趙越，卜慶

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PD-L1和PD-1在外周T細胞淋巴瘤中的表達及臨床意義

趙越，卜慶

摘要：目的探討程序性死亡1-配體（PD-L1）和程序性死亡因子-1（PD-1）在外周T細胞淋巴瘤（PTCL）組織中的表達及臨床意義。方法采用免疫組織化學法檢測51例PTCL組織（PTCL組）及20例淋巴結(jié)良性增生病變組織（對照組）中PD-L1和PD-1的表達情況，分析其表達與患者臨床病理特征及預后之間的關(guān)系。結(jié)果PTCL組PDL1的陽性表達率高于對照組（74.51% vs 35.00%，χ2=9.662，P＜0.05），PD-1的陽性表達率高于對照組（66.67% vs 25.00%，χ2=10.074，P＜0.05）。PD-L1和PD-1的陽性表達率均僅在外周血不同乳酸脫氫酶（LDH）水平PTCL患者間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。PTCL患者經(jīng)2個療程CHOP或EPOCH方案化療后，PD-L1陰性表達組化療有效率（RR）優(yōu)于陽性表達組（84.6% vs 47.4%，χ2=5.478，P＜0.05），PD-1陰性表達組RR優(yōu)于陽性表達組（82.4% vs 44.1%，χ2=6.755，P＜0.05）。PD-L1陰性表達組的中位總生存期（OS）高于陽性表達組（29.8個月vs 17.6個月，χ2= 4.413，P＜0.05）；PD-1陰性表達組的中位OS高于陽性表達組（29.8個月vs 17.6個月，χ2=8.293，P＜0.05）。結(jié)論PD-L1和PD-1在PTCL組織中均表達增高，且與患者外周血高LDH水平及化療療效差、生存期短有關(guān)，是判斷PTCL化療療效欠佳及預后不良的因子。

關(guān)鍵詞：外周T細胞淋巴瘤；程序性死亡1-配體；程序性死亡因子-1;免疫組織化學；Kaplan-Meiers評估

作者單位：桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科（郵編541001）

外周T細胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma, PTCL）在我國發(fā)病率較高，且侵襲性強、病情遷延、容易復發(fā)，無特異的預后評估標準[1]，目前尚缺少特異性靶向治療藥物，預后不良[2]。因此，探討新的治療靶點及尋找更特異性的預后指標具有重要的臨床意義。程序性死亡因子-1（programmed cell death factor-1，PD-1）作為B7家族的新成員，與程序性死亡1-配體（programmed death 1-ligad，PD-L1）結(jié)合后可以幫助腫瘤細胞逃避免疫殺傷[3]。PD-L1/PD-1通路在多種淋巴瘤中均有研究，如：經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤[4]、原發(fā)性縱隔大B細胞淋巴瘤[4]、血管免疫母細胞淋巴瘤[5-6]、外周T細胞淋巴瘤非特殊型[6]、間變性淋巴瘤激酶（ALK）陰性的間變大細胞淋巴瘤[6]和濾泡性淋巴瘤[7]。但PD-L1/PD-1通路在PTCL組織中的表達尚具有爭議。目前國內(nèi)外對PD-L1、PD-1在PTCL組織中的表達及與患者臨床病理特征和預后之間的關(guān)系研究較少。本研究檢測PD-L1 和PD-1在PTCL組織和淋巴結(jié)良性增生病變組織中的表達情況，分析PD-L1和PD-1與PTCL患者臨床病理特征及預后之間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2009年1月—2014年12月桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院收治的臨床資料完整、病理科存檔的PTCL石蠟標本51例（PTCL組），淋巴結(jié)良性增生病變石蠟標本20例（對照組）。患者取標本前未接受任何放化療。按照2008年WHO分型標準及Ann Arbor會議（1970年）的分期方案進行分型、分期及國際預后指數(shù)（IPI）預后評分。PTCL標本中非特殊型18例，間變大細胞淋巴瘤11例，血管免疫母細胞淋巴瘤7例，結(jié)外NK/T細胞淋巴瘤15例。51例患者均有完整的隨訪資料，并以電話、信件等形式全部進行隨訪，隨訪截止日期為2015年7月1日，隨訪7.1～73.2個月，中位隨訪時間34.7個月。采用實體瘤的療效評價標準1.1版（RECIST 1.1）評估標準分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）、進展（PD），總有效率（RR）=（CR+PR）例數(shù)/總例數(shù)× 100%；總生存期（OS），即從疾病確診到死亡或隨訪截止的時間。

1.2免疫組織化學檢測方法所有標本采用10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 mm厚連續(xù)切片。采用Elivison二步法檢測，兔抗人PD-L1單克隆抗體（稀釋度為1∶50），兔抗人單克隆抗體PD-1（稀釋度為1∶100），二抗為即用型,購自中杉金橋公司。實驗步驟嚴格按照各試劑說明書進行。陽性對照采用已知的陽性切片，陰性對照采用PBS代替一抗。

