沈玉玨

(河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001)

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黃芪多糖對(duì)H2O2所致乳鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響

沈玉玨

(河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001)

[摘要]目的研究黃芪多糖對(duì)H2O2所致乳鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響，并探討其可能作用機(jī)制。方法分離并培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞72 h后分為空白對(duì)照組、H2O2組、黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組、黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組、黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組，每組設(shè)10個(gè)復(fù)孔。每組給予相應(yīng)干預(yù)24 h后，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)]活性，采用氧敏感熒光探針DCFH-DA檢測(cè)氧自由基(ROS)含量，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)培養(yǎng)液中心肌酶[谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脫氫酶(LDH)]和丙二醛(MDA)含量，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況并計(jì)算凋亡率，采用免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表達(dá)情況并進(jìn)行半定量分析。結(jié)果與H2O2組比較，黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞存活率及細(xì)胞中SOD、GSH-Px、CAT活性顯著升高(P均<0.05)，ROS含量顯著降低(P<0.05)，培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH和MDA含量及細(xì)胞凋亡率、NF-kB蛋白表達(dá)量均顯著降低(P均<0.05)；黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞存活率及細(xì)胞中SOD、GSH-Px活性均顯著高于黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組(P均<0.05)，CPK、MDA含量及細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)量均顯著低于黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組(P均<0.05)。結(jié)論黃芪多糖可能通過(guò)提高心肌細(xì)胞存活率、改善抗氧化酶活性、提高ROS清除能力、降低心肌酶含量、抑制細(xì)胞凋亡、下調(diào)NF-kB蛋白表達(dá)而對(duì)H2O2誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷起保護(hù)作用，且高劑量效果更好。

[關(guān)鍵詞]黃芪多糖；H2O2；心肌細(xì)胞；氧化應(yīng)激

心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷是影響急性心肌梗死患者溶栓、介入手術(shù)等手段治療效果的重要因素之一，其病理機(jī)制非常復(fù)雜，其中氧化應(yīng)激損傷是最重要的病理基礎(chǔ)之一[1]，為研發(fā)抑制缺血再灌注損傷的新型藥物提供了新的思路。黃芪多糖是我國(guó)傳統(tǒng)中藥黃芪的主要活性成分之一，具有抗氧化、抗凋亡、抗腫瘤等多種藥理學(xué)作用[2-5]。本研究觀察了黃芪多糖對(duì)H2O2所致乳鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響，并探討了其可能作用機(jī)制，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1實(shí)驗(yàn)資料

1.1藥物與試劑黃芪多糖，西安沃森生物科技有限公司，批號(hào)：20131205； DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清，美國(guó)Gibco公司；二甲基亞砜(DMSO)、甲基四唑藍(lán)(MTT，美國(guó)Sigma公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒，北京博奧森生物技術(shù)有限公司；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；氧自由基(ROS) 檢測(cè)試劑盒、AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞核因子-κB(NF-κB)單克隆抗體，碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性SD乳鼠(1～3 d)，購(gòu)自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(冀)2008-1-003，動(dòng)物合格證號(hào)：150314012。

1.3主要儀器SW-4T-2F潔凈工作臺(tái)，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠； NU-4850E型CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)Nu Aire公司；VCX750型超聲波細(xì)胞破碎儀，美國(guó)SONICS公司；UV762型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海楚定分析儀器有限公司；BS-300型全自動(dòng)生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；iMark型酶標(biāo)儀、FACS Aria型流式細(xì)胞儀，美國(guó)BD公司；DYY-11 型多用電泳儀、JY-SCZ2電泳槽，北京六一儀器廠。

