王保華

河南太康縣人民醫(yī)院　太康　461400

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白藜蘆醇對大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織中TNF-α和IL-6水平的影響

王保華

河南太康縣人民醫(yī)院太康461400

【摘要】目的探討白藜蘆醇對大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的影響。方法健康Wistar大鼠48只，隨機(jī)均分為假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組、白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組，每組12只，采用腹主動脈缺血法制備大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型，然后采用ELISA法檢測各組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平。結(jié)果白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注損傷組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平低于白藜蘆醇25 mg·kg-1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論白藜蘆醇能夠降低脊髓缺血再灌注損傷組織中TNF-α和IL-6水平，改善機(jī)體的免疫功能，進(jìn)而減輕脊髓組織的缺血再灌注損傷。

【關(guān)鍵詞】白藜蘆醇；脊髓；缺血再灌注損傷；腫瘤壞死因子-α；白介素-6

脊髓由于外傷侵犯、手術(shù)或脊髓壓迫性疾病的影響，可能會出現(xiàn)缺血再灌注損傷[1]。目前，關(guān)于脊髓缺血再灌注損傷的機(jī)制及其治療是該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問題。為尋找更好的脊髓缺血再灌注損傷抑制對抗藥物，本研究利用大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型進(jìn)行研究，并用白藜蘆醇進(jìn)行干預(yù)，觀察該藥對該模型免疫功能的影響，以期找到減輕脊髓缺血再灌注損傷的藥物應(yīng)用于臨床。

1材料與方法

1.1實驗對象選擇清潔級健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量300～400 g，購自河南省實驗動物中心，動物許可證號SCXK(豫)2014-0001。

1.2試劑與藥品白藜蘆醇(美國Sigma公司)；腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-6(interleukin-6，IL-6)一抗、二抗及相關(guān)試劑盒均(福州邁新生物工程有限公司)。

1.4分組及給藥方法健康Wistar大鼠48只隨機(jī)均分為4組：假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組、白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組，每組12只。各組處理方法：白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠于造模前分別給予白藜蘆醇50 mg·kg-1+0.85%的NaCl溶液和25 mg·kg-1+0.85%的NaCl溶液；假手術(shù)組和缺血再灌注損傷組大鼠均給予同體積0.85%的NaCl溶液，各給藥組大鼠均按10 mL·kg-1給藥，連用10 d。

1.5模型制備脊髓缺血再灌注損傷模型制備參考文獻(xiàn)[2]的改良腹主動脈缺血法，其中缺血時間45 min，再灌注時間8 h，假手術(shù)組大鼠僅行腹主動脈分離術(shù)，實驗處理完畢在麻醉條件下處死大鼠并于第3～5腰椎處取出一定量的脊髓組織放置于-80 ℃冰箱待測。

1.6TNF-α和IL-6水平檢測用0.85%的NaCl溶液將所取脊髓組織制成勻漿，低溫(4 ℃)條件下4 000 rmin-1離心10 min，取上清液，采用嘌呤氧化酶法檢測SOD水平，采用硫代戊巴比妥法檢測MDA水平，總蛋白量采用考馬斯亮藍(lán)法測定。

2結(jié)果

缺血再灌注損傷組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注損傷組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平低于白藜蘆醇50 mg·kg-1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　各組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平比較

注：與假手術(shù)組比較，△P<0.05；與缺血再灌注損傷組比較，*P<0.05；與白藜蘆醇50 mg·kg-1組比較，#P<0.05

3討論

缺血再灌注損傷是一種組織或器官因外傷、手術(shù)或疾病導(dǎo)致缺血，經(jīng)過恢復(fù)性處理后，其損傷程度進(jìn)一步加重的現(xiàn)象，其發(fā)生可能受機(jī)體自由基水平失衡、免疫狀態(tài)改變、細(xì)胞凋亡機(jī)制失衡、炎癥反應(yīng)等生物學(xué)行為的影響。脊髓缺血再灌注損傷與機(jī)體的自由基的生成與清除失衡、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、能量代謝障礙等有關(guān)[2]。本研究主要通過探討炎癥反應(yīng)在脊髓缺血再灌注損傷發(fā)生發(fā)展過程中的作用，并進(jìn)一步證實白藜蘆醇在脊髓缺血再灌注損傷過程中對損傷的干預(yù)和減輕作用。脊髓發(fā)生缺血再灌注損傷后，機(jī)體通過TNF-α和IL-6等炎性細(xì)胞因子誘發(fā)的級聯(lián)反應(yīng)促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生、炎癥反應(yīng)的加重以及脊髓組織水腫的加重，進(jìn)而導(dǎo)致脊髓損傷的加重[3]。本研究結(jié)果證實，缺血再灌注損傷組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，進(jìn)一步印證了該理論。白藜蘆醇是具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗凋亡等作用的多酚類化合物，已被證實在多種組織或器官的缺血再灌注損傷過程中發(fā)揮對抗作用[4]。本文結(jié)果還顯示，白藜蘆醇50 mg·kg-1組和白藜蘆醇25 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注損傷組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。白藜蘆醇50 mg·kg-1組大鼠脊髓組織中TNF-α和IL-6水平低于白藜蘆醇50 mg·kg-1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示白藜蘆醇在脊髓缺血再灌注損傷過程中能夠減少促炎性細(xì)胞因子的分泌合成，減輕炎癥反應(yīng)的進(jìn)展，進(jìn)而減輕脊髓組織缺血再灌注損傷，且這種作用具有一定的劑量依賴性。

4參考文獻(xiàn)

[1]關(guān)鑫,董明巖,于洋,等.缺血再灌注損傷大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞凋亡、脊髓組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激經(jīng)典標(biāo)志物的表達(dá)變化[J].山東醫(yī)藥,2015,55(31):27-29.

[2]張銓,陳明華,吳俊山,等.缺血后處理對鼠脊髓缺血-再灌注損傷中MDA和SOD的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2014,17(22):89-90.

[3]余萍萍,王莉,唐凡人 ,等.白藜蘆醇對大鼠腦缺血/再灌注損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響[J].中國藥理學(xué)通報,2015,31(9):1 228-1 233.

[4]沈佳佳,黃瑛,祁煒罡,等.白藜蘆醇通過促進(jìn)自噬減輕糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷的實驗研究[J].中國臨床醫(yī)學(xué),2015,22(2):151-155.

(收稿 2016-01-13)

【中圖分類號】R-332

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

【文章編號】1673-5110(2016)12-0100-02