1.3陽性結(jié)果判斷PD-L1和PD-1陽性結(jié)果判斷參照韓麗娟等[3]的標準，并適當調(diào)整。以細胞質(zhì)或細胞膜出現(xiàn)黃至棕褐色顆粒為陽性顯色，結(jié)合染色強度和陽性細胞百分率來評定陽性表達病例。隨機讀取5個高倍視野（×400倍），每個視野計數(shù)100個細胞，陽性細胞率=陽性細胞數(shù)/觀察細胞數(shù)×100%。＜10%為1分，10%～50%為2分， 51%為3分。染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將陽性細胞率的得分和染色強度得分相乘即為最后得分： 3分為陰性表達，＞3分為陽性表達。細胞質(zhì)或細胞膜上任一項陽性均為陽性表達。

1.4統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行分析，計數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，生存數(shù)據(jù)采用Ka?plan-Meier生存分析并繪制生存曲線，應(yīng)用Log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1 PD-L1、PD-1在對照組和PTCL組的表達情況對照組PD-L1、PD-1主要表達于淋巴細胞的細胞質(zhì)和細胞膜，多呈彌漫性分布；PTCL組PD-L1主要表達于腫瘤細胞的細胞膜，多呈彌漫性分布，PD-1主要表達于腫瘤細胞的細胞質(zhì)和細胞膜，多呈彌漫性分布，見圖1。PD-L1、PD-1在PTCL組中的陽性表達率均明顯高于對照組（P＜0.05），見表1。2.2 PD-L1、PD-1的表達與PTCL患者臨床病理特征的關(guān)系不同外周血乳酸脫氫酶（LDH）水平患者間PD-L1和PD-1的陽性表達率差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），不同性別、年齡、疾病分期、ECOG評分、結(jié)外受累位點數(shù)量、有無B癥狀、有無骨髓浸潤、IPI評分及腫瘤亞型間PD-L1和PD-1的陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義，見表2。

Fig.1 The expressions of PD-L1 and PD-1 in PTCL and benign proliferative lymph node tissues（IHC，×400）圖1 PD-L1、PD-1在PTCL組織和淋巴結(jié)良性增生病變組織中的表達（IHC，×400）

Tab. 1 Comparison of positive expressions of PD-L1 and PD-1 between control group and PTCL group表1 PD-L1、PD-1在對照組和PTCL組中的陽性表達情況比較　例（%）

Tab. 2 The relationship between the expression levels of PD-L1 and PD-1 and different clinicopathological characteristics in PTCL group表2 PD-L1、PD-1的表達與PTCL患者臨床病理特征之間的關(guān)系　例（%）

2.3 PD-L1、PD-1的表達與PTCL患者預后的關(guān)系2.3.1近期療效51例患者采用CHOP方案29例、ECHOP方案22例，化療2個療程后評估療效，CR 16例，PR 13例，SD 8例，PD 14例。PD-L1陰性表達組RR（11/13，84.6%）高于陽性表達組（18/38，47.4%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.478，P＜0.05）；PD-1陰性表達組RR（14/17，82.4%）高于陽性表達組（15/34，44.1%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.755，P＜0.05）。

2.3.2遠期療效51例患者中，PD-L1陽性表達組4例存活，陰性表達組全部死于原發(fā)病。陰性表達組和陽性表達組的中位生存期分別為29.8個月、17.6個月，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.413，P＜0.05），見圖2。PD-1陰性、陽性表達組均有2例存活，陰性表達組和陽性表達組的中位生存期分別為29.8個月、17.6個月，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.293，P＜0.05），見圖3。

Fig. 2 Kaplan-Meier survival curves for negative and positive PD-L1 expression groups圖2 PD-L1陰性表達與陽性表達組的生存分析

Fig. 3 Kaplan-Meier survival curves for negative and positive PD-1 expression groups圖3 PD-1陰性表達與陽性表達組的生存分析

3　討論

PD-L1可在多種人類腫瘤中表達，如惡性黑色素瘤、直腸癌、胰腺癌、肝細胞癌和卵巢癌等，且與臨床預后較差有關(guān)[4]。PD-L1/PD-1通路在淋巴瘤中的表達及其臨床意義也受到了越來越多的重視。關(guān)于PTCL不同亞型中PD-L1、PD-1的表達情況目前尚具有爭議，而且目前國內(nèi)外PD-L1和PD-1在PTCL組織中的表達及與患者臨床病理特征和預后之間的關(guān)系的研究較少。

