雷 晶，郝艷淑，吳秀文，姜存?zhèn)}

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)江中下游耕地保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430070

鈉鉀替代條件下不同基因型棉花葉片的FTIR光譜研究

雷 晶，郝艷淑，吳秀文，姜存?zhèn)}*

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)江中下游耕地保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430070

鉀缺乏是制約棉花生長(zhǎng)的重要因子之一，而鈉鉀替代的研究一直是國(guó)內(nèi)外關(guān)注的重點(diǎn)。以不同鉀效率基因型棉花(鉀高效HG103和鉀低效LG122)為材料，利用傅里葉紅外光譜(FTIR)對(duì)不同鉀鈉處理下棉花葉片的物質(zhì)組成進(jìn)行研究，分析不同鉀鈉條件下，葉片紅外光譜圖譜的差異，探討鈉鉀替代對(duì)其物質(zhì)成分和結(jié)構(gòu)的影響，以及基因型的差異。結(jié)果表明： (1)缺鉀條件下施鈉，2 960，2 855，2 926，1 103和1 078 cm-1這5個(gè)特征峰的相對(duì)吸光度均有所升高，其中HG103在2 960，2 855和2 926 cm-1處增加的量與LG122幾乎一致，而在1 103和1 078 cm-1附近，HG103增加的量高于LG122； 然而適鉀的條件下施鈉，這5個(gè)特征峰的相對(duì)吸光度都有所減少，且HG103減少的量都小于LG122，表明缺鉀時(shí)施鈉促進(jìn)糖類、蛋白質(zhì)和酯類的合成，其中對(duì)糖類的促進(jìn)作用是HG103的大于LG122的，而對(duì)蛋白質(zhì)和酯類的則沒有差異； 適鉀時(shí)施鈉則有抑制作用，對(duì)HG103的抑制作用小于LG122。(2)缺鉀時(shí)，1 734和1 437 cm-1附近的特征峰缺失，而補(bǔ)充鈉后這些缺失的峰也未出現(xiàn)，說(shuō)明缺鉀破壞了葉片中蛋白質(zhì)酰胺Ⅰ帶和纖維素的結(jié)構(gòu)，而缺鉀補(bǔ)充鈉并不能緩解這種破壞，即對(duì)于鉀的這些功能，鈉不能完全代替鉀。

棉花； 基因型； 鈉鉀替代； 傅里葉紅外光譜(FTIR)

引 言

鉀作為植物必需的大量營(yíng)養(yǎng)元素之一，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育有重要功能： 促進(jìn)光合作用及其產(chǎn)物的運(yùn)輸，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，參與細(xì)胞滲透調(diào)節(jié)作用等[1]。目前，鉀資源的短缺已成為我國(guó)乃至世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域必須面臨和解決的問(wèn)題，為緩解該問(wèn)題，劉國(guó)棟和劉更另提出了使用鉀的替代物[2]，鈉作為鉀最大優(yōu)勢(shì)的替補(bǔ)陽(yáng)離子，在某些方面則能替代鉀[3]。棉花是耐鹽作物，因此，用鈉代替鉀對(duì)緩解鉀資源短缺、促進(jìn)棉花生長(zhǎng)有重要意義。研究表明： 不同鈉鉀替代比例對(duì)椰苗葉片的可溶性糖和蔗糖含量的影響有差異[4]。

傅里葉紅外光譜(FTIR)是一種主要基于化合物中極性鍵和官能團(tuán)振動(dòng)的結(jié)構(gòu)分析技術(shù)，它是物質(zhì)分子定性分析與定量分析常用的一種方法，通過(guò)分析紅外光譜吸收峰的位置可以鑒定多種有機(jī)化合物及官能團(tuán)的存在，且利用光譜吸收強(qiáng)度可以定量比較各種化學(xué)組分的相對(duì)含量[5-6]。該技術(shù)由于需要的樣品量少、無(wú)損、操作快速簡(jiǎn)單以及靈敏度高等特點(diǎn)，越來(lái)越受到重視并已開始廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。如應(yīng)用FTIR研究玉米缺鋅[7]、花生缺鈣[8]和柑橘缺硼[9]植株體內(nèi)化學(xué)組分的變化。目前，在對(duì)棉花的研究上，主要是利用該技術(shù)研究細(xì)胞壁纖維素含量[10]，然而在鈉鉀替代條件下，不同基因型棉花葉片的化學(xué)組分變化研究，尚未見到相關(guān)報(bào)道。因此，選取兩種不同鉀效率基因型棉花為材料，利用FTIR對(duì)鈉鉀替代條件下不同基因型棉花苗期葉片化學(xué)組成進(jìn)行測(cè)定，以期為棉花鈉鉀替代的生理代謝的機(jī)制研究提供新的思路和方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料和設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)盆栽場(chǎng)進(jìn)行。供試棉花為鉀高效基因型HG103和鉀低效基因型LG122，由本實(shí)驗(yàn)室在2001年—2005年間通過(guò)“兩步篩選法”從86個(gè)棉花種質(zhì)資源中篩選獲得[11-12]，種子由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花所和華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳育種研究室提供。