1.4乳鼠心肌細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與分組參照文獻(xiàn)[6]方法，無(wú)菌環(huán)境下開胸取心臟并剪取心室組織，剪碎，加入0.1%胰酶后于37 ℃振蕩消化6 min，去上清、沉淀，繼續(xù)用0.1%胰酶于37 ℃振蕩消化6 min，如此循環(huán)直至組織碎塊消化完畢，收集消化上清液，1 500 r/min離心10 min，取沉淀，加入心肌細(xì)胞培養(yǎng)基(10%胎牛血清 DMEM，內(nèi)含105IU/L的青霉素和鏈霉素)，吹打均勻，壁立 1.5 h。收集未貼壁細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞至 6×108L-1，接種于35 mm培養(yǎng)器皿中，37 ℃、5% CO2、100%濕度培養(yǎng)72 h后，將狀態(tài)良好的原代乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、H2O2(200 μmol/L)組、黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組、黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組、黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組，每組設(shè)10個(gè)復(fù)孔，給予相應(yīng)干預(yù)。

1.5檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1細(xì)胞存活率干預(yù)24 h后，將細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板(n=6)，每孔加入20 μL MTT溶液(5 mg/mL)，37 ℃孵育4 h后棄上清，每孔加入150 μL DMSO振蕩15 min，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)490 nm處OD值，然后計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率(%)=實(shí)驗(yàn)組OD值/空白對(duì)照組OD值×100%。

1.5.2細(xì)胞中SOD、GSH-Px、CAT活性干預(yù)24 h后，棄培養(yǎng)基取細(xì)胞，每孔加入2 mL PBS溶液后冰浴中破碎處理30 s，低溫離心取上清液，通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)平行測(cè)定各組細(xì)胞裂解液中SOD、GSH-Px、CAT活性。

1.5.3細(xì)胞中ROS含量去培養(yǎng)液，加入氧敏感熒光探針DCFH-DA(10 μmol/L)，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20 min后，經(jīng)無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液沖洗3次，然后通過(guò)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.4培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH和MDA含量干預(yù)24 h后，分別取各組培養(yǎng)液并按照各試劑盒操作方法進(jìn)行處理，然后通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀平行測(cè)定各組細(xì)胞培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH含量，并紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定各組培養(yǎng)液中MDA含量。

1.5.5細(xì)胞凋亡情況及細(xì)胞凋亡率干預(yù)24 h后，使用0.25%胰酶進(jìn)行消化，離心棄上清液，經(jīng)PBS溶液沖洗2次后，按照AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒操作方法步驟依次進(jìn)行處理，避光孵育10 min后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，觀察各組細(xì)胞凋亡狀況并在流式二維圖中計(jì)算凋亡率。

1.5.6細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)情況取1.5.2制備的細(xì)胞裂解提取液，經(jīng)12 000 r/min低溫離心10 min后取沉淀，行BCA法蛋白定量，變性后上樣，經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、春紅溶液染色后，室溫下5%脫脂奶粉封閉2 h，一抗(NF-κB，β-actin)4 ℃過(guò)夜；洗膜，二抗室溫?fù)u床上孵育1 h后經(jīng)ECL顯色，實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用Quantity One軟件進(jìn)行分析。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用表示，組間均數(shù)比較采用One-way ANOVA進(jìn)行分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組心肌細(xì)胞存活率比較空白對(duì)照組心肌細(xì)胞存活率為(96.8±4.6)%，H2O2組為(45.1±5.9)%，黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組為(50.7±6.8)%，黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組為(68.4±7.5)%，黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組為(84.0±10.3)%。H2O2組乳鼠心肌細(xì)胞存活率明顯低于空白對(duì)照(P<0.05)；黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞存活率明顯高于H2O2組(P<0.05)，黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞存活率明顯高于黃芪多糖40 μmol/L+ H2O2組(P<0.05)。

2.2各組心肌細(xì)胞中SOD、GSH-Px、CAT活性比較H2O2組心肌細(xì)胞中SOD、GSH-Px、CAT活性均顯著低于空白對(duì)照組(P均<0.05)；黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組SOD、GSH-Px、CAT活性均顯著高于H2O2組(P均<0.05)；黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組SOD、GSH-Px活性顯著高于黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組(P均<0.05)，而2組間CAT活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　各組心肌細(xì)胞中SOD、GSH-Px、CAT

注：①與空白對(duì)照組比較，P<0.05；②與H2O2組比較，P<0.05；③與黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組比較，P<0.05。

