閆振宇　買(mǎi)春陽(yáng)　高　鵬　蘇　博　王世宣

(河南省南陽(yáng)市中心醫(yī)院，南陽(yáng)473009)

Her2在乳腺癌和胃癌中表達(dá)的臨床意義①

閆振宇買(mǎi)春陽(yáng)②高鵬蘇博王世宣③

(河南省南陽(yáng)市中心醫(yī)院，南陽(yáng)473009)

[摘要]目的：探討Her2在乳腺癌和胃癌中表達(dá)的臨床情況與相關(guān)意義，為腫瘤防治提供參考。方法：收集2009年3月到2014年5月在我院行外科手術(shù)切除的60例確診的進(jìn)展期胃癌標(biāo)本與60例確診的晚期乳腺癌標(biāo)本，都進(jìn)行Her2病理表達(dá)免疫組化分析，并調(diào)查了相關(guān)臨床病理資料進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：Her2的乳腺癌和胃癌標(biāo)本中陽(yáng)性表達(dá)率分別為40.0%和36.7%，對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Her2表達(dá)與惡性腫瘤患者的年齡、病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，與TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性(P<0.05)。Spearman相關(guān)分析顯示乳腺癌與胃癌中的Her2表達(dá)都與Survivin、Bcl-2表達(dá)存在明顯正向相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論：乳腺癌和胃癌患者Her2都呈現(xiàn)高病理表達(dá)狀況，與TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，能通過(guò)調(diào)節(jié)部分凋亡抑制蛋白，參與腫瘤的發(fā)病與轉(zhuǎn)移過(guò)程。

[關(guān)鍵詞]乳腺癌；胃癌；Her2；病理特點(diǎn)

乳腺癌和胃癌都是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，由于各種因素的影響，兩者在我國(guó)其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡也有年齡化的趨勢(shì)，是我國(guó)腫瘤防治的重點(diǎn)之一[1,2]?，F(xiàn)代研究表明惡性腫瘤的病因是多方面的，其發(fā)展也呈現(xiàn)階段性，目前臨床對(duì)腫瘤病程以及預(yù)后的判斷依據(jù)主要包括病理學(xué)分級(jí)、腫瘤轉(zhuǎn)移狀況、腫瘤體積和組織學(xué)分級(jí)等[3,4]。手術(shù)切除是目前乳腺癌和胃癌的主要治療方法，然而受制于癌癥診斷的局限性，諸多胃癌和乳腺癌患者在就診時(shí)，病情已經(jīng)發(fā)展至癌癥中晚期，錯(cuò)過(guò)了手術(shù)切除最佳時(shí)期，使得手術(shù)切除效果顯著下降，甚至有些患者已經(jīng)無(wú)法接受手術(shù)切除治療，切除手術(shù)后胃癌和乳腺癌患者的成活率只有50%左右，患者死亡率比較高[5，6]。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路在胃癌和乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、診斷和治療方面的意義得到了廣泛關(guān)注[7]。其中表皮生長(zhǎng)因子受體(Epithelial growth factor receptor，EGFR)通路是影響腫瘤的重要通路，EGFR屬于酪氨酸激酶受體家族，主要在上皮組織細(xì)胞表面，包括Her1、Her2、Her3和Her4等成員[8]。其中Her2是原癌基因Her2/neu編碼的一種分子量為185 kD跨膜糖蛋白p185，HER2基因擴(kuò)增與增加細(xì)胞分化、局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、遷移、減少細(xì)胞凋亡、加快血管發(fā)生、腫瘤侵襲、局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[9]?；A(chǔ)研究表明Her2的過(guò)量表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，一方面通過(guò)調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞鈣黏蛋白等黏附因子的表達(dá)來(lái)促進(jìn)遷移，另一方面可啟動(dòng)多種轉(zhuǎn)移機(jī)制來(lái)加快腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[10]。研究表明，大約25%～30%的浸潤(rùn)性乳腺癌和80%胃癌患者有Her2基因擴(kuò)增或蛋白過(guò)表達(dá)，但是具體的表達(dá)對(duì)比情況還不明確[11]。因此準(zhǔn)確地檢測(cè)Her2狀態(tài)不僅能為乳腺癌和胃癌患者的預(yù)后提供依據(jù)，而且是有效治療乳腺癌和胃癌的前提。本文為此具體探討了乳腺癌和胃癌患者Her2病理表達(dá)情況，分析其臨床病理意義，可以為乳腺癌和胃癌的靶向治療提供進(jìn)一步依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象收集2009年3月到2014年5月在我院行外科手術(shù)切除的60例確診的進(jìn)展期胃癌標(biāo)本與60例確診的晚期乳腺癌標(biāo)本，所有病例進(jìn)行切除手術(shù)前都沒(méi)有接受過(guò)化療、放療或其他抗癌藥物治療，所有患者都進(jìn)行腫瘤全切或次全切手術(shù)，并將淋巴結(jié)根治性切除；所有研究得到了患者的知情同意與倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。為了保持樣本的同一性，胃癌患者我們也都選擇了女性。胃癌患者中年齡最小34歲，最大78歲，平均年齡(56.33±4.22)歲；病理類(lèi)型：鱗癌10例，腺癌42例，腺鱗癌8例；TNM國(guó)際分期：Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期，分別為34例、20例和6例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例。乳腺癌患者中年齡最小33歲，最大79歲，平均年齡(56.02±5.11)歲；病理類(lèi)型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌54例，浸潤(rùn)性小葉癌2例，浸潤(rùn)性小葉導(dǎo)管混合癌8例；TNM國(guó)際分期：Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期，分別為33例、21例和6例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例。不同患者的年齡、TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.1.2主要試劑兔抗Her2單克隆抗體、即用型快捷免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，其余生化試劑都購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本處理所有手術(shù)切除的標(biāo)本離體后立即用10%中性福爾馬林固定，8～24 h后按常規(guī)行系列脫水、透明和石蠟包埋，選擇4 μm切片，然后進(jìn)行病理的免疫組化分析。

