織,表明Vav3與胃癌的發(fā)生有關(guān)。Vav3強(qiáng)表達(dá)患者腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度與Vav3弱表達(dá)間存在差異,提示Vav3在促進(jìn)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用,通過(guò)Vav3檢測(cè)可對(duì)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行預(yù)測(cè)。但本研究也發(fā)現(xiàn),Vav3與腫瘤浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。分析其原因一方面可能為胃癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,多種基因共同作用導(dǎo)致胃癌進(jìn)展,Vav3表達(dá)僅發(fā)揮了部分作用;另一方面可能為本研究樣本較少,還應(yīng)擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入探索。

        注:PCNA=增殖細(xì)胞核抗原,MMP-2=基質(zhì)金屬蛋白酶2

        圖1Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織中的表達(dá)(免疫組化染色,×400)

        Figure 1Expression of Vav3,RelA,PCNA,MMP-2 protein in gastric cancer tissue

        圖2 Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在癌旁正常組織中的表達(dá)(免疫組化染色,×400)

        Table 1Relationship between Vav3 expression in gastric cancer tissue and clinicopathologic features

        臨床病理特征Vav3強(qiáng)表達(dá)(n=72)Vav3弱表達(dá)(n=20)χ2值P值性別0.4910.484 男52(72.2)16(80.0) 女20(27.8)4(20.0)年齡(歲)1.1100.292 ≥6041(56.9)14(70.0) <6031(43.1)6(30.0)腫瘤分化程度5.4840.019 中高分化45(62.5)18(90.0) 低分化27(37.5)2(10.0)腫瘤直徑(cm)15.947<0.001 ≥547(65.3)3(15.0) <525(34.7)17(85.0)浸潤(rùn)深度4.3820.223 T14(5.6)4(20.0) T217(23.6)4(20.0) T317(23.6)5(25.0) T434(47.2)7(35.0)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度18.853<0.001 N05(6.9)5(25.0) N15(6.9)7(35.0) N238(52.8)6(30.0) N324(33.4)2(10.0)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移0.2250.635 M064(88.9)17(85.0) M18(11.1)3(15.0)

        注:T1=腫瘤侵犯黏膜或黏膜下層,T2=腫瘤侵犯固有肌層,T3=腫瘤穿透漿膜下層結(jié)締組織但未侵犯臟層腹膜或鄰近結(jié)構(gòu),T4=腫瘤侵犯漿膜或鄰近組織,N0=無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,N1=1~2個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,N2=3~6個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,N3=≥7個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,M0=無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,M1=存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移

        RelA是NF-κB蛋白家族的5個(gè)成員之一,NF-κB蛋白家族作為重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用[15-16]。PCNA存在于細(xì)胞核內(nèi),為DNA聚合酶δ的輔助蛋白,在增殖旺盛的腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)明顯增高,是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的蛋白質(zhì)[17-18]。MMP-2是基質(zhì)金蛋白酶(MMPs)家族的重要成員,對(duì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移有重要作用。目前認(rèn)為,MMP-2在腫瘤細(xì)胞破壞細(xì)胞間基質(zhì)及突破基底膜的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[19-20]。本研究結(jié)果顯示,胃癌組織中RelA、PCNA、MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁正常組織,表明這些蛋白在胃癌癌變過(guò)程中發(fā)揮了作用。

        有研究發(fā)現(xiàn),Vav3可增強(qiáng)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性[21]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),Vav3具有上調(diào)PCNA、MMP-2表達(dá)的作用[10-11]。本研究結(jié)果顯示,Vav3表達(dá)與RelA、PCNA、MMP-2表達(dá)均呈正相關(guān),提示Vav3可能通過(guò)調(diào)控這些蛋白促進(jìn)了腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。

        綜上所述,Vav3在胃癌組織中存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象,Vav3表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)存在關(guān)系,且與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的蛋白存在相關(guān)性。但本研究?jī)H對(duì)臨床發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象進(jìn)行了理論上的分析,結(jié)果可能存在較大的推測(cè)性質(zhì)。今后一方面要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,確定Vav3基因與胃癌的關(guān)系;另一方面還要結(jié)合本課題組前期體內(nèi)試驗(yàn)、體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果[10-11,13],將Vav3基因檢測(cè)推向臨床。