2.3各組心肌細(xì)胞中ROS含量比較通過(guò)氧敏感熒光探針DCFH-DA檢測(cè)及流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，H2O2組ROS含量明顯高于空白對(duì)照組；經(jīng)黃芪多糖干預(yù)24 h后，H2O2誘導(dǎo)損傷乳鼠心肌細(xì)胞ROS含量明顯低于H2O2組。見(jiàn)圖1～10。

圖1　DCFH-DA檢測(cè)空白對(duì)照組心肌細(xì)胞ROS含量

圖2　DCFH-DA檢測(cè)H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量

圖3　DCFH-DA檢測(cè)黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量

圖4　DCFH-DA檢測(cè)黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量

圖5　DCFH-DA檢測(cè)黃芪多糖 80 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量

圖6　空白對(duì)照組心肌細(xì)胞ROS含量(流式細(xì)胞儀)

圖7　H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量(流式細(xì)胞儀)

2.4各組心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH和MDA含量比較H2O2組心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH和MDA含量均顯著高于空白對(duì)照組(P均<0.05)；黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組AST、CPK、LDH和MDA含量均明顯低于H2O2組(P<0.05)；黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組CPK、MDA含量均顯著低于黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組(P均<0.05)，而2組間AST、CPK、LDH含量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2。

圖8　黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量(流式細(xì)胞儀)

圖9　黃芪多糖 40 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量(流式細(xì)胞儀)

圖10　黃芪多糖 80 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞ROS含量(流式細(xì)胞儀)表2　各組心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH和MDA含量比較

組別nAST/(IU/mL)CPK/(IU/mL)LDH/(IU/L)MDA/(nmol/L)空白對(duì)照組1022.4±5.01.4±0.4518.5±73.80.21±0.04H2O2組1036.1±7.6①2.8±0.6①946.2±136.4①0.49±0.07①黃芪多糖20μmol/L+H2O2組1033.5±8.22.4±0.7871.6±142.80.42±0.09黃芪多糖40μmol/L+H2O2組1028.0±5.7②2.0±0.6②③748.3±115.0②0.31±0.06②③黃芪多糖80μmol/L+H2O2組1024.1±5.2②1.7±0.4②672.5±88.7②0.23±0.05②

注：①與空白對(duì)照組比較，P<0.05；②與H2O2組比較，P<0.05；③與黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組比較，P<0.05。

2.5各組心肌細(xì)胞凋亡情況空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為(4.5±1.7)%，H2O2組為(57.9±8.2)%，黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組為(48.6±7.4)%，黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組為(35.0±5.8)%，黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組為(17.1±5.2)%。H2O2組細(xì)胞凋亡率明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)；黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞凋亡率均顯著低于H2O2組(P均<0.05)；黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞凋亡率明顯低于黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組(P<0.05)。各組心肌細(xì)胞凋亡情況見(jiàn)圖11～15。

圖11　空白對(duì)照組心肌細(xì)胞凋亡情況

圖12　H2O2組心肌細(xì)胞凋亡情況

圖13　黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞凋亡情況

圖14　黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞凋亡情況

圖15　黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞凋亡情況

2.6各組心肌細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)情況空白對(duì)照組心肌細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)量為0.17±0.04，H2O2組為0.51±0.09，黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組為0.42±0.10，黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組為0.36±0.07，黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組為0.24±0.06。H2O2組心肌細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)量均顯著低于H2O2組(P均<0.05)；黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組心肌細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)量顯著低于黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組(P<0.05)。見(jiàn)圖16。

A為空白對(duì)照組；B為H2O2組；C為黃芪多糖20 μmol/L+H2O2組；D為黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組；E為黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組圖16　各組心肌細(xì)胞中NF-kB蛋白表達(dá)情況(Western blot)