1.2.2檢測(cè)方法腫瘤切片免疫組化染色后，置于光學(xué)顯微鏡下觀察，并分析和處理。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)雙盲法來(lái)分析陽(yáng)性，同時(shí)每張切片由兩位資深病理科醫(yī)師分別做出各自的判斷。

Her2陽(yáng)性細(xì)胞染色結(jié)果顯示棕黃色均勻細(xì)顆粒主要分布在胞漿和細(xì)胞膜上，根據(jù)病變細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比以及著色深淺來(lái)判斷和進(jìn)行分級(jí)：(-)：腫瘤組織 中無(wú)細(xì)胞核/膜染色或者已染色的細(xì)胞膜/核染色的比例只有10%；(+)：已染色的細(xì)胞膜/核染色的比例大于10%；(++)：超過(guò)10%的腫瘤細(xì)胞膜/核全部染色，染色程度由弱至中度；(+++)：超過(guò)30%的腫瘤細(xì)胞被完全染色，染色程度較深。上述分級(jí)中，Her2蛋白(-)或(+)列入陰性范疇；(++)及其以上列入陽(yáng)性范疇。用已知Her2陽(yáng)性的腫瘤標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS液代替探針混合液作陰性對(duì)照。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0軟件來(lái)分析研究數(shù)據(jù)，采用χ2檢驗(yàn)來(lái)比較表達(dá)陽(yáng)性情況同配對(duì)計(jì)數(shù)資料之間的差異性，采用Spearman來(lái)進(jìn)行相關(guān)性分析，P<0.05表示差異顯著，具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1乳腺癌和胃癌的Her2陽(yáng)性表達(dá)情況對(duì)比經(jīng)過(guò)觀察，Her2的乳腺癌和胃癌標(biāo)本中陽(yáng)性表達(dá)率分別為40.0%和36.7%，對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1、圖1～4。

2.2Her2表達(dá)與乳腺癌和腫瘤患者臨床各病理特征間的關(guān)系檢測(cè)和觀察結(jié)果顯示，Her2表達(dá)不受惡性腫瘤患者病理類(lèi)型和年齡的影響，與TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表2與表3。

2.3相關(guān)性分析我們選擇了惡性腫瘤的常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)Survivin、Bcl-2進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示乳腺癌與胃癌中的HER2表達(dá)都與Survivin、Bcl-2表達(dá)存在明顯正向相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表1乳腺癌和胃癌的Her2陽(yáng)性表達(dá)情況對(duì)比(n)

Tab.1Her2 positive expression comparison in breast cancer and gastric cancer(n)

TissuesnPositiveexpressionPositiveexpressionrateBreastcancer602440.0%Gastriccancer602236.7%χ20.293P>0.05

圖1　乳腺導(dǎo)管原位癌HER2表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性于胞膜(×400)Fig.1　DCIS HER2 strong expression in membrane(×400)

圖2　乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌HER2表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性于胞膜(×400)Fig.2　Invasive ductal carcinoma HER2 strong expression in membrane (× 400)

圖3　胃鱗癌HER2表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性于胞漿(×400)Fig.3　HER2 expression in squamous cell carcinoma of stomach strongly positive in cytoplasm (× 400)

圖4　胃腺癌HER2表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性于胞漿(×400)Fig.4　Gastric adenocarcinoma strong positive HER2 expression in cytoplasm (× 400)

表2乳腺癌HER2表達(dá)的臨床病理特點(diǎn)分析(n)

Tab.2Clinical and pathological features of HER2 protein expression in breast cancer (n)

