劉仁奎　劉斌

摘要[目的]明確納他霉素與6種殺菌劑對(duì)木霉毒力的差異并比較納他霉素與6種殺菌劑混配對(duì)木霉M23的毒力。[方法]采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定納他霉素和6種不同殺菌劑以及納他霉素與6種殺菌劑混配對(duì)木霉M23的室內(nèi)毒力。[結(jié)果]6種不同殺菌劑對(duì)木霉的毒力不同，其EC50分別為0.448 4、0.709 9、1.390 8、8.648 3、12.448 1和18.185 6 mg/L；與6種殺菌劑相比，納他霉素表現(xiàn)出較好的殺菌效果，其EC50為1.551 1 mg/L，與百菌清相近?；炫湓囼?yàn)結(jié)果表明，納他霉素與百菌清以3∶1比例、與多菌靈以1∶6比例、與苯醚甲環(huán)唑以1∶6比例混配均具有最高的共毒系數(shù)，其值分別為250.020 0、373.990 3和189.194 4。[結(jié)論]納他霉素與百菌清（3∶1比例）、多菌靈（1∶6比例）、苯醚甲環(huán)唑（1∶6比例）混配均具有較好的增效作用，可進(jìn)一步用于生產(chǎn)實(shí)踐。

關(guān)鍵詞 納他霉素；殺菌劑；農(nóng)藥混配；木霉

中圖分類號(hào) S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2016）05-018-03

Abstract[Objective]The aim was to determine the toxicity difference of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride， and compare toxicity of mixture of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride M23.[Method]By the method of mycelium growing， the indoor toxicity of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride M23 was determined.[Result]The results showed that the 6 fungicides had different control efficiency， with their EC50 values of 0.448 4， 0.709 9， 1.390 8， 8.648 3， 12.448 1 and 18.185 6 mg/L； compared with the 6 fungicides， natamycin show good control effect with its value of 1.551 1 mg/L， similar to chlorothalonil. The mixprocess experiment showed obvious synergies， that the mixture of natamycin and chlorothalonil with ratio of 3∶1 had the highest cotoxicity coefficient of 250.020 0； natamycin and carbendazim with ratio of 1∶6 had the highest cotoxicity coefficient of 373.990 3； natamycin and difenoconazole with ratio of 1∶6 had the highest cotoxicity coefficient of 189.194 4.[Conclusion]The experimental results show that the three mixed proportions of the fungicides（natamycin：chlorothalonil=3∶1，natamycin：carbendazim=1∶6， natamycin：difenoconazole=1∶6） have good synergistic effect and could be used in further production.

Key words Natamycin； Fungicide； Mixed pesticides； Trichoderma viride

木霉（Trichoderma viride）屬于半知菌亞門絲孢綱絲孢目粘孢菌類，是一類普遍存在的真菌，其孢子梗從菌絲上長(zhǎng)出，在瓶梗式的小梗頂部產(chǎn)生分生孢子，分生孢子圓形或橢圓形，單細(xì)胞，淡綠色[1-2]。木霉在自然界分布廣泛，常腐生于木材、種子及植物殘?bào)w上[2-3]。木霉是適應(yīng)性很強(qiáng)的一種真菌，繁殖速度快，在食用菌栽培中能夠污染整個(gè)菇包，通過分泌毒素，抑制、破壞食用菌菌絲細(xì)胞質(zhì)生長(zhǎng)，阻礙食用菌菌絲生長(zhǎng)，且能生長(zhǎng)在生長(zhǎng)勢(shì)較弱的菌絲體上，使組織細(xì)胞溶解死亡。木霉對(duì)蘑菇、香菇、平菇、銀耳、木耳等多種食用菌菌種和栽培菇床都能侵染危害，導(dǎo)致菌種成品率降低和產(chǎn)量大幅度減少。木霉主要通過侵染食用菌的菌種、菌筒、栽培料和子實(shí)體，如香菇受害后菌柄和菌蓋背面變褐腐爛，病部產(chǎn)生綠色霉層；銀耳早期染病的子實(shí)體萎縮不長(zhǎng)，后期感染的子實(shí)體逐漸腐爛，產(chǎn)量損失巨大[4]。因此，開展木霉防治研究十分必要。

