范偉光，孟　娟，蘇苗苗，張文娟，王　浩

(保定市傳染病醫(yī)院 1.檢驗科:2.皮膚科，河北 保定071000)

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結核感染T細胞檢測(T-SPOT.TB)應用于結核診斷的臨床意義

范偉光1，孟娟2，蘇苗苗1，張文娟1，王浩1

(保定市傳染病醫(yī)院 1.檢驗科:2.皮膚科，河北 保定071000)

由結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)感染所引發(fā)的結核病是全球人民都必須重視的疾病。根據(jù)相關數(shù)據(jù)，全世界有將近三分之一 的人感染了結核分枝桿菌，并且每年大約有兩百萬人死于結核[1]。早在2000年，國家衛(wèi)生部第4次結核流行病學調查中顯示，我國全年齡組結核分枝桿菌(MTB)感染率已達到44.5%,全國大約有5.5億人次感染了該菌，感染率高于全球人口感染率約1/3水平[2]。結核病是能治愈的，特別是早期進行治療可明顯降低病死率。近期，一種結核桿菌輔助診斷的新實驗方法——結核感染T細胞檢測(T-SPOT.TB)進如人們的視野。本研究擬對所有測試者，進行T-SPOT.TB試驗,同時進行結核菌素皮膚試驗(TST)、結核抗體檢測、痰菌涂片、細菌培養(yǎng)等，以探討T-SPOT.TB 對結核病的臨床診治的優(yōu)越性。

1材料與方法

1.1研究對象所有150例實驗組病例均選自2014年6月至2015年3月在保定市傳染病醫(yī)院住院、門診的結核患者。其中男82例，女68例，平均年齡為(35.75±16.23)歲，所有入選本研究的病例患者治療時間均小于1周，經臨床或細菌學檢查確診[3]。其中肺結核患者115例，肺外結核患者35例。健康對照組45例為排除結核病的健康體檢者，男25例，女20例，平均年齡為(33.01±12.54)歲。

1.2試劑和儀器主要試劑：結核感染T細胞檢測試劑盒(免疫斑點法)(T-SPOT.TB)購自上海復星長征醫(yī)學科學有限公司；卡介苗純蛋白衍生物(BCG-PPD)針劑購自成都生物制品研究所有限責任公司；結核分枝桿菌IgG抗體檢測試劑盒購自南京大淵生物技術工程有限公司。主要儀器： HFsafe-1500 CLASS Ⅱ TYPE B2生物安全柜、PBT X2蛋白芯片閱讀儀、VersaTREK細菌培養(yǎng)系統(tǒng)等。

1.3檢測方法所有試驗均嚴格按照試劑盒操作規(guī)程執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計處理應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用百分率(%)，采用χ2檢驗，P<0.05判定有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1各組間T-SPOT.TB 陽性率比較見表1。結果顯示，肺結核組、肺外結核組、正常對照組T-SPOT.TB的陽性率分別為86.1%、80.0%、6.7%。肺結核組和肺外結核組T-SPOT.TB的陽性率均顯著高于正常對照組T-SPOT.TB的陽性率，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=199.336,P<0.01)；而肺結核組和肺外結核組T-SPOT.TB的陽性率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.413,P>0.05)。

表1　各組間T-SPOT.TB陽性率的比較分析

注：*χ2=199.336,P<0.01，△χ2=0.413,P>0.05

2.2不同結核診斷試驗方法比較見表2。對方法的敏感性、特異性和Youden指數(shù)進行比較。結果顯示T-SPOT.TB檢測的敏感性顯著高于TST、痰菌涂片、細菌培養(yǎng)、結核抗體的敏感性，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=179.030,P<0.01)；T-SPOT.TB檢測特異性與TST、結核抗體比較無統(tǒng)計學意義(χ2=6.342,P>0.05)；T-SPOT.TB檢測的Youden指數(shù)為78.0，高于TST、痰菌涂片、細菌培養(yǎng)、結核抗體，說明T-SPOT.TB的準確度比其他幾種方法更可靠。

