趙慶偉，馬書軍，劉　云，裴菲菲

(河北省婦幼保健中心，河北 石家莊 050031)

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河北省12 352例農(nóng)村婦女人乳頭瘤病毒高危亞型篩查結(jié)果分析

趙慶偉，馬書軍，劉云，裴菲菲

(河北省婦幼保健中心，河北 石家莊 050031)

[摘要]目的了解河北省農(nóng)村婦女人乳頭瘤病毒高危亞型(HPV-HR)感染及其基因分布情況，為預(yù)防子宮頸癌前病變及子宮頸癌提供參考依據(jù)。方法以2014年8月至2015年8月在河北省婦幼保健中心進行人乳頭瘤病毒高危亞型篩查的12 352例農(nóng)村婦女作為研究對象，按年齡分成4組：31～40歲組、41～50歲組、51～60歲組、60～70歲組。采用熒光定量PCR技術(shù)進行人乳頭瘤病毒高危亞型篩查。結(jié)果在12 352例受檢者中HPV-HR感染率占10.29%(1271/12 352)，其中31～40歲組HPV-HR感染率占11.36%(364/3 205)、41～50歲組HPV-HR感染率占10.15%(560/5 515)、51～60歲組占9.86%(293/2 972)、60～70歲組HPV-HR感染率占8.18%(54/660)，31～40歲組與61～歲組HPV-HR總感染率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.72，P<0.05)，其他各組之間HPV-HR總感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。在1 271例HPV-HR感染病例中，HPV-16、HPV-18感染和HPV-16、HPV-18合并其他12種HPV高危亞型(HPV-HR12)感染占26.67%(339/1 271)，HPV-HR12(包括：HPV-31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)感染者932例，占所有感染病例的73.33%(932/1 271)。結(jié)論河北省農(nóng)村婦女人乳頭瘤病毒高危亞型(HPV-HR)感染處于中等水平，并且HPV-16型具有較高的感染率；31～40歲的年輕女性HPV-HR感染率達最高，隨著年齡的增高，感染比例逐步緩慢減少。該結(jié)果對農(nóng)村婦女宮頸癌防治和農(nóng)村婦女HPV-HR篩查策略的實施具有指導(dǎo)意義。

[關(guān)鍵詞]農(nóng)村婦女；人乳頭瘤病毒；高危亞型；篩查

在全球范圍內(nèi)，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率均較高。全世界每年因?qū)m頸癌死亡的人數(shù)約30萬，而新發(fā)宮頸癌病例更高達50萬人[1]。流行病學(xué)和生物學(xué)資料已經(jīng)證明人乳頭瘤病毒(human papilloma virus, HPV)感染是子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)及宮頸癌的主要病因，尤其是高危亞型HPV感染[2]。HPV感染狀況具有很強的地域性，不同國家與地區(qū)HPV感染基因分型的流行病學(xué)分布不同[3]。為研究河北省農(nóng)村婦女HPV感染及其基因型分布情況，本研究利用多色熒光PCR技術(shù)對12 352名農(nóng)村婦女進行HPV高危亞型檢測，為宮頸癌防治提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1研究對象

以2014年8月至2015年8月在河北省婦幼保健中心進行人乳頭瘤病毒高危亞型篩查的12 352例農(nóng)村婦女作為研究對象。納入標準：戶籍在寧晉、淶水、灤南、豐寧4個縣的農(nóng)村已婚婦女，年齡31～70歲，平均年齡44.36±6.78歲，自愿參加并且能接受檢查者；排除標準：因非宮頸癌或非宮頸病變原因行子宮全切術(shù)者。把以上就檢者按年齡分成四組,其中31～40歲組3 205例、41～50歲組5 515例、51～60歲組2 972例、60～70歲組660例。

1.2標本采集

宮頸刷和宮頸樣本保存管由石家莊新世紀生物工程有限公司提供。暴露宮頸，擦除宮頸粘液。將宮頸刷插入宮頸口1～1.5cm，直至最外側(cè)刷毛觸到外宮頸，逆時針方向旋轉(zhuǎn)5圈取樣，抽出宮頸刷，放入加有專用保存液的保存管中送檢。樣本于4℃保存，冷鏈送河北省婦幼保健中心實驗室，48小時內(nèi)完成檢測。

