劉建俠

(天津市西青醫(yī)院 檢驗(yàn)科，天津300380)

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Xpert MTB/RIF技術(shù)在基層定點(diǎn)醫(yī)院肺結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

劉建俠

(天津市西青醫(yī)院 檢驗(yàn)科，天津300380)

摘要：目的探討Xpert MTB/RIF技術(shù)在基層定點(diǎn)醫(yī)院肺結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取本院感染科門(mén)診2014年7月至2015年9月疑似肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本185份，分別進(jìn)行固體培養(yǎng)法、Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)和藥敏試驗(yàn)，比較Xpert MTB/RIF檢測(cè)和傳統(tǒng)檢測(cè)痰液標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及利福平耐藥性的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和Kappa值。結(jié)果痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性96份，陽(yáng)性率為51.9%；以固體培養(yǎng)法作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度94.8%，特異度為87.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為89.2%，陰性預(yù)測(cè)值為94.0%，Kappa值為0.826；以比例法藥敏試驗(yàn)作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度為86.7%，特異度為94.9%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為76.5%，陰性預(yù)測(cè)值為97.4%，Kappa值為0.774。結(jié)論Xpert MTB/RIF檢測(cè)快速，操作簡(jiǎn)便，硬件設(shè)施要求低，能夠有效檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥性，可在基層結(jié)核實(shí)驗(yàn)室大力推廣。

關(guān)鍵詞：Xpert MTB/RIF技術(shù)；結(jié)核分枝桿菌；利福平；耐藥性；敏感度；特異度

(ChinJLabDiagn,2016,20:0928)

肺結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的身體健康。肺結(jié)核是一種傳染性很強(qiáng)的空氣傳播疾病，在我國(guó)近幾年法定報(bào)告的乙類(lèi)傳染病中占第二位，因此，早期診斷對(duì)結(jié)核病的治療、預(yù)后和預(yù)防有著重要的臨床意義。目前固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法檢測(cè)周期較長(zhǎng)，因而急需尋求一種簡(jiǎn)便、快速、敏感度高的檢測(cè)方法[1]。同時(shí)，耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)對(duì)結(jié)核病的治療構(gòu)成新的挑戰(zhàn)，我國(guó)是27 個(gè)MDR-TB嚴(yán)重流行國(guó)家之一[2]，及時(shí)、準(zhǔn)確地獲得藥敏試驗(yàn)尤為重要。隨著新型分子診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，結(jié)核分枝桿菌/利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)(xpert mycobacterium tuberculosis/rifampin，Xpert MTB/RIF)受到廣大醫(yī)生和患者的關(guān)注[3]。GeneXpert平臺(tái)Xpert MTB/RIF試驗(yàn)的開(kāi)發(fā)在2009年完成，它被認(rèn)為是與結(jié)核斗爭(zhēng)中的一個(gè)重要突破，2010年WHO正式對(duì)Xpert MTB/RIF技術(shù)進(jìn)行推薦，2014年全球基金耐多藥結(jié)核病項(xiàng)目并為我國(guó)捐贈(zèng)了一批Gene Xpert 儀器，用于結(jié)核病和利福平耐藥性的檢測(cè)。為了探討Xpert MTB/RIF技術(shù)在基層定點(diǎn)醫(yī)院結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值，本文做如下研究。

1資料與方法

1.1一般資料

選取本院感染科門(mén)診2014年7月至2015年9月疑似為肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本185份，標(biāo)本采集前患者均未使用抗結(jié)核藥物進(jìn)行治療。

1.2儀器和設(shè)備

中性羅氏培養(yǎng)由天津市CDC提供，分枝桿菌藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基購(gòu)置于珠海貝索生物技術(shù)有限公司；Gene Xpert Dx儀器、Gene Xpert MTB/RIF Cartridge檢測(cè)盒為美國(guó)Cepheid公司產(chǎn)品。

1.3檢測(cè)方法

所有標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗(yàn)和Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)。

1.3.1固體培養(yǎng)法和比例法藥敏試驗(yàn)