3討論

隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，冠心病及其所引發(fā)的急性心肌梗死發(fā)病率逐年上升，已經(jīng)發(fā)展成為危害人類生命健康的主要疾病之一。目前臨床上主要采取溶栓、介入支架等手段恢復(fù)血流供應(yīng)，從而挽救患者生命，但再灌注損傷嚴(yán)重影響患者愈后。近年來(lái)研究表明缺血再灌注后隨著氧的大量涌入，ROS大量生成和過(guò)剩而誘發(fā)的廣泛氧化應(yīng)激損傷是再灌注損傷關(guān)鍵病理基礎(chǔ)[1]。

細(xì)胞中ROS過(guò)剩是機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激損傷的病理基礎(chǔ)，所以ROS含量檢測(cè)成為反映機(jī)體氧自由基損傷最直接的指標(biāo)[7]。正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)生成的ROS能夠在SOD的催化作用下還原生成H2O2，并在GSH-Px或CAT催化作用下進(jìn)一步還原生成對(duì)人無(wú)害的H2O和O2[8-9]，因此SOD、GSH-Px、CAT共同構(gòu)成了機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)，它們的活性直接反映機(jī)體抗氧化能力；此外，血清中脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物MDA的含量也能夠間接反映細(xì)胞損傷程度。正常生理狀態(tài)下，血清中心肌酶含量非常低，而當(dāng)細(xì)胞膜受氧自由基攻擊而受損后將導(dǎo)致細(xì)胞中AST、CPK、LDH迅速釋放入血，導(dǎo)致血清中AST、CPK、LDH活性陡然增高，因此血清中三者的活性水平能夠敏感地反映心肌細(xì)胞受損程度。

氧化應(yīng)激損傷是細(xì)胞凋亡非常重要的誘發(fā)因素之一，而NF-κB為多效能核轉(zhuǎn)錄因子，被稱為連接氧化應(yīng)激損傷和細(xì)胞凋亡的“橋梁”[10-11]。生理狀態(tài)下，NF-κB以無(wú)活性形式存在于胞質(zhì)中，而當(dāng)細(xì)胞受到ROS攻擊時(shí)，NF-κB將被活化并暴露出核定位信號(hào)而進(jìn)入胞核內(nèi)；Zhang 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，活化NF-κB能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化和浸潤(rùn)，誘導(dǎo)促凋亡信號(hào)釋放而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡；Li 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，被活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后能夠與DNA的相應(yīng)位點(diǎn)結(jié)合，參與調(diào)控下游相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，包括誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)，而iNOS可誘導(dǎo)NO生成繼而引發(fā)細(xì)胞凋亡，證實(shí)NF-κB激活與氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與H2O2組比較，黃芪多糖40 μmol/L+H2O2組和黃芪多糖80 μmol/L+H2O2組細(xì)胞存活率及細(xì)胞中SOD、GSH-Px、CAT活性顯著升高，ROS含量顯著降低，培養(yǎng)液中AST、CPK、LDH和MDA含量及細(xì)胞凋亡率、NF-κB蛋白表達(dá)量均顯著降低。提示黃芪多糖可以能通過(guò)提高心肌細(xì)胞存活率、改善抗氧化酶活性、提高ROS清除能力、降低心肌酶含量、抑制細(xì)胞凋亡、下調(diào)NF-κB蛋白表達(dá)，從而對(duì)H2O2誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷起保護(hù)作用，且高劑量效果更好。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Lamendola P,Di Monaco A,Barone L,et al. Mechanisms of myocardial cell protection from ischemia reperfusion injury and potential clinical implications[J]. Ital Cordial (Rome),2009,10(1):28-36

[2]Chen HL,Li DF,Chang BY,et al. Effects of Chinese herbal polysaccharides on the immunity and growth performance of young broilers[J]. Poult Sci,2003,82(3):364-370

[3]李紅法,郭松波,滿淑麗,等. 乙醇分級(jí)沉淀提取黃芪多糖及其理化性質(zhì)和抗氧化活性研究[J]. 中國(guó)中藥雜志,2015,40(11):2112-2116

[4]于勝男,曹瓊丹,魯美麗,等. 黃芪多糖對(duì)糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響[J]. 中藥藥理與臨床,2015,31(4):102-105

