禤雪梅　江國榮（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥劑科　佛山　528000）

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中藥山茱萸中馬錢素的提取工藝研究

禤雪梅江國榮（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥劑科佛山528000）

摘要：目的：探討中藥山茱萸中有效成分馬錢素的提取工藝。方法：以提取溫度、提取時間、溶劑用量作為參考因素，超聲波提取工藝，采用L9（34）正交試驗表進行工藝優(yōu)化設(shè)計，馬錢素含量采用高效液相色譜法進行測定（色譜柱：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），流動相：甲醇：水=30∶70，檢測波長為236nm，柱溫：25℃，流量1.0mL/min）。結(jié)果：山茱萸中馬錢素最佳提取工藝為提取溫度為80℃，提取時間為105min，溶劑95%乙醇用量為50mL。該方法提取出的馬錢素含量為14.25mg/g。結(jié)論：超聲提取優(yōu)化工藝后方法簡便可行，得到的山茱萸中馬錢素含量較高。

關(guān)鍵詞：山茱萸超聲提取馬錢素高效液相色譜法

山茱萸（Cornus officinalis Sieb. Et Zucc）為山茱萸科植物山茱萸的果實，是重要的野生植物資源，同時是我國傳統(tǒng)的中藥材植物之一［1］。山茱萸臨床上具有補益肝腎、澀經(jīng)固脫之效，用于眩暈耳鳴、腰膝酸痛、尿頻、崩漏等癥［2］。目前研究中認為山茱萸中含有的熊果酸、齊墩果酸、山茱萸苷、馬錢素以及沒食子酸等是主要活性成分［3］。馬錢素是一種環(huán)烯醚萜苷類化合物，也是重要的心血管活性物質(zhì)，在預(yù)防心血管疾病等方面效果顯著［4］。2015年版《中國藥典》中記載的測定方式來測定馬錢素的量控制山茱萸的質(zhì)量，將中藥山茱萸應(yīng)用于臨床等各個方面的研究，以發(fā)揮我國豐富野生自然資源的作用。本研究中以超聲提取作為山茱萸中馬錢素的提取手段，以L9（34）正交試驗表，將提取溫度、提取時間、溶劑用量作為參考因素進行工藝優(yōu)化設(shè)計，馬錢素的含量測定采用高效液相色譜法。現(xiàn)將研究報道如下。

1　儀器與試藥

1.1試驗儀器：高效液相色譜儀采用美國Watershed公司生產(chǎn)的色譜儀器（主要包括Waters717泵，WatersECM溫度控制器，Waters717色譜數(shù)據(jù)工作站），YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm）色譜柱，KQ-101型超聲發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司），電子分析天平（美國梅特勒公司，精度：0.0001g），514紫外/可見分光光度計（安捷倫科技公司），R-203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，DKS-14型電熱恒溫水浴鍋，SHZ-M循環(huán)水式真空泵。

1.2試驗藥品：中藥山茱萸粉末（由中藥材公司提供的新鮮山茱萸經(jīng)過去核、真空減壓干燥、粉碎機粉碎后過60目篩），馬錢素對照品（中國食品藥品檢定所，純度為99.97%），甲醇溶液（杭州高晶精細化工有限公司）為色譜純，95%乙醇溶液，無水乙醇（北京化學(xué)科技有限公司），乙腈（上海生物科技有限公司）為分析純，水為雙蒸水。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的配制：精密稱取馬錢素對照品5.1g，置于5mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度搖勻后靜置，甲醇補充不足的溶液至刻度后，配制成馬錢素1.02mg/mL的對照品溶液，放置于4℃冰箱中備用。

2.2色譜條件的選擇：采用色譜柱：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），流動相：甲醇∶水=30∶70，檢測波長為236nm，柱溫：25℃，流量1.0mL/min，進樣量為20μL。理論塔板數(shù)按照馬錢素色譜法計算不低于3000［5］。在上述色譜條件下，馬錢素與其他成分均可以達到良好的色譜分離。見圖1。

2.3線性關(guān)系的考察：分別吸取“2.1”項下的對照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分別置于5.0mL容量瓶中，用甲醇溶液定溶至刻度后搖勻，過0.22μm微孔濾膜后，分別取20μL重復(fù)進樣3次，按照“2.2”項下的色譜條件進行含量測定，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標繪制線性關(guān)系方程：Y=120410X+119874，r= 0.9997，馬錢素在0.0510～0.510mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗：精密吸取“2.1”項下的對照品溶液20μL，重復(fù)連續(xù)進樣5次，按照線性關(guān)系方程進行計算，結(jié)果表明馬錢素5次進樣峰面積的相對標準差為RSD=1.95%，表明該方法下樣品的精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗：將過40目篩的山茱萸樣品按照超聲提取方式進行回流提取，吸取一定量的山茱萸溶液利用甲醇溶液定溶至10mL容量瓶中，分別于0、1、2、4、8、12、24、36、72h取20μL，按照“2.2”項下的色譜條件進行含量測定，結(jié)果RSD值為4.23%，表明樣品溶液在72h內(nèi)含量穩(wěn)定。

