曹 林，曾秋鳳，張克英，丁雪梅，白世平，羅玉衡，王建萍，玄 玥，宿卓薇

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維生素C調(diào)控肉雞缺氧肺動脈血管平滑肌細胞缺氧誘導(dǎo)因子－1αmRNA轉(zhuǎn)錄的分子機制

曹 林，曾秋鳳*，張克英，丁雪梅，白世平，羅玉衡，王建萍，玄 玥，宿卓薇

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所，教育部動物抗病營養(yǎng)重點實驗室，雅安625014）

摘 要：作者旨在通過脯氨酸羥化酶抑制劑（DMOG）和過氧化氫（H2O2）刺激肉雞缺氧肺動脈平滑肌細胞（PASMCs）探討維生素C（VC）對其氧化還原狀態(tài)與缺氧誘導(dǎo)因子－1α（HIF－1α）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及其受體2（VEGFR2/Flk－1）mRNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機制。在前期PASMCs培養(yǎng)和缺氧模型的基礎(chǔ)上設(shè)計3個小試驗，VC和H2O2、VC和DMOG、VC和H2O2＋DMOG，每個試驗5個處理，每個處理6個重復(fù)。結(jié)果表明：與常氧和缺氧空白組相比，試驗1，VC顯著增加SOD/MDA的比值（P＜0.05），顯著下調(diào)HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平（P＜0.05），H2O2顯著上調(diào)缺氧肉雞PASMCs HIF－1αmRNA轉(zhuǎn)錄（P＜0.05）；試驗2，DMOG顯著上調(diào)SOD/MDA的比值（P＜0.05），顯著下調(diào)HIF－1α和VEGFR2mRNA轉(zhuǎn)錄（P＜0.05），但顯著上調(diào)VEGF mRNA的轉(zhuǎn)錄（P＜0.05），VC＋DMOG顯著上調(diào)HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA轉(zhuǎn)錄（P＜0.05）；試驗3，VC＋H2O2＋DMOG三者同時添加極顯著增加HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA轉(zhuǎn)錄（P＜0.01）。以上結(jié)果提示，VC能提升細胞外基質(zhì)的抗氧化水平，其對缺氧基因表達的調(diào)控與細胞內(nèi)脯氨酸羥化酶活性和氧化還原狀態(tài)相關(guān)。

關(guān)鍵詞：肉雞肺動脈平滑肌細胞；缺氧；HIF－1α；維生素C；H2O2；DMOG

肉雞腹水綜合征（ascites syndrome，AS）又稱肉雞肺動脈高壓綜合征（pulmonary hypertension syndrome，PHS），是快大型肉雞三大主要營養(yǎng)代謝性疾病之一。缺氧會引起肉雞肺動脈平滑肌細胞（pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs）異常增生，導(dǎo)致肉雞肺動脈血管重構(gòu)、肺動脈壓升高、右心室肥大、自由基損傷等病理變化［1］，引發(fā)肉雞AS。眾多研究證實，缺氧誘導(dǎo)因子－1α（hypoxia inducible factor－1alpha，HIF－1α）基因表達與肉雞AS的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2－3］。

HIF－1α的表達與活性受細胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)和脯氨酸羥化酶活性的影響［4］。常氧條件下，H2O2可通過失活脯氨酸羥化酶來穩(wěn)定HIF－1α蛋白活性［5］。在人前列腺癌細胞中胰島素通過誘導(dǎo)H2O2的產(chǎn)生上調(diào)HIF－1α和血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達［6］。在人血管內(nèi)皮細胞線粒體SOD也可調(diào)節(jié)HIF－1α的活性［7］。脯氨酸羥化酶是HIF－1α蛋白通過泛素化途徑降解的關(guān)鍵酶。DMOG（dimethyloxalylglycine），一種脯氨酸羥化酶的抑制劑，可上調(diào)HIF－1α蛋白的表達［8］。維生素C（VC）作為一種強抗氧化劑和脯氨酸羥化酶的輔助因子，對人或鼠類腫瘤細胞HIF－1α基因表達及其蛋白活性有著較強的調(diào)控作用。本實驗室前期試驗也表明，適宜濃度的VC（500或1 000μmol·L－1）能有效下調(diào)缺氧肉雞PASMCs中HIF－1α及其下游靶基因VEGF及血管內(nèi)皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2/Flk－1）mRNA的轉(zhuǎn)錄［9］。