本研究PTCL組織中的PD-L1和PD-1的表達水平明顯高于淋巴結(jié)良性增生病變組織，表明PDL1/PD-1通路在PTCL的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。已有研究發(fā)現(xiàn)，PD-1可陽性表達于血管免疫母細胞淋巴瘤組織，而在其他外周淋巴瘤亞型中卻沒有陽性表達[5]。與此結(jié)果不同的是，Krishnan等[6]的研究發(fā)現(xiàn)PD-1在血管免疫母細胞淋巴瘤、外周T細胞淋巴瘤非特殊型和ALK陰性的間變大細胞淋巴瘤組織中均明顯高表達，與本研究中PD-L1和PD-1 在4種PTCL亞型中均彌漫高表達的結(jié)論一致。國內(nèi)有研究表明在NK/T細胞淋巴瘤組織中，PD-L1主要表達于腫瘤細胞細胞膜[8]，PD-L1表達于NK/T細胞淋巴瘤組織中腫瘤細胞和間質(zhì)細胞的胞質(zhì)和胞膜上，PD-1表達于在腫瘤間質(zhì)淋巴細胞胞質(zhì)和胞膜上[3]。本研究發(fā)現(xiàn)PD-L1主要表達于PTCL（包括NK/T細胞淋巴瘤在內(nèi)）腫瘤細胞的細胞膜，PD-1主要表達于PTCL腫瘤細胞的細胞膜和細胞質(zhì)。這可能是由于所選用抗體的質(zhì)量及敏感度不同及蠟塊組織不全等原因造成的，需要進一步證實。本研究結(jié)果顯示，外周血LDH水平不同患者間PD-L1和PD-1的陽性表達率差異均有統(tǒng)計學意義，不同性別、年齡、疾病分期、ECOG評分、結(jié)外受累位點數(shù)量、有無B癥狀、有無骨髓浸潤、IPI評分及腫瘤亞型間PD-L1 和PD-1的陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義。而韓麗娟等[3]的研究結(jié)果表明，在NK/T細胞淋巴瘤組織中PD-L1的表達水平與分期、LDH均呈正相關(guān)，與IPI評分、臨床療效呈負相關(guān)，而與性別、年齡無明顯相關(guān)性。李軍[8]的研究未見PD-L1的表達水平與患者的性別、年齡、IPI評分、B癥狀、LDH水平及Ann Arbor分期之間的相關(guān)性。但以上兩項研究并沒有研究說明PD-1表達與患者臨床病理特征的關(guān)系。目前，PD-L1和PD-1在PTCL組織中的表達與患者臨床病理特征的關(guān)系研究結(jié)論不一致，可能與所用組織不同及樣本含量少等因素有關(guān)。國內(nèi)外尚鮮見PD-L1和PD-1與化療療效與預后方面的研究。本研究探討了PD-L1和PD-1在PTCL組織中的表達水平與患者近期療效和遠期生存情況，結(jié)果顯示陽性表達者化療療效欠佳。因本研究樣本量較少，仍需進一步擴大樣本量證實。

因此，檢測PTCL患者組織中PD-L1、PD-1的表達對評估預后及化療效果有一定的參考價值，具體機制需進一步研究。

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（2015-09-14收稿2015-11-09修回）

（本文編輯李國琪）

The expressions and clinical significance of PD-L1 and PD-1 in peripheral T-cell lymphoma

ZHAO Yue, BU Qing
Department of Oncology, Guilin Medical University Affiliated Hospital, Guilin 541001, China Corresponding Author E-mail: buqing1993@qq.com

Abstract:Objective To investigate the expression levels and clinical significance of programmed cell death 1 ligand (PD-L1) and programmed cell death factor-1 (PD-1) in peripheral T-cell lymphoma (PTCL). Methods Immunohistochem?istry was used to detect expression levels of PD-L1 and PD-1 in PTCL (test group, n=51) and benign proliferative lesions of lymph node tissues (control group, n=20). The correlations of PD-L1 and PD-1 expressions with clinical pathological param?eters and prognosis were analyzed between two groups. Results The expression level of PD-L1 was significantly higher in PTCL group than that in control group (74.51% vs 35.00%,χ2=9.662, P＜0.05). The positive expression of PD-1 was signifi?cantly higher in PTCL group than that in control group (66.67% vs 25.00%,χ2=10.074, P＜0.05). There were significant dif?ferences in PD-L1 and PD-1 expressions between different peripheral lactate dehydrogenase (LDH) levels of PTCL group (P＜0.05). After two cycles of CHOP or ECHOP treatments, the response rate (RR) was higher in PD-L1 negative group than that in positive group (84.6% vs 47.4%，χ2=5.478, P＜0.05), and RR was higher in PD-1 negative group than that in positive group（82.4% vs 44.1%,χ2=6.755, P＜0.05). The median overall survival (OS) time was higher in PD-L1 negative group than that in positive group (29.8 months vs 17.6 months，χ2=4.413, P＜0.05) and the median OS time was higher in PD-1 negative group than that in positive group (29.8 months vs 17.6 months,χ2=8.293, P＜0.05). Conclusion There are high expression levels of PD-L1 and PD-1 in peripheral T-cell lymphoma, which is closely related with the elevated LDH in peripheral blood, poor response rate and shorter OS. Therefore, the expression levels of PD-L1 and PD-1 can be used as factors of worse effect of chemotherapy and poor prognosis.

Key words:peripheral T-cell lymphoma; programmed death 1-ligad; programmed cell death factor-1; immunohisto?chemistry; Kaplan-Meiers estimate

中圖分類號：R733.4

文獻標志碼：A

DOI:10.11958/20150169

基金項目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會自籌經(jīng)費科研課題（Z2015368）

作者簡介：趙越（1989），女，碩士在讀，主要從事惡性腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究

通訊作者E-mail:buqing1993@qq.com