2.6重現(xiàn)性實驗：取山茱萸供試品溶液適量，精密稱定后按照馬錢素定量方法重復(fù)測定5次，結(jié)果顯示RSD為0.74%，表明樣品測定的重現(xiàn)性較好。

3　提取工藝試驗

3.1高效液相色譜法測定提取樣品中馬錢素的含量：在同一色譜條件下，比較進樣量相同的對照品及樣品的出峰時間，出峰時間相同則為同一個組份，后根據(jù)線性關(guān)系方程對樣品中馬錢素的含量進行定量測定［6］。

3.2提取溶劑對山茱萸中馬錢素提取效果的影響：取中藥山茱萸藥材粗粉末約1.0g，精密稱重后治愈離心管內(nèi)，加入適量的甲醇溶液10mL提取20min后置于3000rad/min離心機中分離5min，將上清液過濾，殘渣繼續(xù)加入甲醇溶液10mL進行第二次提取，共提取5次后，合并濾液。馬錢素是一種水溶性的環(huán)烯醚萜苷類化合物，因此試驗中選擇了極性較大的95%乙醇溶液、甲醇溶液以及雙蒸水作為提取溶劑進行比較，回流提取溫度均為65℃，回流時間均為60min。其中馬錢素的含量測定方式為將定溶至5mL的樣品進行稀釋，吸取20μL溶液后按照“2.2”項下的色譜條件分別重復(fù)進樣3次，以線性回歸方程測定質(zhì)量濃度，見表1。

3.3正交試驗：為確定中藥山茱萸中馬錢素的最佳提取工藝，以提取溫度、提取時間、溶劑用量作為參考因素，采用L9（34）進行正交試驗，各因素水平見表2。

表1　不同溶劑提取馬錢素的含量比較（%）

表2　超聲波提取山茱萸中馬錢素因素水平表

3.4正交試驗結(jié)果：山茱萸中馬錢素的超聲波提取正交試驗結(jié)果見表3。

表3　超聲波提取山茱萸中馬錢素的正交試驗結(jié)果

4　小結(jié)

馬錢素是中藥山茱萸中的主要活性成分［7］，在山茱萸中的含量較高，性質(zhì)穩(wěn)定，采用高效液相色譜法進行含量的測定操作方法簡便，重現(xiàn)性較好。

4.1提取溶劑的影響：提取溶劑的極性對于馬錢素的提取效率影響較大，95%乙醇溶液的提取效果好于采用甲醇或雙蒸水溶液對馬錢素的提取。

4.2提取溫度、時間的影響：對于超聲波提取方式，提取溫度對于山茱萸中馬錢素的提取效率影響較大，最佳的提取溫度為80℃，同時提取時間對山茱萸中馬錢素含量的影響有一定的決定性，超聲波提取條件下最佳的提取時間為105min左右。

4.3乙醇體積對提取工藝的影響：正交試驗結(jié)果表明，乙醇體積的多少對提取效率影響不大，因此考慮提取工藝的經(jīng)濟性，在不影響馬錢素含量的條件下，較少的乙醇用量可以應(yīng)用于提取工藝。本研究中通過試驗確定最佳提取工藝為：在80℃的條件下，加入95%乙醇溶液的量為50mL，進行超聲提取105min得到最大含量的馬錢素。該方法操作簡單，易行。

參考文獻

［1］吳立明.山茱萸研究現(xiàn)狀和開發(fā)前景［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2012，6（8）：32-34.

［2］俞堅，勵建榮，鄭群雄.微波提取山茱萸馬錢素的工藝研究［J］.浙江工商大學(xué)學(xué)報，2010，4（1）：45-47.

［3］呂鵬飛，李倩.山茱萸中馬錢素標準版的制備研究［J］.河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，22（5）：529-531.

［4］徐立華，彭國平.山茱萸水煎醇沉工藝的正交實驗研究［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，16（5）：291-292.

［5］呼海濤，張振凌，朱瑄.山茱萸不同工藝炮制品中馬錢素含量比較［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，18（5）：1072-1074.

［6］郭富禮，張振凌.山茱萸不同炮制品中熊果酸含量的比較［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，13（7）：524.

［7］潘揚，王天山，張弦，等.RP-HPLC法測定中藥山茱萸中馬錢素的含量［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，16（1）：25-27.

The study of extraction process of loganin in Chinese medicine dogwood

Abstract：Objective：To investigate the extraction process of loganin in Chinese medicine dogwood. Methods：The extraction temperature，extraction time and the amount of solvent were as the reference factors，ultrasonic was used for extraction process. The L9（34）orthogonal test table was for design optimization process，and the loganin were determined by high performance liquid chromatography（column：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），mobile phase：methanol：water=30∶70，the detection wavelength was 236nm，column temperature：25℃，flow rate was 1.0mL/min）. Results：The temperature of dogwood Loganin optimum extraction extraction was 80℃，extraction time was 105min，the amount of solvent was 95%，ethanol was 50mL. The method of extracted loganin content was 14.25mg/g. Conclusion：The method of ultrasonic extraction optimization technology is simple and feasible，and the content of dogwood Loganin is higher.

Key words：Dogwood Ultrasonic extraction Loganin HPLC

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：B

文章編號：1672-8351（2016）06-0118-03