本試驗旨在進一步研究VC、DMOG和H2O2對缺氧肉雞PASMCs氧化水平和缺氧基因HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA轉(zhuǎn)錄的影響，揭示VC降低HIF－1α/VEGF/VEGFR2基因轉(zhuǎn)錄的分子機制，為VC在肉雞健康養(yǎng)殖中的合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試驗儀器與試劑 儀器：生物安全柜（Thermo1300Series）、倒置顯微鏡（Nikon TS100）、二氧化碳培養(yǎng)箱（Thermo3111）、照相系統(tǒng)（Nikon DS－Ri1）、多功能酶標儀（SpectraMax M2）、ABI 7900型熒光定量PCR儀。試劑：DMEM－F12培養(yǎng)基（HyClone）、南美洲胎牛血清（Sigma）、胰蛋白酶（HyClone）、青鏈霉素（HyClone）、D－h(huán)anks液（武漢博士德）、CoCl2·6H2O（Sigma）。

1.1.2 肉雞肺動脈平滑肌細胞培養(yǎng)及缺氧模型的建立 30只21日齡健康A(chǔ)A肉公雞，在實驗室前期研究基礎(chǔ)上培養(yǎng)肉雞PASMCs，且CoCl2250 μmol·L－1處理48h時PASMCs細胞增殖明顯，缺氧基因HIF－1α/VEGF/VEGFR2的相對轉(zhuǎn)錄量較空白組也顯著升高。故以CoCl2250μmol·L－1，48 h為條件建立細胞缺氧模型。

1.2 試驗設(shè)計

本試驗包括3個小試驗。處理時間均為48h。

試驗1 VC和H2O2對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)及缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響。采用2×2＋1因子設(shè)計。缺氧條件下，2個VC添加水平（0和500μmol·L－1），2個H2O2添加水平（0或50 μmol·L－1）［10］和常氧空白對照處理，共5個處理，每個處理6個重復(fù)。

試驗2 VC和DMOG對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)及缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響。采用2×2＋1因子設(shè)計。缺氧條件下，2個VC添加水平（0和500μmol·L－1），2個DMOG添加水平（0或1 mmol·L－1）［5］和常氧空白對照處理，共5個處理，每個處理6個重復(fù)。

試驗3 VC/H2O2/DMOG對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)及缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響。采用2×2＋1因子設(shè)計。缺氧條件下，2個VC添加水平（0和500μmol·L－1），2個H2O2＋DMOG添加水平（0或50μmol·L－1H2O2＋1mmol·L－1DMOG）和常氧空白對照處理，共5個處理，每個處理6個重復(fù)。

1.3 樣品收集與檢測

1.3.1 樣品收集 按照Trizol試劑說明書提取細胞總RNA，－80℃保存，用于缺氧基因相對轉(zhuǎn)錄量檢測。收集細胞培養(yǎng)液和細胞裂解液，分別測定VC、SOD和丙二醛（MDA）的含量。

1.3.2 細胞培養(yǎng)液與裂解液氧化和抗氧化指標的檢測 細胞培養(yǎng)液與裂解液中VC、SOD和MDA的檢測按照試劑盒說明書進行?？箟难幔╒C）試劑盒（南京建成，貨號：A009 50T/48樣）、SOD試劑盒（南京建成，貨號：A001－1羥胺法）、MDA試劑盒（南京建成，貨號：A003－1TBA法）。

1.3.3 RT－PCR檢測 利用SYBR Premix Ex TaqTMII試劑盒和ABI Prism7900sequence detection system進行RT－PCR檢測。反應(yīng)采用10μL體系，冰上操作，反應(yīng)體系包括：5μL SYBR Premix Ex TaqTMII，0.4μL Forward Primer，0.4μL Reverse Primer，0.2μL ROX Reference，3μL dH2O 和1μL cDNA。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30s，40個循環(huán)（95℃5s，60℃34s），熔解曲線檢測（95℃15s，60℃60s，95℃15s）。引物序列見表1。

