陳明非 劉威 李巍

養(yǎng)殖場飲用水質量直接關系到畜禽健康及生產水平。養(yǎng)殖場飲用水受到微生物污染會引起畜禽腸道疾病反復發(fā)作。養(yǎng)殖場飲用水受到微生物污染的途徑很多：淺井水和地表水易受畜禽糞便污染；供水塔、貯水池及輸水管道長期不清洗會造成微生物滋生；飲水線中殘留有藥物載體（淀粉、葡萄糖等）會成為細菌長期滋生的基質。養(yǎng)殖場應該定期檢測飲用水的微生物指標，為開展飲水系統(tǒng)的清潔與消毒工作提供依據(jù)。

人的飲用水微生物指標由專業(yè)機構檢測，依據(jù)GB/T5750.12-2006《生活飲用水標準檢驗方法》，動物飲用水和人的飲用水微生物指標最好一致，但是養(yǎng)殖場飲用水易受污染，尤其是飲水線末端的水，因此養(yǎng)殖場飲用水微生物檢測需求多，頻繁送水到專業(yè)機構檢測既不現(xiàn)實又不經(jīng)濟。筆者多次對養(yǎng)殖場飲用水進行微生物檢測，總結出一套簡便易行的檢測方法，檢測結果與GB/T5750.12-2006的標準方法有很好的一致性，適于在養(yǎng)殖場或基層畜牧獸醫(yī)實驗室推廣應用。

1實驗原理

1.1評價指標

評價水質清潔度有三個重要指標：菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群。總大腸菌群指自然環(huán)境中的大腸菌群，用提高培養(yǎng)溫度的方法可以將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開，因此耐熱大腸菌群的檢出是水質被糞便污染的標志。

1.2指標限值

養(yǎng)殖場貯水池、水塔、飲水線入口三處水質的微生物學指標是：菌落總數(shù)

2實驗方法

2.1水樣采集

分別采集供水塔或蓄水池，飲水線入口，飲水線末端三處的水樣，裝入滅菌容器中。

2.2實驗器材

2.2.1儀器設備高壓蒸汽滅菌器，干熱滅菌箱，恒溫培養(yǎng)箱（2臺），水浴鍋，天平，菌落計數(shù)器。

2.2.2實驗耗材試管，平皿，吸管、三角燒杯、玻璃瓶等，耗材使用前要干熱滅菌。

2.3培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂，雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（常規(guī)乳糖蛋白胨培養(yǎng)液除蒸餾水外其他成份加倍），伊紅美藍培養(yǎng)基，這些培養(yǎng)基可以使用市售的成品，也可以按下面方法自制：

營養(yǎng)瓊脂：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15g，蒸餾水1000 mL，這些成分混合后，水浴加熱溶解，調整PH值為7.4-7.6，121℃高壓滅菌20 min。

雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：蛋白胨20g，牛肉膏6g，乳糖10g，氯化鈉10g，溴甲酚紫乙醇溶液（16g/L）2mL，蒸餾水1000mL，先將蛋白胨、牛肉膏、乳糖和氯化鈉溶于蒸餾水中，調整PH值為7.2-7.4，再加入2mL的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混勻，分裝于裝有倒立小試管的大試管中，每管10mL，115℃高壓滅菌20min。

伊紅美藍培養(yǎng)基：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氫二鉀2g，瓊脂25g，蒸餾水1000mL，伊紅水溶液（20g/L）20mL，美藍水溶液（5g/L）13mL，將蛋白胨，磷酸氫二鉀和瓊脂溶解于蒸餾水中，調整PH值為7.2-7.4，加入乳糖，115℃高壓滅菌20 min，冷卻至50℃左右加入伊紅和美藍溶液，混勻，傾注平皿。

2.4接種與培養(yǎng)

2.4.1水樣稀釋先充分混勻水樣，無菌操作吸取1mL水樣注入9mL滅菌生理鹽水中，混勻成1：10稀釋液，同法倍比稀釋1：100、1：1000、1：104、1：105、1：106的稀釋液。

2.4.2營養(yǎng)瓊脂接種用滅菌吸管分別吸取1mL未稀釋的水樣和各稀釋度的水樣，注入不同的滅菌平皿中，然后倒入15mL左右已融化并冷卻至45℃左右的營養(yǎng)瓊脂，立即輕輕旋搖平皿將水樣與培養(yǎng)基混勻，待培養(yǎng)基冷卻凝固后放入濕盒中在37℃培養(yǎng)48h后進行菌落計數(shù)。

2.4.3雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液接種取10管雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，每管無菌接種10mL未稀釋的水樣，接種后5管置于37℃培養(yǎng)24h，作為總大腸菌群檢測，5管置于44.5℃培養(yǎng)24h，作為耐熱大腸菌群檢測。

2.4.4伊紅美藍瓊脂接種取雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液產酸產氣管（37℃或44.5℃培養(yǎng)，培養(yǎng)液變黃，倒立小試管浮起，內含氣泡），用接種環(huán)蘸取少量培養(yǎng)液，在伊紅美藍瓊脂上進行細菌劃線分離接種，按接種的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的培養(yǎng)溫度分別置于37℃或44.5℃培養(yǎng)24h。

3結果判定

3.1菌落總數(shù)判定

選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的培養(yǎng)皿進行計數(shù)，如果所有稀釋度菌落數(shù)都>300，則計數(shù)最高稀釋度平皿菌落數(shù)；如果所有稀釋度的菌落數(shù)都<30，則計數(shù)最低稀釋度平皿菌落數(shù)；如果所有稀釋度平皿菌落數(shù)都不在30～300之間，則計數(shù)最接近30或300的平皿。計數(shù)后，再乘以稀釋倍數(shù)，得出每毫升水樣菌落總數(shù)（CFU/mL）。

3.2大腸菌群判定

觀察37℃培養(yǎng)的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，產酸產氣者為大腸菌群疑似陽性管，疑似陽性管經(jīng)37℃伊紅美藍瓊脂分離培養(yǎng)后觀察有紫黑色或邊緣淺紫紅色中心紫黑色，略帶金屬光澤的特征菌落，證實為陽性管，根據(jù)陽性管數(shù)，按表1判定每100mL水樣總大腸菌群最可能數(shù)（MPN/100mL）。

3.3耐熱大腸菌群判定

觀察44.5℃培養(yǎng)的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，產酸產氣者為耐熱大腸菌群疑似陽性管，疑似陽性管經(jīng)44.5℃伊紅美藍瓊脂分離培養(yǎng)后觀察有3.2中描述的特征菌落，證實為陽性管，同樣按表1判定每100mL水樣耐熱大腸菌群最可能數(shù)（MPN/100 mL）。

3.4結果

菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群三項指標低于1.2中的指標限值報告水樣微生物檢測合格，高于則報告不合格。

4總結

兩年來，筆者定期對某種豬場、某種禽場進行飲用水微生物指標檢測，指導兩場合理進行飲水系統(tǒng)的清洗和消毒，種豬場仔豬黃白痢、種禽場禽腹瀉病的發(fā)生率明顯下降，同時減少了預防性投藥。建議養(yǎng)殖場將飲用水微生物檢測做為疫病綜合防控措施之一開展起來。