王 平，劉海隆，張 艷，林哲敏，晁 哲，邢漫萍

（1.海南省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，海南?？?71100；2.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南?？?71100）

三種中藥組方對(duì)小鼠熱應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用

王 平1，劉海隆2，張 艷2，林哲敏2，晁 哲2，邢漫萍2

（1.海南省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，海南?？?71100；2.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南?？?71100）

探討中藥組方A、B和C對(duì)小鼠熱應(yīng)激血液生理生化指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用，將ICR小鼠110只，取100只用生化培養(yǎng)箱復(fù)制熱應(yīng)激病理模型，隨機(jī)分為10組，每組10只，每天分別灌服不同劑量（0.2、0.4、0.6 mL）的中藥組方煎劑；第10組為陽(yáng)性對(duì)照組；另外10只為陰性對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組分別灌服生理鹽水0.4 mL，各組連續(xù)灌胃10d。各組于末次灌藥4 h后，眼球采血，分離血清檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo)。結(jié)果表明：與陽(yáng)性對(duì)照組相比三種中藥組方各劑量組均能不同程度改善熱應(yīng)激小鼠的血液生理生化指標(biāo)異常，以中藥組方C在中劑量下調(diào)節(jié)作用最為明顯，血清Na+、K+、Cl－；血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)濃度與陰性對(duì)照組差異不顯著（P>0.05），小鼠血清中的AKP濃度升高，AST和ALT濃度降低與其他試驗(yàn)組比較最為明顯，恢復(fù)最好。

中藥；小鼠；熱應(yīng)激

近年來，隨著集約化高密度飼養(yǎng)方式的迅速發(fā)展，環(huán)境溫度成為養(yǎng)殖過程密切關(guān)注的一個(gè)中心環(huán)節(jié)。尤其在炎熱的夏季，熱應(yīng)激一直是養(yǎng)殖業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)問題之一，加強(qiáng)防暑降溫研究，防治熱應(yīng)激，保持畜禽高產(chǎn)性能，使畜禽安全度夏，一直是人們追求的目標(biāo)。對(duì)于環(huán)境溫度過高引起的畜禽熱應(yīng)激反應(yīng)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量防治研究，主要是針對(duì)畜禽一系列生理變化，添加某些化學(xué)藥物進(jìn)行控制，如使用維生素、氨基酸、電解質(zhì)等，這些方法盡管有一定效果[1]，但長(zhǎng)期使用對(duì)畜禽機(jī)體及產(chǎn)品都會(huì)產(chǎn)生不良影響。近年來，隨著國(guó)內(nèi)對(duì)中草藥飼料添加劑研究的增多，夏季防暑的中草藥配方也引起了學(xué)者們的關(guān)注。許多研究表明，中草藥有利于維持內(nèi)分泌系統(tǒng)的穩(wěn)定和正常的新陳代謝，為機(jī)體抵抗高溫提供物質(zhì)基礎(chǔ)。多種中藥混合組方添加，發(fā)揮協(xié)同作用，減輕熱應(yīng)激造成的機(jī)能紊亂，可減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量的過多損耗，在補(bǔ)充養(yǎng)分的同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，來維持機(jī)體正常生理機(jī)能及促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，從而達(dá)到緩解熱應(yīng)激的效果[2]。本研究通過不同的中藥組方對(duì)熱應(yīng)激狀態(tài)下小鼠的作用，研究其對(duì)小鼠血液部分生理生化指標(biāo)的變化，為動(dòng)物防暑抗暑尋找較好的治療方劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠110只雌雄各半,體重為18～22 g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 ｛合格證號(hào)SCXK(寧)2014-0001｝。

1.1.2 檢測(cè)試劑

鈉離子檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140506），鉀離子檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140618），氯離子檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140405），血清總蛋白（TP）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140613），白蛋白（ALB）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140521），谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140612），谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140606），堿性磷酸酶(AKP)檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20140620）。均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 供試藥材

中藥組方 A:荷葉 6g、生地 3g、桑葉 3g、藿香3g、黃芩 3g、酸棗仁 3g、梔子 3g、麥芽 3g、麥冬 3g；

中藥組方B:青蒿6g、知母 3g、生地 3g、菊花3g、黃芩 3g、木通 3g、酸棗仁 3g、麥芽 3g、麥冬 3g；

中藥組方 C：香薷 6g、薄荷 3g、梔子 3g、黃芩3g、藿香 3g、紫草 3g、石菖蒲 3g、麥冬 3g、山楂 3g。將以上方劑加入200mL冷水浸泡1h以上，然后煎煮20min，過濾，濃縮至30毫升，相當(dāng)于原藥材1g/mL。移入空瓶中，冷藏備用。

1.1.4 主要儀器

恒溫生化培養(yǎng)箱（型號(hào)LRH-250）、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Multiskan GO）、低溫離心機(jī)、 半自動(dòng)生化分析儀（荷蘭威圖microlab300）。