表1 引物序列Table 1 The sequence of primers

1.4 統(tǒng)計分析

缺氧基因的相對轉(zhuǎn)錄量采用2－ΔΔCt法［11］計算：△Ct（目的基因）＝Ct（目的基因）－Ct（內(nèi)參基因）；△△Ct＝Ct（試驗組）－Ct（對照組）。目的基因的相對轉(zhuǎn)錄量＝2－ΔΔCt。用SAS（9.0）進行單因素方差分析，差異顯著時用Ducan法進行多重比較。以P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。用GraphPad Prism 5作圖，但試驗3缺氧基因的相對轉(zhuǎn)錄量經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后再用GraphPad Prism 5作圖。

2 結(jié) 果

2.1 VC和H2O2對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)及缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響

2.1.1 VC和H2O2對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)的影響 從圖1可看出，肉雞PASMCs培養(yǎng)液和裂解液中VC含量常氧空白組最低，且與缺氧空白組相比差異達到顯著水平（P＜0.05）。缺氧條件下，H2O2組培養(yǎng)液中VC含量顯著降低（P＜0.05），裂解液中VC含量與缺氧空白組和VC＋H2O2組相比也顯著降低（P＜0.05）；VC組培養(yǎng)液中VC含量顯著高于其他處理組（P＜0.05）；VC＋H2O2組培養(yǎng)液中VC濃度顯著低于VC組（P＜0.05），但顯著高于其他處理組（P＜0.05），裂解液中VC含量與缺氧空白組相比有升高趨勢，但顯著高于其他處理組（P＜0.05）。

肉雞PASMCs培養(yǎng)液和裂解液中SOD活性常氧空白組最高，且培養(yǎng)液中SOD活性與H2O2組相比差異顯著（P＜0.05），裂解液中SOD活性顯著高于除H2O2組外的缺氧組（P＜0.05）。缺氧條件下，H2O2組培養(yǎng)液中SOD活性與其他缺氧組相比僅有降低趨勢，但裂解液中SOD活性上升，顯著高于其他缺氧組（P＜0.05）；VC組和VC＋H2O2組裂解液中SOD活性顯著低于常氧組和H2O2組（P＜0.05）。

肉雞PASMCs培養(yǎng)液中MDA含量常氧空白組顯著高于缺氧條件下的各處理（P＜0.05）；缺氧條件下，VC＋H2O2組MDA含量顯著高于VC組（P＜0.05），其他缺氧組間差異不顯著。此外，肉雞PASMCs培養(yǎng)液中VC組SOD/MDA的比值顯著高于其他試驗組（P＜0.05）。

圖1 VC和H2O2對肉雞缺氧PASMCs培養(yǎng)液和裂解液氧化還原狀態(tài)的影響Fig.1 Effects of VC and H2O2on the redox state of culture medium and lysis solution of broiler PASMCs under hypoxia condition

2.1.2 VC和H2O2對肉雞缺氧PASMCs缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響 從圖2可看出，肉雞PASMCs缺氧基因HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量在常氧空白組顯著低于缺氧試驗組（P＜0.05）。缺氧條件下，HIF－1α和VEGF mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量呈現(xiàn)出一致的變化趨勢；H2O2組缺氧基因的相對轉(zhuǎn)錄量最大，顯著高于其他處理組（P＜0.05）；VEGFR2mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量在缺氧空白組最大，顯著高于VC組和H2O2＋VC組（P＜0.05）。

2.2 VC和DMOG對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)及缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響

2.2.1 VC和DMOG對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)的影響 從圖3可看出，肉雞PASMCs培養(yǎng)液和裂解液中VC含量常氧空白組最低，且與缺氧組相比達到顯著水平（P＜0.05）。缺氧條件下，培養(yǎng)液中VC含量，DMOG組顯著低于其他試驗組（P＜0.05），VC組顯著高于其他處理組（P＜0.05），VC＋H2O2組顯著高于缺氧空白組（P＜0.05）。

圖2 VC和H2O2對肉雞缺氧PASMCs缺氧基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響Fig.2 Effects of VC and H2O2on the mRNA expression of hypoxia genes of broiler PASMCs under hypoxia condition

肉雞PASMCs培養(yǎng)液和裂解液中SOD活性常氧空白組最高，其培養(yǎng)液中SOD活性與DMOG組相比達到顯著水平（P＜0.05），其裂解液中SOD活性與缺氧試驗組相比均達到顯著水平（P＜0.05）。

