宮澤琨，張峻嶺（.天津市兒童醫(yī)院，天津　30034；天津市中醫(yī)藥研究院，天津　3000）

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系統(tǒng)性紅斑狼瘡中醫(yī)證型與IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的相關(guān)性研究

宮澤琨1，張峻嶺2
（1.天津市兒童醫(yī)院，天津300134；2天津市中醫(yī)藥研究院，天津300120）

摘要：目的觀察系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE）各中醫(yī)證型患者外周血清中γ-干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素（IL）-2、IL-4、IL-10的水平，以探求SLE中醫(yī)辨證分型的客觀化參考指標(biāo)。方法根據(jù)中醫(yī)辨證將SLE分為4種證型，氣血熱盛型、脾腎陽虛型、氣陰兩虛血瘀型和氣滯血瘀肝郁型，采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心（ELISA）法，檢測(cè)并比較不同證型SLE患者及正常對(duì)照組血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平的差異。結(jié)果SLE患者外周血清IFN-γ、IL-4、IL-10的水平高于正常對(duì)照組（P＜0.01），IL-2的水平低于正常對(duì)照組（P＜0.01）；從氣血熱盛型、脾腎陽虛型、氣陰兩虛血瘀型到氣滯血瘀肝郁型IFN-γ、IL-4、IL-10的水平依次遞減，IL-2為依次遞增，其中氣血熱盛型、脾腎陽虛型與氣陰兩虛血瘀型和氣滯血瘀肝郁型相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論血清中IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-2水平可作為SLE中醫(yī)辨證分型的客觀化參考指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：系統(tǒng)性紅斑狼瘡；辨證分型；干擾素-γ；白細(xì)胞介素-2；白細(xì)胞介素-4；白細(xì)胞介素-10

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種與多種因素有關(guān)的嚴(yán)重危害健康的自身免疫性疾病。對(duì)此病采用中醫(yī)辨證治療，具有一定的優(yōu)勢(shì)和獨(dú)特的效果。傳統(tǒng)的中醫(yī)辨證主要靠望、聞、問、切采集臨床資料，客觀指標(biāo)少，定量指標(biāo)缺如，重復(fù)性差。近年來許多學(xué)者已研究發(fā)現(xiàn)一些實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)與“證”有某種內(nèi)在關(guān)聯(lián)，可以為臨床辨證提供客觀依據(jù)，輔助指導(dǎo)臨床治療。本研究觀察不同證型SLE患者和正常對(duì)照組血清中γ-干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素（IL）-2、IL-4、IL-10的水平變化，研究這4種細(xì)胞因子與SLE辨證分型的關(guān)系，為證的實(shí)質(zhì)研究提供微觀化、客觀化指標(biāo)，從而更好地指導(dǎo)臨床治療。

1　資料與方法

1.1臨床資料

1.1.1診斷標(biāo)準(zhǔn)按照美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)［1］。

1.1.2病例選擇①診斷符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，近3個(gè)月內(nèi)均未系統(tǒng)應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑治療。②無合并其他結(jié)締組織疾病或伴結(jié)核、慢性活動(dòng)性肝炎、心血管、腦血管、肝、腎或造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病、精神病患者。③簽署知情同意書，并獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.1.3中醫(yī)辨證分型參照衛(wèi)生部頒布的SLE分型診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］，以及《中西醫(yī)結(jié)合皮膚病學(xué)》有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［3］，結(jié)合臨床所見，將SLE辨證分為4種證型：①氣血熱盛型：證見高熱發(fā)斑，口渴欲飲，煩躁不安，面紅尿赤，脈洪滑弦而有力，舌質(zhì)絳紅，苔黃燥或白干，相當(dāng)于急性系統(tǒng)性紅斑狼瘡。②氣陰兩虛血瘀型：證見倦怠無力，心慌氣短，五心煩熱，長期低熱，面色潮紅而有暗紫色斑片，盜汗自汗，腰膝酸痛，脈沉細(xì)數(shù)而無力，舌質(zhì)紅紫，舌光無苔或呈黃苔，相當(dāng)于亞急性系統(tǒng)性紅斑狼瘡。③氣滯血瘀肝郁型：證見低熱綿綿，口苦納呆，兩脅脹痛，月經(jīng)提前，經(jīng)血暗紫帶塊，煩躁易怒，盤狀紅斑或疹色暗紫，遇日光加重，脈弦，舌質(zhì)暗紫或有瘀斑。④脾腎陽虛型：證見面色蒼白，全身浮腫，形寒肢冷，氣短乏力，腹脹納少，腰腿酸痛，脈沉細(xì)，舌淡，瘦小或有齒痕。尿中長期蛋白尿及紅白細(xì)胞，具有腎病綜合征樣的改變。