使用現(xiàn)代殺菌劑防治植物病害是保證農(nóng)作物高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的重要措施之一，但單一藥劑的使用在病害防治方面不僅面臨著殺菌譜小的問題，更重要的是由于長(zhǎng)期單一使用某種殺菌劑，必將導(dǎo)致病害抗藥性的產(chǎn)生[5]，而殺菌劑混配能夠解決這些農(nóng)藥使用的不足[6]。多菌靈、百菌清已被廣泛應(yīng)用于食用菌生產(chǎn)中的病害防治[7]，多菌靈為苯并咪唑類殺菌劑，能干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細(xì)胞分裂，起到殺菌作用，百菌清為取代苯類廣譜性殺真菌劑，能與真菌細(xì)胞中的三磷酸甘油酸醛脫氫酶發(fā)生作用與該酶中含有半胱氨酸的蛋白質(zhì)相結(jié)合，從而破壞該酶活性，使真菌細(xì)胞的新陳代謝受破壞而失去活性；苯醚甲環(huán)唑是由先正達(dá)公司開發(fā)的具有保護(hù)、治療和內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑，屬甾醇合成抑制劑，可阻止真菌的生長(zhǎng)，對(duì)子囊菌亞門、擔(dān)子菌亞門、半知菌亞門多個(gè)屬病原菌引起的作物病害均有良好的保護(hù)治療作用[8]；嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌農(nóng)藥，高效、廣譜，對(duì)幾乎所有的真菌界（子囊菌亞門、擔(dān)子菌亞門、鞭毛菌亞門和半知菌亞門）病害如白粉病、銹病、穎枯病、網(wǎng)斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性；甲基硫菌靈是一種廣譜性內(nèi)吸低毒殺菌劑，具有內(nèi)吸、預(yù)防和治療作用，是由日本曹達(dá)株式會(huì)社研制開發(fā)出來，能夠有效防治多種作物病害。納他霉素是一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌劑，能夠?qū)Ｐ缘匾种茙缀跛械拿咕徒湍妇日婢?，而?duì)細(xì)菌和病毒無效。納他霉素作為抗生素極安全，不具有急性毒性，通常用于食品的表面防腐，也被醫(yī)學(xué)上用于治療真菌感染。為明確納他霉素與不同類型傳統(tǒng)殺菌劑對(duì)木霉的藥效差異，筆者研究了納他霉素與百菌清、苯醚甲環(huán)唑、嘧菌酯、甲基硫菌靈、多菌靈溴菌腈6種殺菌劑單劑及混配對(duì)木霉的室內(nèi)毒力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株。

木霉M23由廣西大學(xué)食用菌研究所分離獲得，為木霉的一個(gè)亞種，對(duì)食用菌產(chǎn)生的病害較嚴(yán)重。

1.1.2 供試培養(yǎng)基。

馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g，水1 L。

1.1.3 供試殺菌劑。

98%納他霉素，新疆梅花氨基酸責(zé)任有限公司；98%多菌靈原藥，江蘇省江陰蘇利化學(xué)股份有限公司；97.2%百菌清原藥，江蘇省江陰蘇利化學(xué)股份有限公司；98%溴菌腈原藥，江蘇省鹽城經(jīng)緯化工有限公司；95.5%苯醚甲環(huán)唑原藥，浙江禾本科技有限公司；98%嘧菌酯原藥，浙江省湖州南潯農(nóng)惠達(dá)化工有限公司；98%甲基硫菌靈原藥，安徽廣信農(nóng)化股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定。

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[9]。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定藥劑試驗(yàn)濃度并配制成適量的各供試藥劑母液，按量加入熔化并冷卻至50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基中，配制成不同濃度的加藥培養(yǎng)基。納他霉素的濃度梯度設(shè)置為0.500、1.000、1.500、2.000、2.500 mg/L；嘧菌酯、溴菌腈、甲基硫菌靈的濃度梯度設(shè)置為1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 mg/L；百菌清的濃度梯度設(shè)置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；苯醚甲環(huán)唑的濃度梯度設(shè)置為0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg/L；多菌靈的濃度梯度設(shè)置為0.250、0.500、1.000、2.000、4.000 mg/L。將納他霉素與不同殺菌劑按A（6∶1）、B（3∶1）、C（1∶1）、D（1∶3）、E（1∶6）質(zhì)量比進(jìn)行混配，其中納他霉素與嘧菌酯混配的濃度梯度設(shè)置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；納他霉素與溴菌腈的混配濃度梯度設(shè)置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；納他霉素與多菌靈的混配濃度梯度設(shè)置為0.250、0.500、1.000、2.000、4.000 mg/L；納他霉素與百菌清的混配濃度梯度設(shè)置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；納他霉素與苯醚甲環(huán)唑混配濃度梯度設(shè)置為0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg/L；納他霉素與甲基硫菌靈混配濃度梯度設(shè)置為1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 mg/L，各處理3次重復(fù)，以蒸餾水為對(duì)照。將木霉M23置于無藥的PDA培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)3 d后，從菌落邊緣打取直徑為0.5 cm的菌碟，菌絲朝下接種于系列含藥PDA平板中央，每處理設(shè)5次重復(fù)，以不含藥的平板為對(duì)照，3 d后采用十字交叉法測(cè)量各處理菌落直徑。

1.2.2 殺菌劑混配劑效果評(píng)價(jià)。

根據(jù)不同處理中木霉M23菌落直徑的平均凈增長(zhǎng)直徑計(jì)算抑制率，利用 DPS 軟件，分別建立藥劑質(zhì)量濃度自然對(duì)數(shù)值（x）和抑制率幾率值（y）之間的回歸關(guān)系，計(jì)算各供試藥劑的毒力回歸方程、EC50、相關(guān)系數(shù)及其95%置信區(qū)間[10-12]。