采用Joham[13]改良水培配方，含0.590 g·L-1Ca(NO3)2·4H2O，0.500 g·L-1MgSO4·7H2O，0.100 g·L-1NH4H2PO4和0.025 g·L-1EDTA-Fe(為了避免EDTA-Fe配制過(guò)程中EDTA二鈉引入鈉，改用EDTA代替，并用適量氨水調(diào)節(jié)pH，使其溶解)，及阿農(nóng)營(yíng)養(yǎng)液的微量元素。設(shè)K0Na0，K0Na1，K1Na0，K1Na1 4個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，其中K0： 0 mg·L-1KCl； K1： 20 mg·L-1KCl； Na0： 0 mg·L-1NaCl； Na1： 80 mg·L-1NaCl。選取均勻健康飽滿的種子，在50～60 ℃水中浸泡24 h，露白后在濕潤(rùn)的紗布上催芽，后轉(zhuǎn)入3 L的塑料桶中營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)，塑料桶黑漆避光并定植1株，脫脂棉固定。開始用1/4濃度的阿夫多寧全營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，1周后換用1/2濃度的Joham營(yíng)養(yǎng)液，繼而用全量營(yíng)養(yǎng)液濃度，每隔4 h通一次氣，每次通氣20 min。培養(yǎng)過(guò)程中，注意病蟲害的防治。

1.2 方法

培養(yǎng)30天后收獲，取葉片在105 ℃下殺青30 min，70 ℃下烘干并研磨成粉末。將待測(cè)樣品與烘干后的光譜純溴化鉀以1/10的質(zhì)量比用瑪瑙研缽研磨均勻后將混合物壓片，采用傅里葉變換紅外光譜儀(FTIR-NEXUSTM)檢測(cè)葉片的光譜特性。光譜范圍為4 000～400 cm-1，分辨率為4 cm-1，掃描累積32次，樣品測(cè)定前均對(duì)背景進(jìn)行掃描，掃描時(shí)扣除H2O和CO2的干擾。

1.3 數(shù)據(jù)分析

通過(guò)測(cè)定得到4個(gè)鈉鉀處理(每個(gè)處理3次重復(fù))下2個(gè)基因型棉花葉片共24個(gè)樣品的FTIR。采用OPUS 6.5 軟件采集數(shù)據(jù)進(jìn)行基線校正，Omnic8.0 軟件進(jìn)行歸一化處理，Origin8.6軟件對(duì)FTIR 圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同鈉鉀條件下不同基因型棉花葉片的FTIR全圖譜分析

FTIR圖譜可以反映植物的主要化學(xué)成分，根據(jù)所含化學(xué)成分的官能團(tuán)特征找到相應(yīng)紅外光譜吸收峰的歸屬[14]。棉花葉片中各化學(xué)鍵的吸收處于中紅外區(qū)，即波數(shù)為4 000～400 cm-1。從圖1可以看出，無(wú)論是否有鉀，施鈉處理的棉花葉片F(xiàn)TIR圖譜與缺鈉處理相比，無(wú)論是吸收峰的位置還是吸收峰對(duì)應(yīng)的相對(duì)吸光度的大小都發(fā)生了變化，說(shuō)明各組分構(gòu)成和結(jié)構(gòu)都發(fā)生了變化。

表1 葉片中的官能團(tuán)及其相應(yīng)的紅外吸收頻率

3 420 cm-1附近的吸收峰一般為糖類等碳水化合物中O—H和N—H的伸縮振動(dòng)峰，其中包含分子鍵或分子內(nèi)氫鍵的存在。對(duì)照適鉀處理的HG103和LG122葉片中該吸收峰位于3 410 cm-1，而缺鉀處理的該吸收峰向低頻方向位移了12 cm-1，說(shuō)明缺鉀處理破壞了葉片中氫鍵的結(jié)合。且無(wú)論是否有鉀，施鈉處理與缺鈉處理相比，該吸收峰的位移都沒有明顯變化，表明鈉不能代替鉀的該功能。2 960 cm-1附近的吸收峰代表酯類中—CH3的伸縮振動(dòng)，2 926和2 855 cm-1附近的吸收是酯類和蛋白質(zhì)中—CH2的伸縮振動(dòng)。無(wú)論是否有鉀且無(wú)論是否施鈉，這三個(gè)吸收峰的位置在HG103和LG122中都沒有發(fā)生明顯的變化，而相對(duì)吸光度則有明顯變化，都是缺鉀處理高于施鉀處理。由此可以得出，缺鉀對(duì)酯類和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)沒有影響，但是增加了它們的含量。缺鉀時(shí)施鈉，這三個(gè)峰的相對(duì)吸光度有所增加，HG103增加的幅度與LG122的幾乎一致，說(shuō)明缺鉀時(shí)施鈉能夠增加葉片酯類和蛋白質(zhì)的含量，HG103和LG122增加量之間無(wú)顯著差異； 然而適鉀時(shí)施鈉減少，則表明適鉀條件下施鈉，葉片酯類和蛋白質(zhì)含量有所減少，HG103減少的幅度小于LG122。