1.1.5 試驗(yàn)方法

取ICR小鼠110只，雌雄各半，取100只用生化培養(yǎng)箱復(fù)制熱應(yīng)激病理模型，設(shè)置溫度35℃，相對(duì)濕度60～70%；熱應(yīng)激組飼養(yǎng)4小時(shí)，小鼠表現(xiàn)出食欲減小，飲水量增加，大量出汗，被毛盡濕，精神狂躁不安后，陰性對(duì)照組置于溫度20℃，相對(duì)濕度50%室內(nèi)飼養(yǎng)。將模型組隨機(jī)分為10組，每組10只，1到3組灌服組方A，劑量分別為 0.2、0.4、0.6 mL；4 到 6 組灌服組方 B，劑量分別為為 0.2、0.4、0.6 mL；7 到 9 組灌服組方C，劑量分別為 0.2、0.4、0.6 mL；第 10 組為陽(yáng)性對(duì)照組；另外10只為陰性對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組分別灌服生理鹽水0.4 mL，各組連續(xù)灌胃10d。各組于末次灌藥4 h后，眼球采血，分離血清檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo)。分別檢測(cè)血清Na+、K+、CL-，血清總蛋白（TP）、血清白蛋白（ALB）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶 （ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、堿性磷酸酶(AKP)含量。

1.1.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果

2.1 三種中藥組方對(duì)血清中 Na+、K+、CL-濃度的影響

表 1中藥組方 A對(duì)小鼠血清中 Na+、K+、CL-濃度的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。

由表1可以看出，熱應(yīng)激狀態(tài)下，小鼠血清中的Na+濃度較陰性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，而K+和CL-濃度均較陰性對(duì)照組升高極顯著(P<0.01)。灌服中藥組方A后，低、中、高3個(gè)劑量組的Na+濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，中、高2個(gè)劑量組最為顯著，已回升至正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。中、高2個(gè)劑量組的K+濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)。中、高2個(gè)劑量組的CL-濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，其中中劑量組最為顯著，降低至正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。

表2 中藥組方B對(duì)小鼠血清中 Na+、K+、CL-濃度的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。

由表2可以看出，灌服中藥組方B后，低、中、高3個(gè)劑量組的Na+濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，但與陰性對(duì)照組差異極顯著（P<0.01）。低、中、高3個(gè)劑量組的K+濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，但與陰性對(duì)照組差異極顯著（P<0.01）。中、高2個(gè)劑量組的CL-濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，其中中劑量組最為顯著，降低至正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。

表3 中藥組方C對(duì)小鼠血清中Na+、K+、CL-濃度的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。

由表3可以看出，灌服中藥組方C后，低、中、高3個(gè)劑量組的Na+濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，中、高2個(gè)劑量組最為顯著，已回升至正常水平 （與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。低、中、高3個(gè)劑量組的K+濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著 (P<0.01)，中劑量組最為顯著，已降低至正常水平（與陰性對(duì)照組相比P>0.05）。低、中、高3個(gè)劑量組的CL-濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，其中中、高2個(gè)劑量組最為顯著，降低至正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。

2.2 三種中藥組方對(duì)小鼠血清中血清總蛋白（TP）、血清白蛋白（ALB）濃度的影響

表4 中藥組方A對(duì)小鼠血清蛋白質(zhì)含量的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。

由表4可以看出，熱應(yīng)激狀態(tài)下，小鼠血清中的TP，ALB濃度較陰性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)。灌服中藥組方A后，低、中、高3個(gè)劑量組的TP濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組均呈現(xiàn)回升趨勢(shì)，其中，高劑量組最為顯著，已回升正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。低、中、高3個(gè)劑量組的ALB濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，與陰性對(duì)照組相比，差異極顯著（P<0.01)。

表5 中藥組方B對(duì)小鼠血清蛋白質(zhì)含量的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。由表5可以看出，灌服中藥組方B后，低、中、高3個(gè)劑量組的TP濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組均呈現(xiàn)回升趨勢(shì)，但與陰性對(duì)照組相比，差異仍極顯著（P<0.01)。低、中、高3個(gè)劑量組的ALB濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，中劑量組最為顯著，已回升正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。

表6 中藥組方C對(duì)小鼠血清蛋白質(zhì)含量的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。由表6可以看出，灌服中藥組方C后，低、中、高3個(gè)劑量組的TP濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組均呈現(xiàn)回升趨勢(shì)，其中，中劑量組最為顯著，已回升正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。低、中、高3個(gè)劑量組的ALB濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，中劑量組最為顯著，已回升正常水平（與陰性對(duì)照組相比，P>0.05)。

2.3 三種中藥組方對(duì)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)濃度的影響

表7 中藥組方A對(duì)小鼠血清酶活性的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。

由表7可以看出，熱應(yīng)激情況下，小鼠血清中的AKP濃度較陰性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，而AST和ALT濃度均較陰性對(duì)照組升高極顯著(P<0.01)。灌服中藥組方A后，低、中、高3個(gè)劑量組的AKP濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，高劑量組最為顯著（P<0.01)。 低、中、高3個(gè)劑量組的ALT濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)。中、高2個(gè)劑量組的AST濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)。