1.1.4臨床資料76例SLE患者，其中女72例，男4例，均為2006年7月—2007年9月天津市長征醫(yī)院門診及住院病人。年齡12～70歲，平均（33.52± 12.36）歲。76例SLE患者中，氣血熱盛型10例，氣陰兩虛血瘀型28例，氣滯血瘀肝郁型19例，脾腎陽虛型19例。選取健康查體者26例作為對(duì)照組，其中女24例，男2例，年齡10～69歲，平均（34.76± 10.32）歲。各組年齡、性別、病程比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2方法采集受檢者外周靜脈血5 mL，分離血清后-80℃保存。IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10試劑盒采用天津市宇基醫(yī)療技術(shù)有限公司進(jìn)口分裝產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)方法為雙抗體夾心ELISA法，均嚴(yán)格按照說明書操作。酶標(biāo)儀SPECTRA-Ⅲ為奧地利TECAN公司生產(chǎn)。

2　結(jié)果

2.1SLE患者組與對(duì)照組血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平SLE患者組4個(gè)因子的血清水平與正常對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（除IL-2降低外其余為升高），差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1　2組血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平（±s，pg/mL）

表1　2組血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平（±s，pg/mL）

注：SLE患者組、正常對(duì)照組間比較P＜0.01。

組別　n　IFN-γ　IL-2　IL-4　IL-10 SLE組　76　53.23±11.52　44.12±10.05 67.30±13.72 50.38±5.59正常組　26　27.8±5.63　89.63±15.23 33.23±7.49　26.67±6.32

2.2SLE中醫(yī)辨證分型各組間IFN-γ、IL-2、IL-4、 IL-10水平①血清IFN-γ濃度：氣血熱盛型、脾腎陽虛型明顯高于氣陰兩虛血瘀型與氣滯血瘀肝郁型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；氣血熱盛型與脾腎陽虛型相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；氣陰兩虛血瘀型與氣滯血瘀肝郁型差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。②血清IL-2濃度：氣血熱盛型、脾腎陽虛型明顯低于氣陰兩虛血瘀型與氣滯血瘀肝郁型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；氣血熱盛型與脾腎陽虛型相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；氣滯血瘀肝郁型明顯高于其他3型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。③血清IL-4濃度：氣血熱盛型、脾腎陽虛型明顯高于氣陰兩虛血瘀型與氣滯血瘀肝郁型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；氣血熱盛型與脾腎陽虛型相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；氣滯血瘀肝郁型明顯低于其他3型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。④血清IL-10濃度：氣血熱盛型、脾腎陽虛型明顯高于氣陰兩虛血瘀型與氣滯血瘀肝郁型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；氣血熱盛型與脾腎陽虛型相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；氣滯血瘀肝郁型明顯低于其他3型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），見表2。

表2　SLE中醫(yī)辨證分型組間血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平　（±s）（pg/mL）

表2　SLE中醫(yī)辨證分型組間血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平　（±s）（pg/mL）