在糖類和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)指紋區(qū)(1 800～800 cm-1)，一些峰的位置和高度都發(fā)生了變化。為了提高圖譜的分辨率和減少疊加，對(duì)不同處理在1 800～800 cm-1的FTIR圖譜進(jìn)行精細(xì)表征。

2.2 不同鈉鉀條件下不同基因型棉花葉片的1800-800 cm-1FTIR圖譜分析

1 103和1 078 cm-1附近的吸收峰屬于C—O的伸縮振動(dòng)，主要來(lái)自糖類。HG103和LG122的各個(gè)處理的該峰都沒有發(fā)生缺失，但是相對(duì)吸光度都發(fā)生了改變，表現(xiàn)為： 都是缺鉀處理的高于適鉀處理的，且缺鉀時(shí)施鈉HG103和LG122在該峰的相對(duì)吸光度有所增加，HG103增加的幅度大于LG122； 適鉀時(shí)施鈉有所減少。由此可以看出，缺鉀時(shí)施鈉能夠增加葉片糖類含量，且HG103增加的量大于LG122的，而適鉀時(shí)施鈉使之減少，HG103減少的量小于LG122。

圖2 不同基因型棉花葉片的紅外光譜圖(1 800～800 cm-1)

1 438 cm-1附近的吸收峰是纖維素中—CH3的彎曲振動(dòng)，缺鉀時(shí)該峰缺失，且缺鉀處理補(bǔ)充鈉后這個(gè)峰并沒有出現(xiàn)，表明缺鉀破壞了纖維素的結(jié)構(gòu)，而缺鉀補(bǔ)充鈉并不能緩解這種破壞，即對(duì)于鉀的這一功能，鈉不能完全代替鉀。

表2 不同處理棉花葉片特征峰的相對(duì)吸光度

3 結(jié) 論

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*Corresponding author

(Received Apr. 2, 2015; accepted Aug. 6, 2015)

FTIR Study of Leaf of Different Cotton Genotypes under Potassium Substitution with Sodium

LEI Jing，HAO Yan-shu，WU Xiu-wen，JIANG Cun-cang*

College of Resources and Environmental Sciences，Huazhong Agricultural University，Key Laboratory of Arable Land Conservation(Middle and Lower Reaches of Yangtse River)，Ministry of Agriculture，Wuhan 430070, China

Potassium (K) deficiency affects cotton growth. The substitution effects of sodium (Na) and potassium research have been the focus of attention at home and abroad. The aim of this paper was to study the substitution effects of Na and K on material composition in leaf of two kinds of K-efficiency cotton genotypes (HG103 and LG122) using Fourier to transform infrared (FTIR) spectroscopy. The results showed that: (1) the increment of the relative absorbance of HG103 at peaks 2 960, 2 855 and 2 926 cm-1were the same with LG122 with addition of Na in deficient K, while at peaks 1 078 and 1 103 cm-1, the increment of HG103 was higher than LG122, indicating that in deficient K, Na could promote the synthesis of carbohydrate, protein and esters, wherein the promoting effect on carbohydrate of HG103 was greater than LG122, while for protein and esters, there has no difference. However, the decrement of the relative absorbance at these five peaks of HG103 was higher than LG122 with addition of Na in adequate K, suggesting that in adequate K, the inhibitory effect of Na on carbohydrate, protein and esters of HG103 was less LG122. (2) the peaks at 1 734 and 1 437 cm-1disappeared due to K dificiency, when added Na, these peaks did not appear, implying that the structure of amideⅠband and cellulose was broken when lack of K when added Na has no changes.

Cotton; Genotype; Sodium and potassium replacement; FTIR

2015-04-02，

2015-08-06

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(40801112), 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201203013)資助

雷 晶，女, 1989年生, 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院碩士研究生 e-mail: lj7202@126.com *通訊聯(lián)系人 e-mail: jcc2000@mail.hzau.edu.cn

O657.3

A

10.3964/j.issn.1000-0593(2016)06-1696-04