表8 中藥組方B對(duì)小鼠血清酶活性的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。由表8可以看出，灌服中藥組方B后，低、中、高3個(gè)劑量組的AKP濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，高劑量組最為顯著，與陰性對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05)。中、高2個(gè)劑量組的ALT濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)。低、中、高2個(gè)劑量組的AST濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，但與陰性對(duì)照組相比差異極顯著（P<0.01)。

表9 中藥組方C對(duì)小鼠血清酶活性的影響

注：表內(nèi)同列肩標(biāo)相同字母者差異不顯著（P>0.05），不同大寫字母者差異極顯著（P<0.01）。

由表9可以看出，灌服中藥組方C后，低、中、高3個(gè)劑量組的AKP濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組回升極顯著(P<0.01)，其中，高劑量組最為顯著，與陰性對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05)。低、中、高3個(gè)劑量組的ALT濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)。低、中、高2個(gè)劑量組的AST濃度均較陽(yáng)性對(duì)照組降低極顯著(P<0.01)，但與陰性對(duì)照組相比差異極顯著（P<0.01)。

3 討論

熱應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)一系列的神經(jīng)和內(nèi)分泌變化，引起細(xì)胞新陳代謝的改變，從而引起血液生理生化指標(biāo)的改變。焦玉蘭[3]和謝建中[4]的研究表明熱應(yīng)激可導(dǎo)致離子濃度的顯著性變化，熱應(yīng)激小鼠的血清 K+、Cl－、ALT、AST 濃度顯著升高，Na+、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(AKP)的濃度顯著降低，從而將熱應(yīng)激的傷害具體化，如消化機(jī)能低迷，攝食下降，物質(zhì)攝入減少，神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，新陳代謝發(fā)生改變，組織受到損傷等[5]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，三種中藥組方對(duì)小鼠血清的電解質(zhì)濃度的異常變化較陽(yáng)性對(duì)照組均得到不同程度改善，各用藥組小鼠的血清ALB和TP含量均得以一定程度恢復(fù)。表明中藥方劑在一定程度上可改善由熱應(yīng)激引起的小鼠電解質(zhì)的紊亂，抑制由高溫引起的蛋白質(zhì)分解，減輕組織損傷程度，從而起到緩解高溫?zé)釕?yīng)激的作用。

通過對(duì)中藥組方A、B、C對(duì)熱應(yīng)激小鼠電解質(zhì)、血清蛋白質(zhì)及血清活性酶具體數(shù)據(jù)分析，以中藥組方C在中劑量情況下對(duì)小鼠緩解熱應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用最明顯，血清Na+、K+、Cl－。血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)與陰性對(duì)照組差異不顯著（P>0.05），小鼠血清中的 AKP濃度升高，AST和ALT濃度降低與其他試驗(yàn)組比較最為明顯，恢復(fù)最好。中藥組方C所選中草藥，從中獸醫(yī)的角度來講，主藥香薷能祛暑解表，用于外感風(fēng)邪暑濕；薄荷適于辛涼解表；梔子清熱瀉火、涼血解毒；黃芩清熱燥濕、瀉火解毒；藿香芳香化濕、解表邪；紫草涼血，活血，清熱，解毒；石菖蒲安神開竅、芳香化濕又能健胃，起鎮(zhèn)定作用；山楂有消導(dǎo)作用，刺激食欲；麥冬清熱養(yǎng)陰、養(yǎng)胃生津。諸藥合用，共奏清熱解暑、化濕醒脾、安神、理氣消食之功效，有效起到緩解熱應(yīng)激作用。

[1]劉瑞生.中草藥防治雞熱應(yīng)激研究概況[J].中國(guó)獸藥雜志,2002，36(10):34-35.

[2]張琳琳,馬強(qiáng),房希碧,等.不同抗熱應(yīng)激添加劑對(duì)熱應(yīng)激小鼠精液品質(zhì)的影響[J].青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),28(4):289.

[3]焦玉蘭,翟超,史萬玉,等.“抗暑一號(hào)”對(duì)熱應(yīng)激小鼠部分血液生理生化指標(biāo)的影響[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2009,30(7):29-32.

[4]謝建中．熱應(yīng)激對(duì)小鼠血液理化指標(biāo)的影響[J].中國(guó)畜禽種,2010(4):143-144．

[5]韓洪軍,金玉姬,王光慧,等.抗熱應(yīng)激藥物的研究現(xiàn)狀[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào),2013,34(1):60．

S853.7

B

1003-8655（2016）05-0012-04

海南省科技廳中藥現(xiàn)代化專項(xiàng)(ZY201434)

王平（1985-），助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督工作.

劉海?。?980-），副研究員，研究方向?yàn)榕R床獸醫(yī)，liuhailong423@126.com