Pathologicalfeaturesn=60Positiveexpression(n=24)χ2PAge≥604518(40.0%)0.000>0.05<60156(40.0%)Pathologicaltype-invasiveductalcarcinoma5418(33.3%)0.293>0.05Invasivelobularcarcinoma21(50.0%)Invasivelobularcarcinomamixingduct85(62.5%)TNMinternationalstaging-Ⅰstage3312(36.4%)0.311>0.05Ⅱstage219(42.9%)Ⅲstage63(50.0%)Lymphnodemetastasis-Yes208(40.0%)0.000>0.05No4016(40.0%)

表3胃癌HER2表達(dá)的臨床病理特點(diǎn)分析(n)

Tab.3Clinical and pathological features of HER2 protein expression in gastric cancer (n)

Pathologicalfeaturesn=60Positiveexpression(n=22)χ2PAge≥604416(36.4%)0.078>0.05<60166(37.5%)Pathologicaltype-invasiveductalcarcinoma104(40.0%)0.293>0.05Invasivelobularcarcinoma4216(38.1%)Invasivelobularcarcinomamixingduct82(25.0%)TNMinternationalstaging-Ⅰstage3412(35.3%)0.331>0.05Ⅱstage207(35.0%)Ⅲstage62(33.3%)Lymphnodemetastasis-Yes208(40.0%)0.236>0.05No4014(35.0%)

表4乳腺癌與胃癌中的HER2表達(dá)與傳統(tǒng)指標(biāo)的相關(guān)性分析

Tab.4Correlation analysis between HER2 expression and traditional indicators in breast cancer and gastric cancer

IndicatorsBreastcancerrPGastriccancerrPSurvivin0.522<0.050.500<0.05Bcl-20.467<0.050.387<0.05

3討論

乳腺癌與胃癌都是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中胃癌居消化系統(tǒng)惡性腫瘤首位，乳腺癌居?jì)D科腫瘤的首位。我國(guó)是世界上乳腺癌與胃癌都高發(fā)的國(guó)家，目前乳腺癌與胃癌手術(shù)切除及放化療治療效果仍不盡人意，中晚期患者總體5年生存率仍然不高[12]。惡性腫瘤最根本的特征為轉(zhuǎn)移與分期增加，該特征是將惡性腫瘤患者引向死亡的重要因素，是影響手術(shù)切除效果及術(shù)后預(yù)后效果的關(guān)鍵因素[13]?，F(xiàn)代腫瘤學(xué)認(rèn)為，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展不僅與腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)，還與信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化有關(guān)。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)家族是癌癥發(fā)生和發(fā)展相關(guān)的重要信號(hào)調(diào)節(jié)因子，EGFR是一種細(xì)胞表面受體，主要表達(dá)于上皮組織細(xì)胞組織?；A(chǔ)研究顯示Her2的表達(dá)觸發(fā)信號(hào)下游的蛋白磷酸化，進(jìn)而調(diào)節(jié)血管生成和細(xì)胞增殖[14]。一些乳腺癌患者體內(nèi)Her2蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，從而促發(fā)下游信號(hào)通路，引起下游蛋白磷酸化，從而加快腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。比如惡性腫瘤中普遍存在凋亡信號(hào)途徑的缺陷，提示凋亡的抑制可能促進(jìn)了腫瘤的形成、進(jìn)展和癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)[15]。而常規(guī)的腫瘤檢測(cè)指標(biāo)Survivin、Bcl-2是細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和存活的重要調(diào)節(jié)因子，Survivin、Bcl-2均具有抑制細(xì)胞凋亡的作用，且目前對(duì)其抗凋亡作用機(jī)制的研究已較成熟[16]。

Her2編碼一種跨膜酪氨酸激酶受體，該受體蛋白與EGFR家族成員及其配體之間相互作用，通過(guò)細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和增殖。不過(guò)Her2的過(guò)表達(dá)除了常規(guī)肺癌外，但乳腺癌與胃癌中的表達(dá)狀況存在爭(zhēng)議。相關(guān)研究表明，Her2的過(guò)度表達(dá)可加快腫瘤新生血管生成、抑制細(xì)胞凋亡、上調(diào)血管通透性因子(VPF)/血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力，延長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞存活周期，破壞機(jī)體組織抗侵襲屏障等?？梢?jiàn)，科學(xué)準(zhǔn)確地分析Her2表達(dá)狀態(tài)不僅能為乳腺癌與胃癌患者的預(yù)后提供依據(jù)，同時(shí)有助于乳腺癌和胃癌的有效診治[17]。目前，HER2受體蛋白表達(dá)主要通過(guò)免疫組化法來(lái)檢測(cè)，采用抗HER2的特異性抗體來(lái)分析腫瘤細(xì)胞表面HER2表達(dá)狀況。本文Her2的乳腺癌和胃癌標(biāo)本中陽(yáng)性表達(dá)率分別為40.0%和36.7%，對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明HER2的過(guò)表達(dá)存在于乳腺癌，也在胃癌中過(guò)度表達(dá)。同時(shí)當(dāng)前也有研究表明30%以上的人類(lèi)惡性腫瘤的上皮源性腫瘤都普遍過(guò)量表達(dá)HER2，可見(jiàn)，Her2基因的過(guò)表達(dá)可能同腫瘤的發(fā)生發(fā)展直接相關(guān)。

