王景祥，鄭　柔，呂若谷，劉洪權(quán)

(1.吉林省柳河醫(yī)院，吉林 柳河135300；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 兒科，吉林 長春130033；3.吉林大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)院2015級研究生，吉林 長春130021；吉林大學(xué)第一醫(yī)院 耳鼻喉科，吉林 長春130021)

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鐵屎米酮對心肌缺血再灌注對大鼠心肌酶、心肌細胞凋亡和血液黏度的影響

王景祥1，鄭柔2，呂若谷3，劉洪權(quán)4*

(1.吉林省柳河醫(yī)院，吉林 柳河135300；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 兒科，吉林 長春130033；3.吉林大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)院2015級研究生，吉林 長春130021；吉林大學(xué)第一醫(yī)院 耳鼻喉科，吉林 長春130021)

鐵屎米酮(canthin-6 -one,Can) 是蕓香科花椒屬植物刺異葉花椒中生物堿[1]，可減慢心率、減輕心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷。對心肌的收縮性能有短時的抑制作用，有降低左室舒張末期舒張壓、收縮壓及平均動脈壓以及降低心肌耗氧量的作用[2，3]。為探討其藥理作用，本文采用心肌缺血再灌注損傷模型，從心肌酶、血液黏度及心肌細胞凋亡方面，觀察鐵屎米酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用。

1材料與方法

1.1動物健康雄性大鼠，體重200-230 g，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2藥品和試劑鐵屎米酮由吉林大學(xué)白求恩制藥廠提供，純度質(zhì)量在95.6%以上；舒血寧注射液神威藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)，LDH、AST測定試劑盒中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，SOD、MDA、GSH-Px測定試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，AnnexinV-FITC細胞凋亡試劑盒天津三箭生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3主要儀器EOS880型半自動血液生化分析儀意大利生產(chǎn)；BD Accuri C6流式細胞儀美國生產(chǎn)；UV755B分光光度計上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)，血液粘度計由北京普利生集團生產(chǎn)。

1.4方法將雄性大鼠隨機分假手術(shù)組、模型組、舒血寧(10.0 mg·kg-1)組及鐵屎米酮(20.0、40.0 mg·kg-1)組，每組10只。各組大鼠連續(xù)給藥一周后。用乙醚麻醉后，先用手術(shù)線在開胸部位做一荷包，自左側(cè)第4肋間開胸，暴露心臟，結(jié)扎左冠狀動脈前降支( LAD)，將心臟送回胸腔，擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，收攏荷包關(guān)閉胸腔。其余組缺血30 min后再次開胸，剪斷手術(shù)線使血流再通，120 min后，大鼠腹主動脈取血，3 000 r/min，離心10 min，吸取上清液，按試劑盒方法測定血清 LDH、AST含量。測血清MDA、SOD和GSH-Px活性。測定全血低切(10/s)、中切(60/s) 及高切黏度(120/s)。于實驗結(jié)束后立即取心尖及左室心肌 5 mm3，4℃冰0.9%氯化鈉注射液洗去血污。將心肌組織制成細胞懸液，加冷的磷酸鹽緩沖液洗兩次。1 ml Binding Buffer重懸細胞，300 g,4℃離心 10 min，棄上清，重復(fù)2次。將細胞重懸浮于1 ml Binding Buffer，細胞濃度為1×109/L，每管取100 μl加入10 μl Annexin-V-FITC輕輕混勻,室溫避光反應(yīng)10 min，加5 μl PI，輕輕混勻,室溫避光反應(yīng)5 min。加入PBS至500 μl，在1 h內(nèi)上機檢測，用BD Accuri C6流式細胞儀檢測細胞凋亡，

2結(jié)果

2.1鐵屎米酮對心肌缺血再灌注大鼠血清AST，LDH活性及心肌細胞凋亡指數(shù)的影響

模型組大鼠血清AST、LDH及心肌細胞凋亡指數(shù)均明顯高于假手術(shù)組(P<0.001)，表明心肌缺血再灌注損傷模型成立。鐵屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg劑量組及舒血寧組可明顯降低血清AST和LDH的含量(P<0.05、P<0.01)，鐵屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg劑量組及舒血寧組可明顯降低心肌細胞凋亡指數(shù)(P<0.05)。見表1。

