□ 周至均 王麗蘭 眉山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

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高效液相色譜法測(cè)定泡菜中姜黃素

□ 周至均 王麗蘭 眉山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

摘 要：本實(shí)驗(yàn)建立了二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定泡菜中姜黃素的高效液相色譜法。實(shí)驗(yàn)中采用XDB-C8柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）分離，以4%乙酸-甲醇為流動(dòng)相，梯度洗脫，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為430 nm，整個(gè)分離過(guò)程在12 min內(nèi)完成。該方法加標(biāo)回收率范圍：93.0%～98.0%，方法檢出限：1 mg/kg。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；泡菜；姜黃素

姜黃素作為食品著色劑的一種天然色素，是被我國(guó)批準(zhǔn)使用的食品添加劑。隨著我國(guó)泡菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展壯大，姜黃素被添加到泡菜產(chǎn)品中以增強(qiáng)感官品質(zhì)，但在《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2 760-2014）中明確規(guī)定了醬腌菜中姜黃素最大限量為0.01 g/kg，。我國(guó)目前尚未制定食品中姜黃素的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，為了泡菜產(chǎn)業(yè)更好地健康發(fā)展，因此建立一種快速、簡(jiǎn)便、高靈敏度的檢測(cè)方法非常重要，本文采用液相色譜法測(cè)定泡菜中的姜黃素。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）、天平、超聲波清洗儀、離心機(jī)、真空抽濾器、漩渦混合器。

甲醇：色譜純

無(wú)水乙醇：分析純

4%乙酸：量取40 mL乙酸于1000 mL容量瓶中，用純水定容至刻度。

姜黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.100 0 g姜黃素（＞99%），用甲醇溶解并定容至100 m L容量瓶中，姜黃素含量為1 mg/mL；再吸取5.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50 m L容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成姜黃素含量為100 μg/mL中間液；最后用甲醇梯度稀釋成0.5、1 .0、5.0、1 0.0、20.0、30.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 色譜條件

色譜柱：XDB-C8（4.6 mm×150 mm，5 μm，Agilent）；梯度洗脫，流速：1 mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器（DAD），檢測(cè)波長(zhǎng)430 nm。

2 樣品處理

稱(chēng)取5 g粉碎后的泡菜樣品（精確至0.01 g）于25 mL比色管中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，漩渦混合1 min，放入超聲波清洗器超聲提取15 min，取出放入離心機(jī)中離心10 min（轉(zhuǎn)速不低于4000 r/min），取上清液過(guò)水系微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾后，供HPLC測(cè)定。

3 結(jié)果與分析

3.1 流動(dòng)相和提取試劑的選擇

姜黃素易溶解于甲醇、乙醇、乙酸等試劑中，故采用4%乙酸水溶液和甲醇作為流動(dòng)相。因泡菜樣品基質(zhì)比較復(fù)雜，故采用梯度洗脫（見(jiàn)表1），以排除其他雜質(zhì)干擾，得到更好的分離效果。本實(shí)驗(yàn)采用無(wú)水乙醇提取與用甲醇提取進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取效果無(wú)明顯差異，都能得到較好回收率。而用乙醇提取，既可降低試驗(yàn)成本，又能避免使用甲醇對(duì)身體造成毒害。

表1 流動(dòng)相及梯度表

3.2 色譜圖

在1.2色譜條件下，得到姜黃素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（如圖1所示），走樣時(shí)間12 min，標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間6.1 min左右。

圖1 姜黃素LC標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

如圖2所示，在190～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)姜黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示最大吸收波長(zhǎng)為430 nm處，且在430 nm處干擾較小，因此選擇波長(zhǎng)為430 nm進(jìn)行檢測(cè)。

圖2 姜黃素光譜圖

3.4 線(xiàn)性范圍和檢出限

在選定的色譜條件下，進(jìn)樣20 μL，以姜黃素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)表2與圖3，回歸方程為y= 1 15.24x + 11.508，相關(guān)系數(shù)R2=9999，說(shuō)明在0.5～30 μg/mL范圍內(nèi)存在良好線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)信號(hào)與噪聲比值等于10時(shí)作為定量檢出限，得出本方法檢出限為：1.0 mg/kg。

3.5 回收率與精密度

選擇泡菜樣品，添加3種濃度標(biāo)準(zhǔn)品，分別按照以上樣品處理方法提取，測(cè)定姜黃素的質(zhì)量濃度、加標(biāo)回收、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表3。

表2 濃度與峰面積線(xiàn)性

圖3 姜黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

表3 回收率與精密度（n=6）

4 結(jié) 語(yǔ)

用高效液相色譜法測(cè)定姜黃素操作簡(jiǎn)單、快速。高效液相色譜法靈敏度高，重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度好，具有檢測(cè)成本低廉，所用試劑毒性較低等優(yōu)點(diǎn)，可為泡菜中姜黃素的檢測(cè)提供參考。

主要參考文獻(xiàn)

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)（GB 2760-2014）［S］.2014.

［2］夏春.高效液相色譜法測(cè)定食品中的姜黃素［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2011（1）：53-54.

［3］施冰.高效液相色譜法測(cè)定食品中的姜黃素［J］.福建分析測(cè)試，2008（3）：28-30.