乳腺癌與胃癌患者在臨床上都表現(xiàn)出組織學(xué)與TNM分期的相關(guān)差異，比如乳腺上皮細(xì)胞的可塑性產(chǎn)生了各種各樣的細(xì)胞亞型，同時(shí)在為癌組織的侵襲處，Survivin、Bcl-2在細(xì)胞核高表達(dá)，而在中央癌巢區(qū)域Survivin、Bcl-2的核表達(dá)降低。這種表達(dá)模式使得癌組織中新克隆細(xì)胞的形態(tài)與那些原位癌巢中未發(fā)生轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞有相似的組織學(xué)特性[18,19]。本文Her2表達(dá)與乳腺癌與胃癌患者的年齡、病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，與TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性(P<0.05)。TNM分歧越晚，Her2表達(dá)水平越高(P<0.05)。癌組織中Her2表達(dá)同腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，可見(jiàn)，Her2同腫瘤細(xì)胞增殖或轉(zhuǎn)移直接相關(guān)，表明乳腺癌與胃癌中Her2的高表達(dá)可增強(qiáng)腫瘤的細(xì)胞的遷移能力。有研究通過(guò)分析認(rèn)為過(guò)表達(dá)Her2可觸發(fā)多種轉(zhuǎn)移機(jī)制，進(jìn)而提高腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力，過(guò)表達(dá)HER2可調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞鈣黏蛋白等黏附因子的表達(dá)，進(jìn)而提高腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力[20]。本文相關(guān)性研究顯示乳腺癌與胃癌中的HER2表達(dá)都與Survivin、Bcl-2表達(dá)存在明顯正向相關(guān)(P<0.05)，提示其可能通過(guò)調(diào)控Survivin及Bcl-2的表達(dá)，進(jìn)而參與乳腺癌與胃癌凋亡通路的調(diào)控，影響乳腺癌與胃癌的發(fā)生進(jìn)展及轉(zhuǎn)移等過(guò)程。

總之，乳腺癌和胃癌患者Her2都呈現(xiàn)高病理表達(dá)狀況，與TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，能通過(guò)調(diào)節(jié)部分凋亡抑制蛋白，參與腫瘤的發(fā)病與轉(zhuǎn)移過(guò)程。

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[收稿2015-09-20修回2015-12-25]

(編輯許四平)

Clinical significance of Her2 pathological expression in breast and gastric cancer patients

YAN Zhen-Yu，MAI Chun-Yang,GAO Peng,SU Bo,WANG Shi-Xuan.

Nanyang Central Hospital of He′nan Province,Nanyang 473009,China

[Abstract]Objective:To investigate the clinical significance of Her2 pathological expression in the breast and gastric cancer patients for providing a reference for cancer prevention.Methods: Selected surgical resection specimens of 60 diagnosed in advanced gastric cancer and 60 diagnosed with advanced breast cancer from March 2009 to May 2014 in our hospital,all specimens were given the Her2 pathological expression of immunohistochemical analysis and investigation the clinical and pathological data.Results: The Her2 positive expression rates in the breast cancer and gastric cancer specimens were 40.0% and 36.7%,respectively that compared to no significant difference (P> 0.05).The Her2 expression was not related to the cancer patient′s age,histological type,and there were significantly correlated to the TNM stage and lymph node metastasis (P<0.05).Spearman correlation analysis showed that Her2 expression in the breast cancer and gastric cancer were significant positive correlation to the Survivin,Bcl-2 expression (P<0.05).Conclusion: Breast cancer and gastric cancer patients have shown high pathological expression of Her2,and are related to the TNM stage and lymph node metastasis,it may be through inhibited the apoptosis regulating proteins involved in the pathogenesis and metastasis of tumors.

[Key words]Breast cancer；Stomach cancer;Her2;Pathological features

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.06.019

通訊作者②,E-mail：maicy0418@163.com。

作者簡(jiǎn)介：閆振宇(1971年-)，男，主治醫(yī)師，主要從事臨床病理診斷研究，E-mail：yanzy0418@163.com。

中圖分類(lèi)號(hào)R737.9R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-484X(2016)06-0858-05

①本文為湖北省衛(wèi)生廳科研基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No：JX3A10)--乳腺癌淋巴管特異性分子標(biāo)志物篩選及淋巴道轉(zhuǎn)移早期診斷。

③華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院，武漢430030。