采用簡(jiǎn)單法培養(yǎng)，具體操作根據(jù)《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)》[4]進(jìn)行。采用4%氫氧化鈉進(jìn)行處理，通過(guò)無(wú)菌操作的方法將標(biāo)本在改良羅氏培養(yǎng)基斜面上進(jìn)行接種，在37℃的條件下分別培養(yǎng)3天和7天后進(jìn)行觀察，然后再每1周觀察1次，對(duì)生長(zhǎng)情況進(jìn)行詳細(xì)記錄，直至培養(yǎng)至陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)，如果60天后無(wú)生長(zhǎng)，則判斷為陰性。在培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落時(shí)，進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本根據(jù)《結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[5]進(jìn)行。

1.3.2Xpert MTB/RIF檢測(cè)

嚴(yán)格按照Gene Xpert MTB/RIF Cartridge檢測(cè)盒的檢測(cè)程序進(jìn)行操作。選取1 ml標(biāo)本加入處理管中，根據(jù)標(biāo)本的形狀加入2倍標(biāo)本體積的樣品試劑標(biāo)本處理液，采用漩渦振蕩15-30 s，然后靜置15 min。將檢測(cè)盒打開(kāi)，吸取2 ml處理后的樣品緩慢加入到檢測(cè)盒中，再將檢測(cè)盒放置在檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)模塊中，將儀器打開(kāi)，進(jìn)行全自動(dòng)檢測(cè)，約2 h后反應(yīng)結(jié)束后，在檢測(cè)系統(tǒng)窗口下可直接讀取測(cè)試結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，敏感度、特異度、利福平耐藥率等計(jì)數(shù)資料用百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05說(shuō)明差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Xpert MTB/RIF檢測(cè)和金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)進(jìn)行一致性檢驗(yàn)(Kappa檢驗(yàn))。

2結(jié)果

2.1Xpert MTB/RIF對(duì)痰標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)結(jié)果

185份標(biāo)本中痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性96份，陽(yáng)性率為51.9%；以固體培養(yǎng)法作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB檢測(cè)的敏感度為94.8%，特異度為87.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為89.2%，陰性預(yù)測(cè)值為94.0%，Kappa值為0.826，提示兩者具有極好的一致性。見(jiàn)表1。

表1　　　　Xpert MTB/RIF對(duì)痰標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)

2.2Xpert MTB/RIF對(duì)利福平的耐藥性分析

通過(guò)固體培養(yǎng)法共得到96株陽(yáng)性菌株，通過(guò)菌種鑒定，2株為非結(jié)核分枝桿菌，其余94株均為結(jié)核分枝桿菌。94株菌株中，Xpert MTB/RIF技術(shù)和藥敏試驗(yàn)分別有17株和15株耐利福平，耐藥率分別為18.1%(17/94)和16.0%(15/94)，兩者比較無(wú)明顯差異(χ2=0.151，P>0.05)。以藥敏試驗(yàn)作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度為86.7%，特異度為94.9%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為76.5%，陰性預(yù)測(cè)值為97.4%，Kappa值為0.774，提示兩者具有較高的一致性。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　　　　Xpert MTB/RIF對(duì)利福平的耐藥性分析

3討論

結(jié)核病傳統(tǒng)的診斷方法有分枝桿菌培養(yǎng)和涂片鏡檢等，培養(yǎng)法是檢測(cè)分枝桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度和陽(yáng)性檢出率高于涂片法但是耗時(shí)較長(zhǎng)，需3周-8周才能出結(jié)果，具有一定的局限性；涂片鏡檢快速簡(jiǎn)單，但是對(duì)于含菌量較低的肺外標(biāo)本較難檢測(cè)出，而且容易漏診[6]。大量研究表明，痰液行抗酸染色陽(yáng)性率較低，這使得結(jié)核病痰液樣本結(jié)核菌數(shù)需要達(dá)到5 000條/ml以上才能夠檢測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果，確診為結(jié)核病[7,8]。并且涂片法無(wú)法區(qū)分非結(jié)核分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌。目前藥敏試驗(yàn)主要采用比例法或者絕對(duì)濃度法，但是檢測(cè)時(shí)間也比較長(zhǎng)，需要1個(gè)月，一般情況下會(huì)影響到患者的用藥時(shí)間。Xpert MTB/RIF技術(shù)是一種全新的體外診斷技術(shù)，將樣品準(zhǔn)備、定量PCR 擴(kuò)增和熒光擴(kuò)增檢測(cè)集于一身的核酸擴(kuò)增檢測(cè)分析系統(tǒng)[9]。而且該技術(shù)具有一次性試劑盒，能夠自動(dòng)完成檢測(cè)，比傳統(tǒng)的PCR方法更加簡(jiǎn)便快捷、生物安全性更高、檢測(cè)過(guò)程更不容易受到干擾、檢測(cè)時(shí)間僅需2個(gè)小時(shí)等優(yōu)點(diǎn)。正是基于上述優(yōu)點(diǎn)，WHO將Xpert MTB/RIF技術(shù)納入工作規(guī)劃中，推薦可以將此方法作為低中收入國(guó)家對(duì)結(jié)核病、耐藥性結(jié)核病感染檢測(cè)的主要檢測(cè)方法。