1.3儀器與試劑

采用羅氏公司生產(chǎn)的COBAS4800全自動HPV核酸檢測系統(tǒng)，HPV檢測試劑盒及全部耗材由羅氏公司提供。

1.4檢測方法

檢測HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68共14種高危亞型，并同時分型HPV16和HPV18型，其他12種高危亞型不再具體分型。檢測通道：FAM通道檢測12種高危型、JOE通道檢測HPV16型、ROX通道檢測HPV18型、CY5通道檢測β-globin內(nèi)參。操作按照SOP文件執(zhí)行，操作步驟包括：①上樣，包括樣本上機、耗材上機、試劑上機；②樣本DNA提取和PCR反應(yīng)體系制備，以上過程均由儀器自動完成；③封膜轉(zhuǎn)板，取出PCR反應(yīng)體系板，用透明膜密封，放入COBAS 480 Z 實時定量熒光PCR儀； ④PCR擴增與熒光檢測，擴增程序為50℃反應(yīng)2min ，經(jīng)95℃ 10min進入循環(huán)，循環(huán)溫度及時間為95℃ 15s、60℃ 60s共50個循環(huán)，60℃時檢測熒光；⑤結(jié)果判讀：陰陽性質(zhì)控在控，樣本在FAM、HEX、ROX熒光檢測通道CT值≤40，其內(nèi)對照β-globin在Cy5熒光檢測通道CT值≤40，結(jié)果儀器自動判斷為陽性；陰陽性質(zhì)控在控，樣本在FAM、HEX、ROX熒光檢測通道CT值≥40，其內(nèi)對照β-globin在Cy5熒光檢測通道CT值≤40，結(jié)果儀器自動判斷為陰性，否則無論是陰陽性質(zhì)控失控或其內(nèi)對照β-globin在Cy5熒光檢測通道CT值≥40，儀器均自動判定為無效。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，各組間HPV高危亞型感染檢出率差異用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 人乳頭瘤病毒高危亞型總體感染狀況

12 352例樣本中檢出HPV高危亞型1 271例，總感染率為10.29%(1271/12 352)。各HPV高危亞型感染頻數(shù)及構(gòu)成比見表1。

表1HPV高危亞型總體分布

Table 1 Overall distribution of HPV-HR subtypes

2.2 人乳頭瘤病毒高危亞型感染的年齡分布

各年齡組HPV高危亞型總感染情況見表2及圖1，其中31～40歲組HPV高危亞型感染率最高，與61～歲組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.72，P<0.05),其余各組之間HPV高危亞型總感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。

表2HPV高危亞型總體感染的年齡分布狀況[n(%)]

Table 2Distribution of age of cases infected with HPV-HR[n(%)]

圖1各年齡組HPV-HR感染率分布狀況

Fig.1 Infection rate distribution of HPV-HR among different age groups

2.3不同年齡組人乳頭瘤病毒高危亞型型別分布

各年齡組HPV高危亞型型別分布見表3，數(shù)據(jù)顯示本地區(qū)HPV18型感染率較低，HPV16和HPV-HR12型感染率較高。

表3不同年齡組HPV高危亞型型別分布[n(%)]

Table3Distribution of HPV-HR subtypes among

注：*包括合并其他型別感染。

3討論

3.1感染率及基因型分布規(guī)律及特點

本研究以國家農(nóng)村婦女宮頸癌篩查項目為依托，標本來源于河北省東西南北方位4個縣多個自然村，具有普遍的代表性，標本量較大能較好地反映河北省農(nóng)村婦女HPV高危亞型的感染狀況。研究結(jié)果顯示我省農(nóng)村婦女HPV高危型總感染率為10.29%，遠遠低于樊靜等[4]報道的陜西省的26.26%，高于北京地區(qū)HPV總體感染率6.6%[5], 與新疆的13%[6]相近。遠遠低于美國2014年報道的HPV感染率42.5%～42.7%[7]，說明了河北省農(nóng)村婦女HPV感染處于中等水平，以上結(jié)果反映了不同地區(qū)和人群HPV流行的地域差別和人群差別。與本地區(qū)HPV各亞型的人群攜帶率，生活習(xí)慣以及人群基因易感性是否有關(guān)有待進一步研究。本次研究共檢出HPV16型262例(含合并其他型)，陽性占比為20.61%，與其他型別相比具有較高的感染率，這與國際癌癥研究所研究發(fā)現(xiàn)的結(jié)果一致[3,7]。共檢出HPV18型85例，感染率0.69%，陽性占比為6.69%。檢出HPV-HR12型932例(不含合并16、18型)，感染率為7.55%，占所有陽性病例的73.33%，本實驗方法不能具體區(qū)分哪種亞型感染，但由于臨床上對HPV-HR12亞型的處理原則一樣，所以并不影響臨床的處理。