2.2鐵屎米酮對心肌缺血再灌注大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px的影響

模型組血清MDA水平與假手術(shù)組相比較均明顯升高(P<0.001)，SOD、GSH-Px活性明顯降低(P<0.01)，說明心肌缺血再灌注損傷模型成立。鐵屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg劑量組及舒血寧組可明顯降低血清MDA的含量(P<0.01)，明顯升高血清SOD、GSH-Px含量(P<0.05)。見表2。

表1　鐵屎米酮對心肌缺血再灌注大鼠血清AST，LDH活性及心肌細胞凋亡指數(shù)的影響±s，n=10)

注：與假手術(shù)組比較，▲P<0.001，與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

表2　鐵屎米酮對心肌缺血再灌注大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px的影響

注：與假手術(shù)組比較,▲P<0.01 與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

2.3鐵屎米酮對心肌缺血再灌注大鼠血液粘度的影響

再灌注模型組的全血低、中、高切黏度均明顯高于假手術(shù)組。與模型組比較，鐵屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg劑量組及舒血寧組可明顯降低全血低、中、高切黏度(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3　鐵屎米酮對心肌缺血再灌注大鼠血液粘度的影響±s，n=10)

注：與假手術(shù)組比較，▲P<0.05 與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

3討論

心肌缺血再灌注損傷細胞膜和線粒體損傷，在自由基作用下鈣超載，細胞膜通透性增加,組織壞死,心肌細胞各種酶外漏而釋放入血，引起血中AST、LDH、MDA、SOD、GSH-Px含量變化。因此，血清AST、LDH、MDA、SOD、GSH-Px的活性變化可作為觀察心肌缺血再灌注損傷程度及藥物抗心肌缺血再灌注損傷療效和預(yù)后的一些重要指標(biāo)[4]。細胞凋亡是主動性細胞死亡形式，有許多因素參與細胞凋亡的調(diào)控，心肌缺血再灌注過程均可誘導(dǎo)細胞凋亡。紅細胞聚集性主要是由紅細胞數(shù)目及其聚集性和變形性決定的。聚集性越大，全血低切黏度越大[5]。

本實驗用半自動血液生化分析儀和755分光光度計分別測定血清LDH、AST、MDA、SOD、GSH-Px的活性。用血液粘度計測定血液低、中、高粘度，用BD Accuri C6流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡指數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，再灌注模型組心肌酶、血液粘度、細胞凋亡指數(shù)發(fā)生明顯變化，提示模型建立成功。 鐵屎米酮明顯降低AST、LDH和MDA的含量，升高血清SOD、GSH-Px含量，明顯降低心肌細胞凋亡指數(shù)，明顯降低血液低、中、高粘度，改善其血液流變學(xué)。提示鐵屎米酮能減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷程度，其機制可能通過改善血液的粘稠度達到保護目的，表明鐵屎米酮對心肌缺血再灌注損傷具有明顯保護作用。

參考文獻：

[1]朱克剛,丁牧良,屠治本,等.刺異葉花椒的化學(xué)成分研究[J].武漢植物學(xué)研究,1987,5(1):25.

[2]石明健,劉惟莞，胡嵐，等.鐵屎米酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].藥學(xué)學(xué)報，1999，34(3)：161.

[3]石明健，劉惟莞，宛小平.鐵屎米酮對家兔血流動力學(xué)的影響[J].湖北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1995,16(1):10.

[4]翟玉榮，黃燮南，于小鳳，等.注射用苦碟子對心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌酶和血黏度的影響[J].中藥藥理與臨床，2008，24(2)：53.

[5]岳海濤，李金成，呂銘洋，等.紅花注射液對大鼠血栓形成的影響及其作用機制[J].中草藥，2011,42(8)：1585.

*通訊作者

文章編號：1007-4287(2016)06-0896-02

(收稿日期：2015-11-31)