圖3 VC和DMOG對肉雞缺氧PASMCs培養(yǎng)液和裂解液氧化還原狀態(tài)的影響Fig.3 Effect s of VC and DMOG on the redox state of culture medium and lysis solution of broiler PASMCs under hypoxia condition

肉雞PASMCs培養(yǎng)液中MDA含量常氧空白組和VC＋DMOG組無差異，但顯著高于其他試驗組（P ＜0.05）。缺氧條件下，DMOG組MDA含量最低，與缺氧空白組相比達到顯著水平（P＜0.05）。肉雞PASMCs培養(yǎng)液中SOD/MDA的比值DMOG組最大，顯著高于除VC組外的所有試驗組（P＜0.05）；VC組SOD/MDA的比值與常氧空白組和缺氧空白組相比有升高趨勢，與DMOG＋VC組相比達到顯著水平（P＜0.05）。2.2.2 VC和DMOG對肉雞缺氧PASMCs基因轉(zhuǎn)錄的影響 從圖4可看出，肉雞PASMCs缺氧基因HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA在常氧條件下的相對轉(zhuǎn)錄量同試驗1一致，顯著低于缺氧試驗組（P＜0.05）。缺氧條件下，DMOG＋VC組缺氧基因的相對轉(zhuǎn)錄量都最大，顯著高于其他試驗組（P＜0.05）；DMOG組HIF－1αmRNA的相對轉(zhuǎn)錄量顯著低于其他缺氧組（P＜0.05），VEGF mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量顯著高于除DMOG＋VC組外的試驗組（P＜0.05），VEGFR2mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量也達到最小值，顯著低于除VC組外的缺氧組（P＜0.05）；VC組與缺氧空白組相比，VEGFR2mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量顯著降低（P＜0.05）。

圖4 VC和DMOG對肉雞缺氧PASMCs基因轉(zhuǎn)錄的影響Fig.4 Effect of VC and DMOG on the mRNA expression of hypoxia genes of broiler PASMCs under hypoxia condition

2.3 VC/H2O2/DMOG對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)及缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響

2.3.1 VC/H2O2/DMOG對肉雞缺氧PASMCs氧化還原狀態(tài)的影響 從圖5可看出，肉雞PASMCs培養(yǎng)液和裂解液中VC含量常氧空白組最低，除VC＋H2O2＋DMOG組外，培養(yǎng)液中VC含量與缺氧組相比達到顯著水平（P＜0.05）。缺氧條件下，H2O2＋DMOG組培養(yǎng)液中VC含量顯著高于除VC組外的其他缺氧組（P＜0.05），裂解液中VC含量最高，但僅與VC組相比達到顯著水平（P＜0.05）；VC組培養(yǎng)液中VC含量最高，與其他缺氧組相比達到顯著水平（P＜0.05），裂解液中VC含量最低但各處理組之間無顯著差異（P＜0.05）；VC＋H2O2＋DMOG組培養(yǎng)液中VC含量最低，顯著低于其他缺氧組（P＜0.05）

圖5 VC、H2O2和DMOG對肉雞缺氧PASMCs培養(yǎng)液和裂解液氧化還原狀態(tài)的影響Fig.5 Effect of VC，H2O2and DMOG on the redox state of culture medium and lysis solution of broiler PASMCs under hypoxia condition

肉雞PASMCs培養(yǎng)液和裂解液中SOD活性常氧空白組都處于最高水平，培養(yǎng)液中SOD活性與VC＋H2O2＋DMOG組相比達到顯著水平（P＜0.05），裂解液中SOD活性與缺氧組相比均達到顯著水平（P＜0.05）。

肉雞PASMCs培養(yǎng)液中MDA含量常氧空白組最高，顯著高于除H2O2＋DMOG組外的其他缺氧組（P＜0.05），VC組SOD/MDA的比值最大，顯著高于其他處理組（P＜0.05）。

2.3.2 VC/H2O2/DMOG對肉雞缺氧PASMCs缺氧基因轉(zhuǎn)錄的影響 從圖6可看出，肉雞PASMCs缺氧基因HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量于VC＋H2O2＋DMOG組最大，極顯著高于其他處理組（P＜0.01）；VEGFR2mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量H2O2＋DMOG組顯著高于常氧空白組、缺氧空白組和VC組（P＜0.05）。