3.2年齡分布特點

本研究顯示31～40歲HPV高危亞型的感染率最高為11.36%，這與北京地區(qū)[8]篩查的人群感染高峰年齡在30～34歲之間(檢出率為11.25%)相一致，考慮與年輕女性性活動旺盛，生殖道局部和全身免疫系統(tǒng)未經(jīng)致敏，易被HPV感染有關(guān)。隨著年齡的增長，性閱歷的豐富，女性生殖道局部和全身免疫系統(tǒng)將被致敏并逐漸發(fā)育成熟，抗病能力相應(yīng)增強[8]，感染率逐漸下降，這與國內(nèi)外研究結(jié)果一致[8-9]。HPV感染絕大多數(shù)為隱匿性、一過性感染，僅持續(xù)一段時間后便被機體自然清除，但可重復(fù)感染，HPV高危亞型持續(xù)感染，則很可能使宮頸的細胞學(xué)形態(tài)發(fā)生異常改變，進一步發(fā)生宮頸癌前病變及宮頸癌。據(jù)文獻報道：宮頸原位癌高發(fā)年齡為30～35歲，浸潤癌為45～55歲，近年來其發(fā)病有年輕化趨勢[9]。本研究發(fā)現(xiàn)農(nóng)村婦女中HPV高危亞型感染在31～70歲各年齡段均有一定的感染率，最低為61～70歲組，但仍高達8.18%，因此提醒廣大農(nóng)村婦女均應(yīng)積極進行HPV高危亞型檢測。

一項研究報道，中國農(nóng)村婦女的宮頸癌死亡率遠遠高于全國的平均水平[10]，這與農(nóng)村宮頸癌篩查普及率低有關(guān)。農(nóng)村婦女由于受經(jīng)濟條件、醫(yī)療資源的限制，保健意識差，對宮頸癌篩查的重要性了解較少，除了參與免費宮頸癌篩查項目外，只有少數(shù)女性每年主動進行宮頸癌篩查，這就錯過了早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變的機會，因此錯過了最好治療時機。要想降低農(nóng)村宮頸癌的死亡率，只有加大農(nóng)村婦女宮頸癌篩查的宣傳力度，大力推廣宮頸癌篩查，由于HPV DNA檢測敏感度高于細胞學(xué)檢查[11]，因此在農(nóng)村地區(qū)開展HPV高危亞型篩查意義重大。

通過本次研究使我們認識到本地區(qū)農(nóng)村婦女宮頸HPV高危亞型感染的基因分布及年齡特點，為宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的區(qū)域性防治提供了必要的病毒流行病學(xué)數(shù)據(jù)和臨床病例分流依據(jù)，對進一步推廣農(nóng)村婦女HPV高危亞型篩查策略具有切實參考意義。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Results of human papillomavirus high risk subtypes screening of 12 352 rural women in Hebei Province

ZHAO Qing-wei, MA Shu-jun, LIU Yun, PEI Fei-fei

(Hebei Provincial Maternity and Child Healthcare Center, Hebei Shijiazhuang 050031, China)

[Key words]rural women; human papillomavirus (HPV); high-risk subtypes; screening

[Abstract]Objective To understand the epidemic situation of human papillomavirus high risk (HPV-HR) infection and its gene distribution among rural women in Hebei Province, so as to provide reference for prevention of cervical precancerous lesions and cervical cancer. Methods Totally 12 352 rural women taking HPV-HR examination in Hebei Provincial Maternity and Child Healthcare Center from August 2014 to August 2015 were selected and divided into four age groups: 31-40 years-old group, 41-50 years-old group, 51-60 years-old group and 61-70 years-old group. The multi-color real time fluorescence quantitative PCR technique was used for HPV-HR screening. Results The infection rate of HPV-HR among 12 352 rural women was 10.29% (1 271/12 352). The infection rate of HPV-HR in 31-40 years-old group was 11.36% (364/3 205), in 41-50 years-old group was 10.15% (560/5 515), in 51-60 years-old group was 9.86% (293/2 972), and in 61-70 years-old group was 8.18 (54/660). The difference in HPV-HR infection rate was statistically significant between 31-40 years-old group and 61-70 years-old group (χ2=5.72,P<0.05), but it was not significant among other groups (allP>0.05). The infection rate of HPV-16, HPV-18 and HPV-16/HPV-18 combined with other 12 HPV high-risk subtypes (HPV-HR12) accounted for 26.67% (339/1 271). There were 932 cases infected with HPV-HR12 (including HPV-31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 and 68), which accounted for 73.33% (932/1 271) of HPV-HR infection cases. Conclusion The infection rate of HPV-HR among rural women is medium level in Hebei Province, and the infection rate of HPV-16 is higher. The infection rate of HPV-HR reached peak among young women aged 31-40 years old, and it declines gradually with age increasing. The data are helpful for cervical cancer prevention and implement of HPV-HR screening strategy for rural women.

[收稿日期]2015-12-03

[作者簡介]趙慶偉(1976-)，女，主管護師，主要從事婦科常見病和宮頸癌篩查方面的研究。

[通訊作者]馬書軍，副主任技師。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.05.035

[中圖分類號]R711

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5293(2016)05-0654-03