王甫成，紀(jì)東漢,龔道鋒

1.安徽中醫(yī)藥科學(xué)院亳州中醫(yī)藥研究所，安徽亳州，236800；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽亳州，236800

不同生長(zhǎng)期女貞子生物量積累及特女貞苷含量動(dòng)態(tài)變化研究

王甫成1，2，紀(jì)東漢1，2,龔道鋒1，2

1.安徽中醫(yī)藥科學(xué)院亳州中醫(yī)藥研究所，安徽亳州，236800；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽亳州，236800

摘要：采用HPLC法研究8個(gè)不同生長(zhǎng)期女貞子中特女貞苷指標(biāo)性成分含量和醇溶性浸出物及折干率動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明,8月底到10月底期間采收的女貞子中特女貞苷含量較高，均超過(guò)藥典規(guī)定含量標(biāo)準(zhǔn)的3倍，且總峰面積均高于1.10×104，色譜峰個(gè)數(shù)達(dá)25個(gè)；同時(shí)醇溶性浸出物含量及折干率隨生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。結(jié)合試驗(yàn)測(cè)得數(shù)據(jù)和相關(guān)文獻(xiàn)，確定女貞子在10月份生長(zhǎng)期內(nèi)生物量積累及活性成分處于較好水平，故建議皖北地區(qū)女貞子藥材在該時(shí)間段內(nèi)采收，藥材質(zhì)量較好。

關(guān)鍵詞：女貞子；特女貞苷；動(dòng)態(tài)變化；生長(zhǎng)時(shí)期；采收期；HPLC

女貞子為常用大宗藥材，其藥材及飲片應(yīng)用較為廣泛，《神農(nóng)本草經(jīng)》收載并列為上品。女貞子為木犀科女貞(Ligustrum lucidumAit.)的干燥成熟果實(shí)，性味甘、苦、涼，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)之功效[1]。羅玲英[2]等對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中收載的中成藥制劑進(jìn)行了梳理，發(fā)現(xiàn)以女貞子作為“君、臣、佐、使”藥的各類制劑達(dá)115余種。2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定女貞子在冬季果實(shí)成熟時(shí)采收，但在生產(chǎn)上從初果期到成熟期采收均有之，藥材市場(chǎng)流通都以統(tǒng)貨進(jìn)行交易，直接影響其品質(zhì)和質(zhì)量。自2010年版《中國(guó)藥典》將特女貞苷作為女貞子藥材及飲片定量指標(biāo)性成分以來(lái)，未見(jiàn)以特女貞苷為指標(biāo)考察女貞子不同生長(zhǎng)期與特女貞苷含量變化的研究報(bào)道，同時(shí)未見(jiàn)有皖北地區(qū)女貞子最佳采收期的相關(guān)報(bào)道。故本研究采用高效液相色譜法考察不同生長(zhǎng)期女貞子中特女貞苷含量的變化，同時(shí)對(duì)女貞子不同生長(zhǎng)期的折干率和醇溶性浸出物含量等生物量積累情況進(jìn)行考察，以期為女貞子適時(shí)采收和商品規(guī)格劃分提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；電子分析天平(AUW220D，日本島津)；特女貞苷(111926-201404，中國(guó)食品藥品鑒定研究院)；甲醇(美國(guó)TEDIA公司，色譜純)；娃哈哈純凈水；其他所用試劑為分析純。

實(shí)驗(yàn)所用8批女貞子藥材于2014年7月到2015年1不同月份采收，陰干備用，采收地點(diǎn)為安徽亳州譙城區(qū)十八里鎮(zhèn)，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit.的果實(shí)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用C18色譜柱(AglientZorbaxSB-C18,4.60×250mm，5μm)，用甲醇-水(40∶60)作為流動(dòng)相，進(jìn)樣量為5μL，按1.0mL/min流速進(jìn)行洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm,柱溫25 ℃[1]。

2.2溶液的配制2.2.1標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品配制

取適量特女貞苷對(duì)照品并精密稱定，用甲醇溶解配制成0.50mg/mL特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品貯備液，依次精密量取合適體積已配制好的貯備液，置于10mL的容量瓶中，用甲醇稀釋制成含特女貞苷0.05、0.10、0.15、0.25、0.30、0.40mg/mL6種不同濃度的特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2供試品溶液制備

取采收的8批次女貞子樣品粉碎成粗粉(過(guò)50目篩)，分別取0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入50mL稀甲醇密塞后，精密稱定質(zhì)量，熱回流提取1h，冷卻，稱定質(zhì)量并用甲醇補(bǔ)足差量，搖勻，過(guò)0.45μm微孔濾膜，即得[1]。

2.3專屬性試驗(yàn)

將特女貞苷對(duì)照品溶液、空白對(duì)照液和女貞子樣品溶液分別進(jìn)樣5μL，按既定色譜條件分析，記錄色譜圖，結(jié)果顯示特女貞苷得到很好分離，相應(yīng)色譜峰位置無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1　各測(cè)試樣品HPLC圖譜

