王甫成，紀(jì)東漢,龔道鋒

1.安徽中醫(yī)藥科學(xué)院亳州中醫(yī)藥研究所，安徽亳州，236800；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽亳州，236800

不同生長期女貞子生物量積累及特女貞苷含量動態(tài)變化研究

王甫成1，2，紀(jì)東漢1，2,龔道鋒1，2

1.安徽中醫(yī)藥科學(xué)院亳州中醫(yī)藥研究所，安徽亳州，236800；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽亳州，236800

摘要：采用HPLC法研究8個不同生長期女貞子中特女貞苷指標(biāo)性成分含量和醇溶性浸出物及折干率動態(tài)變化。結(jié)果表明,8月底到10月底期間采收的女貞子中特女貞苷含量較高，均超過藥典規(guī)定含量標(biāo)準(zhǔn)的3倍，且總峰面積均高于1.10×104，色譜峰個數(shù)達(dá)25個；同時醇溶性浸出物含量及折干率隨生長期的延長呈上升趨勢。結(jié)合試驗測得數(shù)據(jù)和相關(guān)文獻(xiàn)，確定女貞子在10月份生長期內(nèi)生物量積累及活性成分處于較好水平，故建議皖北地區(qū)女貞子藥材在該時間段內(nèi)采收，藥材質(zhì)量較好。

關(guān)鍵詞：女貞子；特女貞苷；動態(tài)變化；生長時期；采收期；HPLC

女貞子為常用大宗藥材，其藥材及飲片應(yīng)用較為廣泛，《神農(nóng)本草經(jīng)》收載并列為上品。女貞子為木犀科女貞(Ligustrum lucidumAit.)的干燥成熟果實，性味甘、苦、涼，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補肝腎、明目烏發(fā)之功效[1]。羅玲英[2]等對國家標(biāo)準(zhǔn)中收載的中成藥制劑進(jìn)行了梳理，發(fā)現(xiàn)以女貞子作為“君、臣、佐、使”藥的各類制劑達(dá)115余種。2015版《中國藥典》規(guī)定女貞子在冬季果實成熟時采收，但在生產(chǎn)上從初果期到成熟期采收均有之，藥材市場流通都以統(tǒng)貨進(jìn)行交易，直接影響其品質(zhì)和質(zhì)量。自2010年版《中國藥典》將特女貞苷作為女貞子藥材及飲片定量指標(biāo)性成分以來，未見以特女貞苷為指標(biāo)考察女貞子不同生長期與特女貞苷含量變化的研究報道，同時未見有皖北地區(qū)女貞子最佳采收期的相關(guān)報道。故本研究采用高效液相色譜法考察不同生長期女貞子中特女貞苷含量的變化，同時對女貞子不同生長期的折干率和醇溶性浸出物含量等生物量積累情況進(jìn)行考察，以期為女貞子適時采收和商品規(guī)格劃分提供實驗依據(jù)。

1儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；電子分析天平(AUW220D，日本島津)；特女貞苷(111926-201404，中國食品藥品鑒定研究院)；甲醇(美國TEDIA公司，色譜純)；娃哈哈純凈水；其他所用試劑為分析純。

實驗所用8批女貞子藥材于2014年7月到2015年1不同月份采收，陰干備用，采收地點為安徽亳州譙城區(qū)十八里鎮(zhèn)，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit.的果實。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用C18色譜柱(AglientZorbaxSB-C18,4.60×250mm，5μm)，用甲醇-水(40∶60)作為流動相，進(jìn)樣量為5μL，按1.0mL/min流速進(jìn)行洗脫,檢測波長為224nm,柱溫25 ℃[1]。

2.2溶液的配制2.2.1標(biāo)準(zhǔn)對照品配制

取適量特女貞苷對照品并精密稱定，用甲醇溶解配制成0.50mg/mL特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)對照品貯備液，依次精密量取合適體積已配制好的貯備液，置于10mL的容量瓶中，用甲醇稀釋制成含特女貞苷0.05、0.10、0.15、0.25、0.30、0.40mg/mL6種不同濃度的特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用。

2.2.2供試品溶液制備

取采收的8批次女貞子樣品粉碎成粗粉(過50目篩)，分別取0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入50mL稀甲醇密塞后，精密稱定質(zhì)量，熱回流提取1h，冷卻，稱定質(zhì)量并用甲醇補足差量，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得[1]。

2.3專屬性試驗

將特女貞苷對照品溶液、空白對照液和女貞子樣品溶液分別進(jìn)樣5μL，按既定色譜條件分析，記錄色譜圖，結(jié)果顯示特女貞苷得到很好分離，相應(yīng)色譜峰位置無干擾，色譜圖見圖1。

圖1　各測試樣品HPLC圖譜

2.4線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項下6種已配置好的特女貞苷系列濃度標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，依次按進(jìn)樣量5μL自動進(jìn)樣，按規(guī)定色譜條件分析檢測，記錄峰面積。分別以特女貞苷色譜峰峰面積和特女貞苷進(jìn)樣量(μg)為指標(biāo),進(jìn)行線性回歸計算，得Y=1901.10X-77.74，r=0.9994(n=6)，結(jié)果表明特女貞苷在0.25～2.0μg區(qū)間內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗

取濃度為0.25mg/mL的特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液,按每次5μL進(jìn)樣量連續(xù)進(jìn)樣6次，測得特女貞苷色譜峰峰面積并計算峰面積RSD值為1.95%(n=6)，表明精密度較好。

2.6重復(fù)性試驗

取2014年10月31日采收的女貞子樣品，制備樣品溶液6份，依上述方法測定，特女貞苷平均含量為2.17%，計算RSD值為1.53%(n=6)，表明重復(fù)性較好。

2.7穩(wěn)定性試驗

取2014年10月31日采收的女貞子樣品，按規(guī)定色譜條件在0、2、4、8、16、32、48h進(jìn)行分析測定，計算特女貞苷色譜峰峰面積RSD值為1.35%(n=6)，且特女貞苷色譜峰保留時間基本穩(wěn)定，表明在48h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8回收率試驗

分別取已知含有特女貞苷1.51%的女貞子藥材粗粉(過50目篩)9份，各0.5g，精密稱定后分3個平行組，置于具塞錐形瓶中，分別精密移入特女貞苷對照品儲備液12、15、18mL，制成3個特女貞苷加樣梯度樣品，按規(guī)定方法制備供試樣品溶液，進(jìn)行加樣回收實驗，計算得到特女貞苷加樣平均回收率為99.87%，RSD值為1.21%，結(jié)果見表1，表明本法加樣回收較好。

表1　特女貞苷加樣回收試驗結(jié)果　　　　　　　　　　n=3

2.9樣品測定

分別取不同生長期采集的女貞子藥材樣品各3份，按規(guī)定方法制備供試品溶液，并按既定色譜條件對不同批次女貞子藥材進(jìn)行分析測定，計算不同批次女貞子樣品中特女貞苷的含量；另采用2015年版《中國藥典》(四部)“通則 2201”項下規(guī)定的醇溶性浸出物測定方法，對不同生長期女貞子的醇溶性浸出物含量進(jìn)行測定；同時對不同生長期采集的女貞子樣品除去枝葉、果柄等雜質(zhì)，陰干后測得干重，計算折干率。各項測定結(jié)果見表2，不同生長期女貞子中特女貞苷和生物量積累趨勢，見圖2。

表2　不同生長期女貞子生物量積累和特女貞苷含量測定結(jié)果　　　　　n=3

圖2　不同生長期女貞子特女貞苷含量和生物量積累趨勢圖

3結(jié)束語

實驗結(jié)果表明，從8月底到10月底期間采收的女貞子中特女貞苷含量較高，均超過2015年版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含量的3倍，有效色譜峰個數(shù)和總峰面積均處于較高水平，其中8月底采收的女貞子中特女貞苷含量處于最高。戚志華等[3]研究女貞子在10月份出現(xiàn)齊墩果酸含量達(dá)到最高值，孔德平等文獻(xiàn)報道[4-8]女貞子中齊墩果酸、熊果酸、紅景天苷、多糖、黃酮類等有效成分積累和次生代謝在10月份波動較為穩(wěn)定。由此看來，女貞子具有“滋補肝腎、明目烏發(fā)”的功效不是某個單一成分所能決定的，只對其中單一成分進(jìn)行考察以此判定女貞子藥材質(zhì)量顯然不符合實際，故實驗同時考察了不同生長期女貞子醇浸物含量以及折干率這一影響產(chǎn)量的重要因素，進(jìn)行多方面綜合考察，故不將最佳采摘時間定在8月底。

女貞子的生長期與其內(nèi)在物質(zhì)積累和特女貞苷含量影響密切，女貞子隨成熟度增加折干率和醇浸物含量呈上升趨勢，產(chǎn)量也有所增長，經(jīng)濟(jì)效益也隨之增加。但超過10月份后，多種活性成分呈下降趨勢，糖類成分明顯增多，給干燥和儲存帶來諸多不便，綜合考慮，由于女貞子在10月份各項指標(biāo)相對處于較好水平，因此皖北地區(qū)在該時間段內(nèi)采摘女貞子藥材質(zhì)量較好。

參考文獻(xiàn)：

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(責(zé)任編輯：汪材印)

doi:10.3969/j.issn.1673-2006.2016.05.032

收稿日期：2016-02-15

基金項目：安徽省高校自然科學(xué)研究重點項目(KJ2016A498)；安徽省高等教育振興計劃人才項目(皖教秘人(2014)181號)；安徽省高等學(xué)校質(zhì)量工程項目(2015msgzs174,2015sjjd039,2014jxtd073)。

作者簡介：王甫成(1979-)，安徽東至人，碩士，副教授，主要研究方向：中藥加工炮制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

中圖分類號：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-2006(2016)05-0120-04