組別　n　IFN-γ　IL-2　IL-4　IL-10氣血熱盛型　10 77.56±10.62 21.32±4.65 103.20±15.5664.06±4.59脾腎陽虛型　19 70.38±14.80 25.10±6.07　92.70±19.8361.17±6.33氣陰兩虛血瘀型 28 38.20±9.80　47.42±15.57 50.27±13.3044.30±4.98氣滯血瘀肝郁型 19 39.65±9.36　55.63±15.23 42.58±7.35 42.35±5.82

3　討論

研究發(fā)現(xiàn)，SLE存在多種細(xì)胞因子的異常，在其發(fā)病及病程轉(zhuǎn)歸中起重要作用。細(xì)胞因子分泌和復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控異常在SLE免疫紊亂發(fā)生和病理損傷中起著重要作用［4-5］。IFN-γ是一重要的Th1細(xì)胞因子，IFN-γ是由活化的T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的?？苫罨奘杉?xì)胞，促使其吞噬活性增強(qiáng)并參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)形成，協(xié)同IL-2促進(jìn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞殺傷功能；同時(shí)IFN-γ可提高單核細(xì)胞MHCⅠ類和Ⅱ類分子的表達(dá)，增加自身抗原的遞呈，促進(jìn)T細(xì)胞對(duì)自身抗原的免疫反應(yīng)［6-7］。此外，有研究報(bào)道IFN-γ在自身免疫性腎炎的發(fā)展中起關(guān)鍵性作用，可加速狼瘡性小鼠腎小球腎炎的發(fā)展，介導(dǎo)過強(qiáng)的免疫反應(yīng)［8-9］。

IL-2也是一種Th1細(xì)胞因子，IL-2作為一種免疫增強(qiáng)因子參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)，其誘導(dǎo)的免疫細(xì)胞增殖反應(yīng)是整個(gè)免疫應(yīng)答過程中的關(guān)鍵階段。研究表明，處于疾病活動(dòng)期的病人有50%在血清中測(cè)到高水平IL-2。但也有人認(rèn)為活動(dòng)期SLE患者血清中IL-2低于正常人，對(duì)此，有觀點(diǎn)認(rèn)為在SLE患者血清中細(xì)胞因子存在動(dòng)態(tài)變化。本研究中SLE患者IL-2水平的降低可能跟下列3種因素有關(guān)：①Th2因子對(duì)Th1因子的抑制；②SLE患者自身的免疫缺陷；③T細(xì)胞呈現(xiàn)低反應(yīng)性，IL-2分泌減少。

IL-4是一種重要的Th2細(xì)胞因子，促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th2型細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)B細(xì)胞增殖產(chǎn)生抗體，誘導(dǎo)高水平的IgE、IgG產(chǎn)生，也可拮抗Th1細(xì)胞活性，抑制Th1細(xì)胞因子的產(chǎn)生。IL-4通過與白細(xì)胞介素4受體（IL-4R）結(jié)合發(fā)揮多樣生物學(xué)活性［10］。Th2細(xì)胞分化途徑仍不是很清楚，但不容置疑的是IL-4能誘導(dǎo)Th2細(xì)胞的分化，Th2細(xì)胞反過來再產(chǎn)生IL-4，促進(jìn)SLE患者的自身抗體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，加重SLE的病理損傷［11］。

IL-10是Th2型細(xì)胞分泌的一種多功能性細(xì)胞因子，是具有免疫刺激、免疫抑制和抗炎活性的免疫調(diào)節(jié)分子。有學(xué)者推測(cè)IL-10在SLE中作用是促進(jìn)B細(xì)胞的分化和產(chǎn)生自身抗體［12］。IL-10增高會(huì)導(dǎo)致患者體內(nèi)抗體產(chǎn)生水平增高，或者通過細(xì)胞因子之間及其受體作用調(diào)節(jié)刺激B細(xì)胞增生并促進(jìn)其合成IgG，導(dǎo)致SLE患者免疫球蛋白分泌增多［13］。在本次研究中，SLE患者血清IL-10濃度與正常對(duì)照組相比明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，也與國內(nèi)外其他報(bào)道相一致［14］。