[5]巢蕾,周杰,朱萱萱,等. 黃芪多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞系MKN45的生長(zhǎng)抑制作用及細(xì)胞周期的影響[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2012,30(11):2474-2477

[6]李澎,王建農(nóng),盧樹杰,等. 山楂葉原花青素對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)中藥雜志,2009,34(1):96-99

[7]Misra MK,Sarwat M,Bhakuni P,et al. Oxidative stress and ischemic myocardial syndromes[J]. Med Sci Monit,2009,15(10):209-219

[8]Lartigue A,Burlat B,Coutard B,et al. The megavirus chilensis Cu,Zn-superoxide dismutase: the first viral structure of a typical CCS-independent hyperstable dimeric enzyme[J]. J Virol,2014,2588(14):254-261

[9]Jin Y,Liu K,Peng J,et al. Rhizoma dioscoreae nipponicae polysaccharides protect HUVECs from H2O2-induced injury by regulating PPARγ factor and the NADPH oxidase/ROS-NF-κB signal pathway[J]. Toxicol Lett,2014,232(1):149-158

[10] 陳良金,石孟瓊,賀海波,等. 珠子參總皂苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2012,17(8):860-867

[11] 楊帆,王永青,彭余江,等. NF-κB在顱腦損傷后繼發(fā)氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系研究[J]. 浙江創(chuàng)傷外科,2014,19(6):899-902

[12] Zhang Q,Huang WD,Lv XY,et al. Ghrelin protects H9c2 cells from hydrogen peroxide-induced apoptosis through NF-κB and mitochondria-mediated signaling[J]. Eur J Pharmacol,2011,654(2):142-149

[13] Li Q,Xu LS. Mechanism of destruction of islet cells by exogenous nitric oxide[J]. Med J Natl Def Force Northwest China,2002,23(5):361-363

Effects of Astraglus Polysaccharides on oxidative stress injury in neonatal rat cadiocytes induced by H2O2

SHEN Yujue

(Handan Central Hospital, Handan 056001, Hebei, China)

Abstract:Objective It is to investigate the effects of Astraglus Polysaccharides (APS) on oxidative stress injury of neonatal rat cadiocytes induced by H2O2. Methods Cadiocytes of neonate rat was separated and cultivated for 72 hours and then were divided into six groups: normal control group, H2O2 group, 20 μmol/L APS+H2O2 group, 40 μmol/L APS+H2O2 group, 80 μmol/L APS+H2O2 group, each group had 10 multiple pores. After intervention for twelve hours with respective drugs, the survival rate was detected by MTT; the activity of SOD, CAT, GSH-Px in cardiomyocytes were determined by ultraviolet-visible spectrophotometer; and the content of ROS was detected by fluorescence probe technique, the content of AST, CPK, LDH and the content of MDA in culture medium were detected by automatic biochemistry analyzer; the cardiomyocytes apoptosis was observed by flow cytometry and the apoptosis rate was calculated; the expression of NF-κB proten was detected by Western blot and Semi-quantitative analysized. Results Compared with H2O2 group, the survival rate in APS(40, 80 μmol/L)+ H2O2 groups were significantly increased; the activity of SOD, CAT in cardiomyocytes were significantly increased and the content of ROS were significantly decreased; the content of AST, CPK, LDH and MDA in culture medium were significantly decreased; the cardiomyocytes apoptosis were improved and the apoptosis rate were significantly decreased, the expression of NF-κB protein was significantly down-regulated, all of the difference were significant(P<0.05, P<0.01). Conclusion APS had inhibitive effects on oxidative stress of neonatal rat cadiocytes induced by H2O2, which perhaps related to its effects of improving the activity of antioxidase, enhancing the free radical scavenging ability, down-regulating the expression of NF-κB protein, depressing apoptosis.

Key words:Astraglus Polysaccharides; H2O2; cardiomyocytes; oxidative stress

[作者簡(jiǎn)介]沈玉玨，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事心內(nèi)科疾病研究工作。

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.19.010

[中圖分類號(hào)]R-332

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)19-2083-06

[收稿日期]2015-12-10