表2　　　　T-SPOT.TB與其他結核診斷試驗的敏感性、特異性等指標的比較

2討論

近年來，中國地區(qū)結核病發(fā)病上升趨勢十分明顯，已嚴重影響我國人民生活質量和健康保健。潛伏感染者和結核患者早發(fā)現(xiàn)，是控制結核病傳染源，切斷結核病傳播途徑的關鍵?，F(xiàn)有實驗室開展的項目有TST、痰菌涂片、細菌培養(yǎng)、結核抗體檢測、組織病理學檢查等。TST是目前各個衛(wèi)生行業(yè)都在廣泛應用的判斷結核病的免疫學試驗方法，TST強陽性反應則表示體內受到濃厚結核菌感染，患病機會多，是診斷結核病特異指征[4]。其優(yōu)點是操作簡單，成本低廉，但是TST也存在有假陽性或假陰性的可能。比如既往有卡介苗(B C G)接種史或者有非結核分枝桿菌感染均可導致TST出現(xiàn)假陽性，或者免疫系統(tǒng)功能不全和細胞免疫功能低下等情況，又可導致TST出現(xiàn)假陰性。痰菌涂片抗酸染色陽性對診斷肺結核有比較重要的臨床意義，該方法技術要求低，不需特殊儀器設備，但是非常容易漏檢，需要連續(xù)多次進行鏡檢，并且該方法敏感性過低，不能區(qū)分死菌和活菌，即使沒有發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌也不能說明沒有感染結核；細菌培養(yǎng)法是對結核分枝桿菌進行鑒定的十分準確的試驗方法，可進一步進行菌種鑒定和藥敏試驗，但是檢測時間過長，敏感性過低，即使應用目前較先進的全自動細菌液體培養(yǎng)基的方法，檢測時間也需要1-2周，對結核病早期的診斷和隨后的治療有一定影響。結核抗體檢測的特異性、敏感性也都較低，目前只作為快速診斷結核病的初篩實驗室方法。

T-SPOT.TB是應用酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT)方法對全血中的致敏T細胞二次接受特異性抗原刺激后釋放γ-干擾素的作相應的定量檢測。據(jù)相關實驗表明，CD8 T細胞也能分泌IFN-γ[5]。所以IFN-γ的水平能夠被用來當作診斷結核菌感染的重要指標[6]。T-SPOT.TB挑選了兩種早期分泌蛋白都來自RD1區(qū)編碼?？乖謩e為培養(yǎng)濾過蛋白-10(CFP-10)與早期抗原靶-6(ESAT-6)，T淋巴細胞被兩種抗原刺激分泌出特異性的細胞因子IFN-γ，由于CFP-10、ESAT-6只存在于結核分枝桿菌復合群中，而在所有BCG和大多數(shù)非致病性分枝桿菌(NTM)中都缺失[7]，因此T-SPOT.TB可提高診斷結核分枝桿菌感染的特異性。其檢測的敏感性也優(yōu)于細菌培養(yǎng)法。

本研究顯示肺結核組、肺外結核組、正常對照組T-SPOT.TB的陽性率分別為86.1%、80.0%、6.7%。肺結核組和肺外結核組T-SPOT.TB的陽性率均顯著高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=199.336,P<0.01)，說明T-SPOT.TB有較高的敏感性；而肺結核組和肺外結核組T-SPOT.TB的陽性率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.413,P>0.05)，說明T-SPOT.TB在肺外結核的診斷也具有一定優(yōu)勢。T-SPOT.TB檢測的敏感性顯著高于TST、痰菌涂片、細菌培養(yǎng)、結核抗體的敏感性，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=179.030,P<0.01)；T-SPOT.TB檢測的特異性也很高，為93.3%。T-SPOT.TB檢測的Youden指數(shù)為78.0，遠高于TST、痰菌涂片、細菌培養(yǎng)、結核抗體，說明T-SPOT.TB的準確度比其他幾種方法更可靠。

綜上所述，結核病明確診斷需要將臨床表現(xiàn)、影像學與病原免疫學檢查、組織病理學和對抗癆藥治療反應等結合起來進行評估。結核感染T細胞檢測聯(lián)合多種實驗室方法檢測結核，能有效提高結核診斷的準確率，是現(xiàn)有實驗室診斷結核疾病應用價值較高的方法。

參考文獻：

[1]Massimo Amicosante L,Massimo Ciccozzi4,et al.Rational use of immunodiagnostic tools for tuberculosis infection:guidelines and cost Effectiveness studies[J].New Microbiologica,2010,33:93.

[2]全國結核病流行病學抽樣調查技術指導組，全國結核病流行病學抽樣調查辦公室.2000年全國結核病流行病學抽樣調查報告[J].中國防癆雜志,2002,24(2)65.

[3]中華醫(yī)學會.臨床診療指南-結核病分冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:1-46，122.

[4]彭衛(wèi)生,王英年,肖成志.新編結核病學[M].第2版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2003:138-139．

[5]Tuuminent,Tavast E,Vaisanen R,et al.Assesssment of lmprecision in gamma interferon release assays for the detection of exposure to Mycobacterium tuberculosis[J].Clin Vaccine Immunol,2010,17(4):596．

[6]彭超,王洪海.結核分枝桿菌潛伏感染診斷方法的新進展[J].生物技術通訊，2010,21(1):107．

[7]文霞,柳愛華,寶福凱,等.結核感染T細胞檢測應用于結核病診斷的研究進展[J].中國病原生物學雜志,2011,7:542．

文章編號：1007-4287(2016)06-1013-02

(收稿日期：2015-07-25)