筆者發(fā)現(xiàn)SLE患者存在Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)異常，但未明確顯示哪類因子占優(yōu)勢(shì)。上述細(xì)胞因子的分泌異常導(dǎo)致SLE患者免疫紊亂進(jìn)而造成病理損傷。其原因可能是氣血熱盛型與脾腎陽虛型多為疾病的急性期或者活動(dòng)期，且脾腎陽虛型多有腎臟損害，而氣陰兩虛血瘀型和氣滯血瘀肝郁型多處于病情相對(duì)穩(wěn)定期，因此氣血熱盛型、脾腎陽虛型上述指標(biāo)明顯高于（或者低于）氣陰兩虛型和氣滯血瘀肝郁型，這與“證是機(jī)體在疾病發(fā)展過程中某一階段的病理概況，與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)”的含義是一致的。所以，高濃度的血清IFN-γ、IL-4、IL-10（或低濃度IL-2）水平可作為氣血熱盛型、脾腎陽虛型辨證指標(biāo)之一；而且IL-2、IL-4、IL-10 3個(gè)因子的水平氣滯血瘀肝郁型與其他3型相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)辨證有一定參考價(jià)值。在中西醫(yī)結(jié)合診療SLE過程中，除了臨床表現(xiàn)和細(xì)胞因子水平以外，還要結(jié)合臨床其他一些生化和免疫學(xué)指標(biāo)，如血沉、抗核抗體、免疫球蛋白、血清補(bǔ)體水平等指標(biāo)，宏觀和微觀結(jié)合，精確規(guī)范辨證，有助于使中醫(yī)辨證更加客觀。

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Relationships Between Traditional Chinese Medical Syndrome Types and Interferon-γ，Interleukin-2，Interleukin-4 and Interleukin-10 in Systemic Lupus Erythematosus

GONG Zekun1，ZHANG Junling2
1.Tianjin Children'sHospital，Tianjin 300134，China；2.Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital，Tianjin 300120，China

Abstract:ObjectiveIn order to explore the levels of serum interferon-γ（IFN-γ），interleukin（IL）-2，IL-4 and IL-10 in systemic lupus erythematosus（SLE）patients of various Chinese medicine syndrome types in order to seek the objective indices for syndrome differentiation of SLE.MethodsSLE patients were sorted into four syndrome types by Chinese medicine syndrome differentiation，i.e.Qi Xue Re Sheng Xing（QXRSX），Pi Shen Yang Xu Xing（PSYXX），Qi Yin Liang Xu Xue Yu Xing （QYLXXYX），and Qi Zhi Xue Yu Gan Yu Xing（QZXYGYX）.The levels of serum IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.ResultsThe levels of serum IFN-γ，IL-4 and IL-10 of all SLE patients were significantly higher than those in the normal control group（P＜0.01），the levels of serum IL-2 of all SLE patients were lower than those in the normal control group（P＜0.01）.The levels of serum IFN-γ，IL-4，IL-10 in different syndrome types decreased in order of type QXRSX to PSYXX to QYLXXYX to QZXYGYX（but IL-2 was increasing）.Compared to QXRSX，PSYXX and QYLXXYX，QZXYGXY there were significant differences（P＜0.01）.ConclusionThe levels of serum IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 could be taken as the objective indicesfor reference in syndrome differentiation of SLE.

Key words:Systemiclupuserythematosus；Syndromedifferentiation；Interferon-γ；Interleukin-2；Interleukin-4；Interleukin-10

中圖分類號(hào)：R593.24+1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-0709（2016）01-0010-03

基金項(xiàng)目：天津市衛(wèi)生局中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合科研基金資助項(xiàng)目（No.200029）

通信作者：張峻嶺，E-mail：13920301679@126.com

收稿日期：（2015-07-06）