        作者貢獻(xiàn):溫轉(zhuǎn)進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、研究質(zhì)量控制、撰寫(xiě)論文、成文、審校等工作;李勇對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施、論文撰寫(xiě)等工作進(jìn)行指導(dǎo)和質(zhì)量控制,并對(duì)文章負(fù)責(zé);王曉、檀碧波、劉慶偉、賈楠進(jìn)行資料收集、試驗(yàn)實(shí)施及結(jié)果分析、統(tǒng)計(jì)處理等。

        本文無(wú)利益沖突。

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        (本文編輯:李婷婷)

        Relation Between Vav3 Expression and Tumor Invasion and Metastasis in Gastric Cancer Tissue and the Clinical Significance

        WENZhuan,WANGXiao,TANBi-bo,etal.

        DepartmentofHealthCare,theFourthAffiliatedHospital,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China

        ObjectiveTo investigate the relation between Vav3 expression and tumor invasion and metastasis in gastric cancer tissue and the clinical significance.MethodsWe collected the paraffin specimens of gastric cancer tissue and carcinoma side normal tissue from 92 patients who2=27.572,P<0.001).The positive expression rate of RelA in gastric cancer tissue was 88.0%(81/92),higher than 52.2%(48/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=28.242,P<0.001).The positive expression rate of PCNA in gastric cancer tissue was 73.9%(68/92),higher than 47.8%(44/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=13.143,P<0.001).The positive expression rate of MMP-2 in gastric cancer tissue was 69.6%(64/92),higher than 48.9%(45/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=8.125,P=0.004).There was no significant difference in gender,age,depth of infiltration,and distant metastasis between high expression of Vav3 and low expression of Vav3(P>0.05).There was significant difference in tumor differentiation degree,tumor diameter and the extent of lymph node metastasis between high expression of Vav3 and low expression of Vav3(P<0.05).The expression of Vav3 had positive correlation with the expression of RelA,PCNA and MMP-2(rs=0.338,P<0.001;rs=0.225,P=0.031;rs=0.267,P=0.010).The expression of RelA had positive correlation with the expression of PCNA(rs=0.336,P=0.001);the expression of RelA had no linear correlation with the expression of MMP-2(rs=0.176,P=0.094).The expression of PCNA had no linear correlation with the expression of MMP-2(rs=0.188,P=0.072).ConclusionThere is overexpression of Vav3 in gastric cancer tissue,and the increase of Vav3 is associated with tumor metastasis and progress.Vav3 is involved in the progress and metastasis of gastric cancer by regulating RelA,PCNA and MMP-2 expression.

        resection for gastric carcinoma in the Third Surgery Department of the Fourth Affiliated Hospital of Hebei Medical University from May 2014 to May 2015.The expressions of Vav3,RelA,PCNA and MMP-2 in gastric cancer tissue and carcinoma side normal tissue were detected by immunohistochemistry staining.The relation between Vav3 expression and clinical and pathological characteristics in gastric cancer tissue was analyzed.The relation among Vav3,RelA,PCNA and MMP-2 expression was investigated by Spearman correlation analysis.ResultsThe positive expression rate of Vav3 in gastric cancer tissue was 78.3%(72/92),higher than 40.2%(37/92) in carcinoma side normal tissue(χ

        Stomach neoplasms;Neoplasm invasiveness;Neoplasm metastasis;Vav3 protein

        國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072033,81372580);河北省科技支撐項(xiàng)目(14277779D);河北省衛(wèi)計(jì)委醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20150340)

        050011河北省石家莊市,河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院干部保健處(溫轉(zhuǎn)),外三科(檀碧波,李勇,劉慶偉,賈楠);河北省人民醫(yī)院醫(yī)療美容科(王曉)

        李勇,050011河北省石家莊市,河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科;E-mail:li_yong_hbth@126.com

        R 735.2

        A

        10.3969/j.issn.1007-9572.2016.21.004

        2015-11-17;

        2016-03-26)

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