2.4線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下6種已配置好的特女貞苷系列濃度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，依次按進(jìn)樣量5μL自動(dòng)進(jìn)樣，按規(guī)定色譜條件分析檢測(cè)，記錄峰面積。分別以特女貞苷色譜峰峰面積和特女貞苷進(jìn)樣量(μg)為指標(biāo),進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得Y=1901.10X-77.74，r=0.9994(n=6)，結(jié)果表明特女貞苷在0.25～2.0μg區(qū)間內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)

取濃度為0.25mg/mL的特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液,按每次5μL進(jìn)樣量連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得特女貞苷色譜峰峰面積并計(jì)算峰面積RSD值為1.95%(n=6)，表明精密度較好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取2014年10月31日采收的女貞子樣品，制備樣品溶液6份，依上述方法測(cè)定，特女貞苷平均含量為2.17%，計(jì)算RSD值為1.53%(n=6)，表明重復(fù)性較好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2014年10月31日采收的女貞子樣品，按規(guī)定色譜條件在0、2、4、8、16、32、48h進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算特女貞苷色譜峰峰面積RSD值為1.35%(n=6)，且特女貞苷色譜峰保留時(shí)間基本穩(wěn)定，表明在48h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8回收率試驗(yàn)

分別取已知含有特女貞苷1.51%的女貞子藥材粗粉(過(guò)50目篩)9份，各0.5g，精密稱定后分3個(gè)平行組，置于具塞錐形瓶中，分別精密移入特女貞苷對(duì)照品儲(chǔ)備液12、15、18mL，制成3個(gè)特女貞苷加樣梯度樣品，按規(guī)定方法制備供試樣品溶液，進(jìn)行加樣回收實(shí)驗(yàn)，計(jì)算得到特女貞苷加樣平均回收率為99.87%，RSD值為1.21%，結(jié)果見(jiàn)表1，表明本法加樣回收較好。

表1　特女貞苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果　　　　　　　　　　n=3

2.9樣品測(cè)定

分別取不同生長(zhǎng)期采集的女貞子藥材樣品各3份，按規(guī)定方法制備供試品溶液，并按既定色譜條件對(duì)不同批次女貞子藥材進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算不同批次女貞子樣品中特女貞苷的含量；另采用2015年版《中國(guó)藥典》(四部)“通則 2201”項(xiàng)下規(guī)定的醇溶性浸出物測(cè)定方法，對(duì)不同生長(zhǎng)期女貞子的醇溶性浸出物含量進(jìn)行測(cè)定；同時(shí)對(duì)不同生長(zhǎng)期采集的女貞子樣品除去枝葉、果柄等雜質(zhì)，陰干后測(cè)得干重，計(jì)算折干率。各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，不同生長(zhǎng)期女貞子中特女貞苷和生物量積累趨勢(shì)，見(jiàn)圖2。

表2　不同生長(zhǎng)期女貞子生物量積累和特女貞苷含量測(cè)定結(jié)果　　　　　n=3

圖2　不同生長(zhǎng)期女貞子特女貞苷含量和生物量積累趨勢(shì)圖

3結(jié)束語(yǔ)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從8月底到10月底期間采收的女貞子中特女貞苷含量較高，均超過(guò)2015年版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含量的3倍，有效色譜峰個(gè)數(shù)和總峰面積均處于較高水平，其中8月底采收的女貞子中特女貞苷含量處于最高。戚志華等[3]研究女貞子在10月份出現(xiàn)齊墩果酸含量達(dá)到最高值，孔德平等文獻(xiàn)報(bào)道[4-8]女貞子中齊墩果酸、熊果酸、紅景天苷、多糖、黃酮類等有效成分積累和次生代謝在10月份波動(dòng)較為穩(wěn)定。由此看來(lái)，女貞子具有“滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)”的功效不是某個(gè)單一成分所能決定的，只對(duì)其中單一成分進(jìn)行考察以此判定女貞子藥材質(zhì)量顯然不符合實(shí)際，故實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了不同生長(zhǎng)期女貞子醇浸物含量以及折干率這一影響產(chǎn)量的重要因素，進(jìn)行多方面綜合考察，故不將最佳采摘時(shí)間定在8月底。

女貞子的生長(zhǎng)期與其內(nèi)在物質(zhì)積累和特女貞苷含量影響密切，女貞子隨成熟度增加折干率和醇浸物含量呈上升趨勢(shì)，產(chǎn)量也有所增長(zhǎng)，經(jīng)濟(jì)效益也隨之增加。但超過(guò)10月份后，多種活性成分呈下降趨勢(shì)，糖類成分明顯增多，給干燥和儲(chǔ)存帶來(lái)諸多不便，綜合考慮，由于女貞子在10月份各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)處于較好水平，因此皖北地區(qū)在該時(shí)間段內(nèi)采摘女貞子藥材質(zhì)量較好。

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(責(zé)任編輯：汪材印)

doi:10.3969/j.issn.1673-2006.2016.05.032

收稿日期：2016-02-15

基金項(xiàng)目：安徽省高校自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2016A498)；安徽省高等教育振興計(jì)劃人才項(xiàng)目(皖教秘人(2014)181號(hào))；安徽省高等學(xué)校質(zhì)量工程項(xiàng)目(2015msgzs174,2015sjjd039,2014jxtd073)。

作者簡(jiǎn)介：王甫成(1979-)，安徽東至人，碩士，副教授，主要研究方向：中藥加工炮制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-2006(2016)05-0120-04