圖6 VC/H2O2/DMOG對缺氧肉雞PASMCs基因轉(zhuǎn)錄的影響（數(shù)據(jù)經(jīng)過對數(shù)轉(zhuǎn)換）Fig.6 Effect of VC/H2O2/DMOG on the mRNA expression of hypoxia genes of broiler PASMCs under hypoxia condition（Data of figure 6is logarithmic conversion）

3 討 論

HIF－1α是肉雞AS發(fā)生的關(guān)鍵啟動因子。研究證實，VC是降解HIF－1α蛋白關(guān)鍵酶活性得以發(fā)揮的必需營養(yǎng)成分［5］，可有效降低肉雞肺、肝中HIF－1α的表達，增強血清抗氧化水平，顯著降低肉雞AS的發(fā)病率。VC是一種廣譜抗氧化物，在細胞內(nèi)外液中都有重要的抗氧化活性，能有效清除O－2、H2O2、OH－、LOO－等，減輕氧化劑對RNA轉(zhuǎn)錄、DNA、蛋白質(zhì)或膜結(jié)構(gòu)的損傷。但當有過渡金屬（如鐵和銅）存在時VC也可能起還原劑作用［12］。SOD是清除體內(nèi)自由基的重要抗氧化酶，而MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)鏈式終止階段產(chǎn)生的小分子產(chǎn)物，其含量可間接反映自由基的產(chǎn)生情況［13］。SOD/MDA比值能夠反映自由基引起的脂質(zhì)過氧化和清除速率，便于深入了解自由基的代謝情況。

本試驗在CoCl2誘導(dǎo)肉雞PASMCs建立細胞缺氧模型的基礎(chǔ)上進行。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，常氧條件下缺氧基因HIF－1α/VEGF/VEGFR2的轉(zhuǎn)錄量都很低，而缺氧能顯著上調(diào)其轉(zhuǎn)錄，這與D.Shweiki等的研究結(jié)果［14］一致。缺氧會引起機體自由基代謝異常［15］，H2O2的添加加劇細胞氧化與抗氧化失衡，加強氧化應(yīng)激，上調(diào)HIF－1α和VEGF mRNA的表達［16－17］。有研究證實H2O2與HIF－1α和VEGF mRNA的顯著轉(zhuǎn)錄息息相關(guān)［18］。飼糧中添加1 000 mg·kg－1VC能增強肉雞血清抗氧化水平，顯著下調(diào)AS肉雞肺HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA的轉(zhuǎn)錄［2－3］。本試驗同樣發(fā)現(xiàn)VC能顯著提升培養(yǎng)液中SOD/MDA的比值，增強肉雞PASMCs抗氧化能力，顯著下調(diào)HIF－1α/VEGF/VEGFR2mRNA的轉(zhuǎn)錄。

脯氨酸羥化酶是HIF－1α通過泛素蛋白途徑降解的限速酶［19］。DMOG通過抑制脯氨酸羥化酶活性來抑制HIF－1α羥化，減少HIF－1α蛋白降解，穩(wěn)定HIF－1α蛋白活性，上調(diào)HIF－1信號通路。試驗發(fā)現(xiàn)DMOG的添加顯著下調(diào)HIF－1αmRNA的轉(zhuǎn)錄，原因在于DMOG阻斷了HIF－1α通過泛素化蛋白途徑的降解，使其在細胞內(nèi)大量積累［5］，反饋性地下調(diào)HIF－1αmRNA的轉(zhuǎn)錄。脯氨酸羥化酶的抑制劑有兩類：鐵螯合劑，如去鐵敏和環(huán)吡酮胺，或鐵競爭劑，如二氯化鈷（CoCl2）；酮戊二酸類似物，如DMOG［20－21］和FG－4487等。本試驗用于化學(xué)誘導(dǎo)缺氧的CoCl2已競爭性地抑制了脯氨酸羥化酶的活性，再加入DMOG進一步抑制脯氨酸羥化酶對HIF－1α的羥化作用，使HIF－1α蛋白保持穩(wěn)定，并與HIF－1β結(jié)合形成HIF－1［22］。DMOG使HIF－1α蛋白在細胞內(nèi)的大量積累，顯著提升其靶基因VEGF mRNA的相對轉(zhuǎn)錄量［23］，且VEGF和VEGFR2的表達受多種上游轉(zhuǎn)錄因子，如HIF－1α、癌基因Ras和細胞因子等的共同調(diào)控［24］。在CoCl2誘導(dǎo)肉雞PASMCs缺氧的基礎(chǔ)上，VC＋DMOG以及VC＋H2O2＋DMOG作用時，VC不僅沒有下調(diào)缺氧基因的轉(zhuǎn)錄，反而促使其相對轉(zhuǎn)錄量顯著升高，甚至是常氧組的上萬倍?？赡苡捎赩C在不同生理狀態(tài)下其作用效果存在差異。本試驗條件下VC可能增加了肉雞缺氧PASMCs對DMOG和H2O2＋DMOG的敏感性，這與馬愛國等研究發(fā)現(xiàn)0.5 mmol·L－1VC可能增加細胞DNA對H2O2及其他有害物質(zhì)損害的敏感性的結(jié)果［25］一致。