研究證實(shí)，Xpert MTB/RIF技術(shù)試劑盒能夠?qū)Y(jié)核桿菌和利福平耐藥相關(guān)的基因，能夠?qū)δ投嗨幓颊哌M(jìn)行初篩，敏感性和特異度較高，檢驗(yàn)周期也比較短，因而臨床上可作為首選檢測(cè)方法[10]。本研究結(jié)果顯示，以固體培養(yǎng)法作為金標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度為94.8%，特異度為87.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為89.2%，陰性預(yù)測(cè)值為94.0%，Kappa值為0.826，這與大部分研究結(jié)果[11]基本一致，提示Xpert MTB/RIF檢測(cè)和固體培養(yǎng)法具有極好的一致性，而且Xpert MTB/RIF檢測(cè)不但能夠提高敏感度，而且能夠縮短檢測(cè)時(shí)間。

以比例法藥敏試驗(yàn)作為金標(biāo)準(zhǔn)，其Xpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度為86.7%，特異度為94.9%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為76.5%，陰性預(yù)測(cè)值為97.4%，Kappa值為0.774，提示Xpert MTB/RIF檢測(cè)和藥敏試驗(yàn)具有較高的一致性。由于耐利福平分枝桿菌耐藥基因主要集中在81bp的核心突變區(qū)，Gene Xpert主要是通過(guò)對(duì)rpoB基因片段核心突變區(qū)的檢測(cè)對(duì)耐利福平結(jié)核病進(jìn)行診斷，因而Xpert MTB/RIF檢測(cè)在結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平的耐藥性的檢測(cè)上也具有明顯優(yōu)勢(shì)。利福平耐藥性很少單獨(dú)發(fā)生，通常表明對(duì)許多其他抗結(jié)核病藥物均有耐藥性,因此利福平耐藥作為耐多藥的參考指標(biāo)。

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文章編號(hào)：1007-4287(2016)06-0928-03

中圖分類(lèi)號(hào)：R521

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

作者簡(jiǎn)介：劉建俠(1970-)，女，副主任技師，從事微生物檢驗(yàn)。

(收稿日期：2015-11-24)

Application value of Xpert MTB/RIF technology in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in the primary pointed hospital

LIUJian-xia.

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiqingHospitalofTianjin,Tianjin300380,China)

Abstract:ObjectiveTo study the application value of Xpert MTB/RIF technology in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in the primary pointed hospital.MethodsDuring July 2014 to September 2015,185 cases of sputum samples from patients with suspected pulmonary tuberculosis in the infectious disease department were selected,they were given solid culture,MTB/RIF Xpert detection and drug sensitivity test.The sensitivity,specificity,positive predictive value,negative predictive value and Kappa value of Rifampin resistance and the culture situation of the Mycobacterium tuberculosis that detected from sputum samples by Xpert MTB/RIF technology and traditional technology were compared.Results96 sputum specimens were culture-positive,the positive rate was 51.9%;With solid culture as gold standard,the sensitivity of MTB/RIF Xpert detection was 94.8%,the specificity was 87.6%,the positive predictive value was 89.2%,the negative predictive value was 94.0%,the Kappa value was 0.826;With proportional drug sensitivity test as gold standard,the sensitivity of MTB/RIF Xpert detection was 86.7%,the specificity was 45.9%,the positive predictive value was 76.5%,the negative predictive value was 97.4%,the Kappa value was 0.774.ConclusionThe Xpert MTB / RIF technology is fast and easy to operate,and has a low demand for hardware,it can effectively detect Mycobacterium bacilli and rifampin resistance,and it can be popularized in the primary tuberculosis laboratory.

Key words:Xpert MTB/RIF technology;Mycobacterium tuberculosis;Rifampicin;Drug resistance;Sensitivity ;specificity