混配劑作用效果評(píng)價(jià)是依據(jù)共毒系數(shù)（CTC）。各藥劑毒力指數(shù)（TI）、復(fù)配劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）、理論毒力指數(shù)（TTI）和共毒系數(shù)（CTC）計(jì)算參照Sun等[13]的方法進(jìn)行。

TI=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的EC50/供試藥劑的EC50×100

ATI=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的EC50/復(fù)配劑藥劑的EC50×100

TTI=TI（A）×A在混劑中所占百分比+TI（B）×B在復(fù)配劑中所占百分比

CTC=[混劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）/混劑理論毒力指數(shù)（TTI）]×100

CTC≥170為明顯增效；120≤CTC<170為略有增效；70≤CTC<120為相加作用；CTC<70為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑單劑對(duì)木霉M23的毒力

由表1可知，苯醚甲環(huán)唑?qū)δ久筂23的抑制作用最強(qiáng)，EC50是0.448 4 mg/L，其次是百菌清，EC50是1.390 8 mg/L，隨后依次為溴菌腈、嘧菌酯、甲基硫菌靈，它們的EC50分別為8.648 3、12.448 1、18.185 6 mg/L，抑菌效果較弱；納他霉素對(duì)木霉M23的EC50則為1.551 1 mg/L，抑菌效果明顯。

由于百菌清、多菌靈與苯醚甲環(huán)唑的殺菌效果較高，并且與納他霉素的殺菌機(jī)理皆不同，所以選擇納他霉素與百菌清、多菌靈與苯醚甲環(huán)唑進(jìn)行后續(xù)混配試驗(yàn)。

2.2 殺菌劑混配對(duì)木霉M23的毒力

由表2可知，混配組合B、C、D、E的EC50較低，有較好的抑菌效果；組合A的EC50較大，其抑菌效果較差。組合B、C的共毒系數(shù)分別為250.020 0、219.270 0，增效明顯；組合A、D略有增效，組合E有拮抗作用。

由表3可知，混配組合的EC50均較低，抑菌效果均較好；組合E增效明顯，組合D略有增效，組合A、B、C的共毒系數(shù)分別是60.826 7、62.680 9、138.236 8，都為拮抗作用。

由表4可知，混配組合的EC50均較低，抑菌效果較好；組合E的共毒系數(shù)為189.194 4，明顯增效，組合D略有增效，組合A、B、C都產(chǎn)生拮抗作用，共毒系數(shù)分別為51.821 1、90.475 5、87.644 2。

3 結(jié)論與討論

該研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了納他霉素與不同殺菌劑對(duì)木霉M23的毒力。結(jié)果表明，納他霉素與6種殺菌劑對(duì)木霉M23均有一定的殺菌效果，且隨著濃度的升高效果增強(qiáng)，毒力最好的是苯醚甲環(huán)唑，其次是多菌靈、百菌清、納他霉素，而溴菌腈、甲基硫菌靈、嘧菌酯對(duì)木霉M23的毒力均較差，由于納他霉素對(duì)木霉具有較好的殺菌作用，且其本身為較安全的抑菌殺菌劑，所以做進(jìn)一步的殺菌劑混配篩選試驗(yàn)。不同殺菌劑室內(nèi)毒力試驗(yàn)結(jié)果中的斜率越大，表明病原菌對(duì)該藥劑反應(yīng)的靈敏度越高，即殺菌劑的抑菌效果是隨著殺菌劑質(zhì)量濃度的增加而提高的。結(jié)合各供試藥劑的EC50發(fā)現(xiàn)：與其他6種殺菌劑相比，木霉M23對(duì)納他霉素的敏感性最高，且相對(duì)防效也較好，具有很好的應(yīng)用前景?；炫湓囼?yàn)表明，納他霉素與百菌清在B（3∶1）、C（1∶1）混配比例下的增效作用明顯，可作為2種藥劑混配的依據(jù)；納他霉素與多菌靈以及納他霉素與苯醚甲環(huán)唑在E（1∶6）混配比例下的增效作用明顯，可作為殺菌劑混配的依據(jù)。

室內(nèi)毒力試驗(yàn)結(jié)果表明，與常規(guī)農(nóng)用殺菌劑相比，納他霉素具有良好防效，且與幾種殺菌劑按一定比例混配也具有良好防效，為納他霉素的實(shí)際應(yīng)用提供了借鑒。室內(nèi)毒力測(cè)定是在相對(duì)均一的條件下進(jìn)行的，生產(chǎn)上實(shí)際用藥會(huì)因環(huán)境因素而出現(xiàn)與室內(nèi)試驗(yàn)不同的結(jié)論，有研究表明多菌靈的室內(nèi)毒力測(cè)定與田間藥效結(jié)果存在差別[14]，所以需要進(jìn)一步試驗(yàn)對(duì)結(jié)果室內(nèi)毒力測(cè)定進(jìn)行驗(yàn)證。木霉為半知菌亞門真菌，與平菇及其他食用菌品種擔(dān)子菌亞門的生長(zhǎng)特性有差異，也需進(jìn)一步對(duì)包括平菇在內(nèi)的其他食用菌品種做進(jìn)一步的安全性評(píng)價(jià)。

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