4 結(jié) 論

VC可以有效地緩解肉雞缺氧PASMCs因H2O2氧化刺激引起的缺氧基因的轉(zhuǎn)錄，但還能增強其對DMOG和H2O2＋DMOG的敏感性，上調(diào)缺氧基因的轉(zhuǎn)錄。

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（編輯 白永平）

Molecular Mechanism of Vitamin C on Hypoxia Inducible Factor－1αmRNA Transcription of Broiler Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells under Hypoxia Condition

CAO Lin，ZENG Qiu－feng*，ZHANG Ke－ying，DING Xue－mei，BAI Shi－ping，LUO Yu－h(huán)eng，WANG Jian－ping，XUAN Yue，SU Zhuo－wei
（Key Laboratory of Animal Nutrition for Disease Resistance in the Ministry of Education，Institute of Animal Nutrition，Sichuan Agricultural University，Ya’an625014，China）

Abstract：This study was conducted to investigate the molecular mechanism of Vitamin C（VC）on redox state and the mRNA transcription of hypoxia inducible factor－1α（HIF－1α），Vascular endothelial growth factor（VEGF）and Vascular endothelial growth factor receptor 2（VEGFR2/Flk－1）in broiler PASMCs under hypoxia condition through dimethyloxalylglycine（DMOG）and H2O2.This study executed on the basis of the culture of PASMCs and hypoxia model，included 3 experiments，VC and H2O2，VC and DMOG，VC and H2O2＋DMOG，including 5treatments with six replicates of each experiment.Compared with control group under normoxic and hypoxic，Exp.1showed that VC significantly increased SOD to MDA ratio（P＜0.05），and down－regulated the mRNA transcription of HIF－1α/VEGF/VEGFR2（P＜0.05）；Exp.2showed that DMOG significantly increased SOD to MDA ratio（P＜0.05），and down－regulated the mRNA transcription of HIF－1αand VEGFR2（P＜0.05）respectively，but significantly up－regulated the mRNA tran－scription of VEGF（P＜0.05），VC＋DMOG significantly up－regulated the mRNA transcription of HIF－1α/VEGF/VEGFR2（P＜0.05）；Exp.3showed that VC＋H2O2＋DMOG markedly upregulated the mRNA transcription of HIF－1α/VEGF/VEGFR2（P＜0.01）.These results suggested that VC could increase cellular antioxidantive ability，and regulate the relative expression of hypoxia genes based on the activity of proline hydroxylase and the redox state of broiler PASMCs.

Key words：broiler pulmonary artery smooth muscle cells；hypoxia；hypoxia inducible factor－1α；vitamin C；H2O2；DMOG

中圖分類號：S852.2

文獻標志碼：A

文章編號：0366－6964（2016）05－1033－08

doi：10.11843/j.issn.0366－6964.2016.05.022

收稿日期：2015－10－10

基金項目：國家自然科學(xué)青年基金（31101733）；四川農(nóng)業(yè)大學(xué)211雙支計劃

作者簡介：曹 林（1990－），男，四川綿陽人，碩士生，主要從事家禽營養(yǎng)與飼料研究，E－mail：1315522048@qq.com

*通信作者：曾秋鳳，研究員，博士，主要從事家禽營養(yǎng)與飼料研究，E－mail：zqf@sicau.edu.cn