郭棟棟，彭代銀，李珊珊，韓　嵐，張艷艷，王飛龍

(安徽中醫(yī)藥大學藥學院 安徽省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，安徽 合肥　230012)

◇藥學研究◇

桃紅四物顆粒的初步藥效學研究

郭棟棟，彭代銀，李珊珊，韓嵐，張艷艷，王飛龍

(安徽中醫(yī)藥大學藥學院 安徽省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，安徽 合肥230012)

摘要：目的對復方桃紅四物湯顆粒(TSG)的藥效學作出初步評價并比較傳統(tǒng)水煎液桃紅四物湯(TSD)作用的差異。方法通過復制急性血瘀證大鼠模型，治療組通過給予不同劑量的桃紅四物顆粒和一定劑量的陽性對照藥，觀察模型建立的情況，檢測相關(guān)血液流變學和生化指標，探究桃紅四物顆粒的初步藥效學情況。結(jié)果桃紅四物顆粒能夠降低模型大鼠的全血黏度和血漿黏度，有效改善其血流變的功能；有效降低模型大鼠血清中內(nèi)皮素-1(ET-1)的水平,升高一氧化氮(NO)的水平。結(jié)論根據(jù)試驗結(jié)果，桃紅四物顆粒能夠有效改善急性血瘀模型大鼠的血液流變功能，可能通過降低大鼠血清中ET-1、升高NO而發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞：復合混合物;桃紅四物湯;血瘀;治療等效;血流動力學;醫(yī)學,中國傳統(tǒng)

桃紅四物湯是調(diào)經(jīng)的經(jīng)典方之一，是《玉機微義》轉(zhuǎn)引的《醫(yī)壘元戎》中的方子，也稱加味四物湯，桃紅四物湯這一名稱最早見于清·吳謙所著的《醫(yī)宗金鑒》。該方由熟地、當歸、白芍、川芎、桃仁、紅花六味藥組成，功效為養(yǎng)血活血[1]。桃紅四物湯以祛瘀為核心，輔助養(yǎng)血、行氣。方中以破血之藥桃仁、紅花為主，活血化瘀；以甘溫之熟地、當歸滋陰補肝、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)；白芍養(yǎng)血和血，增補血之力；川芎活血行氣、調(diào)暢氣血，輔助活血之功[2]。現(xiàn)代藥理學研究已經(jīng)表明，該方同時具有擴張血管抗血栓[3]、抗血小板[4]、抗疲勞、抗休克、調(diào)節(jié)免疫功能等作用，在婦科方面也有比較好的療效[5]。

顆粒劑是有別于傳統(tǒng)中藥湯劑的新型制劑，通過現(xiàn)代化制藥設(shè)備技術(shù)，將傳統(tǒng)飲片經(jīng)過提取、濃縮、分離、干燥、制粒、包裝等環(huán)節(jié)后，而制成的中藥顆粒制劑，與飲片相比具有一定的優(yōu)勢，如服用簡便，便于攜帶儲存，不易霉變，便于調(diào)配，工藝穩(wěn)定，加入矯味劑提高患者依從性等[6]。雖然其仍存在著與傳統(tǒng)飲片相比價格偏高，與西藥相比質(zhì)量評價標準不統(tǒng)一、產(chǎn)品規(guī)格不統(tǒng)一等不足，但臨床已推廣并使用。桃紅四物湯目前主要以湯劑用于臨床治療，為了改善傳統(tǒng)湯劑的缺點，擴大使用范圍，課題組已將其改良成為顆粒劑，為了保障顆粒劑的質(zhì)量及療效，課題組前期對桃紅四物湯的醇提取工藝[7]、水提取工藝[8]進行優(yōu)選，盡量保證有效成分充分提取。實驗通過建立急性血瘀證大鼠模型，實驗組通過給予不同劑量的桃紅四物顆粒和一定劑量的陽性對照藥，觀察模型建立的情況，檢測相關(guān)血液流變學和生化指標，探究桃紅四物顆粒的初步藥效學情況為日后的開發(fā)和應(yīng)用提供一定的實驗基礎(chǔ)和參考。

1實驗材料與儀器

1.1實驗動物健康SD大鼠70只，雌性，體質(zhì)量180～220 g，購自常州卡文斯實驗動物有限公司，合格證號：SCXK(蘇)2011-0003。實驗大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后用于實驗。

1.2藥品及試劑桃紅四物顆粒、桃紅四物湯水煎劑，實驗室自制；復方丹參片(批號：20140316)，華佗國藥股份有限公司；鹽酸腎上腺素注射液，批號：10140902，上海禾豐制藥有限公司；NO試劑盒，批號：20141217，南京建成生物工程研究所；ET-1試劑盒，批號：E-30589，上海源葉生物技術(shù)有限公司。

1.3實驗儀器RT-6000型酶標儀，深圳雷杜生命科學股份有限公司；JW-3021HR型高速冷凍離心機，安徽嘉文儀器裝備有限公司；RT-3100型洗板機，深圳雷杜生命科學股份有限公司；DNP-9052BS-Ⅲ型電熱恒溫箱，上海三發(fā)科學儀器有限公司；UV-1800型紫外分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；GL-88B漩渦混合器，其林貝爾儀器制造有限公司；LG-R-80B型全自動血液黏度儀,北京中勤世帝科學儀器有限公司。

2實驗方法

2.1受試藥物的制備桃紅四物顆粒，實驗室自制；桃紅四物湯水煎劑，按處方比例桃仁∶當歸∶紅花∶川芎∶白芍∶熟地黃(3∶3∶2∶2∶3∶4)進行煎煮，即得。

2.2動物分組及給藥將適應(yīng)性飼養(yǎng)后的大鼠，隨機分為對照組、模型對照組、桃紅四物顆粒的高、中、低(18、9、4.5 g·kg-1)劑量組、復方丹參片陽性對照組(0.4 g·kg-1)、桃紅四物湯水煎劑組(9 g·kg-1)，每組10只。連續(xù)灌胃給藥14 d，每天1次，空白組、模型組以等量的生理鹽水。末次灌胃給藥1 h后，除正常對照組外，各試驗組大鼠皮下注射鹽酸腎上腺素注射液(0.8 mg·kg-1)，共2次，兩次注射時間間隔為4 h。首次注射后2 h，將各組大鼠置于0～2℃冰水浴4 min，建立急性血瘀證大鼠模型[9]。

2.3樣品的采集與處理急性血瘀證大鼠模型建立成功12 h后，3.5%水合氯醛麻醉，經(jīng)腹主動脈取血。取上述各組大鼠肝素抗凝后的全血，每只5 mL，進行全血黏度(低切1/s、低切5/s、中切30/s、高切200/s)和血漿黏度的測定。取每只全血2 mL，以3 500 r·min-1離心10 min后吸取上層血清，保存待用。采用ELISA法測定大鼠血清中的ET-1含量，采用化學法測定血清中的NO含量，實驗操作分別按ET-1、NO試劑盒的說明書進行。

3結(jié)果

3.1大鼠血液流變學由表1可知，造模后模型對照組大鼠的全血黏度較空白對照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，血漿黏度較空白對照組明顯升高，存在顯著性差異(P<0.01)，說明大鼠的急性血瘀證模型建立成功。與模型對照組相比，桃紅四物顆粒的高、中、低劑量組、桃紅四物湯水煎劑組及復方丹參片組大鼠的全血低切黏度均顯著降低(P<0.01或P<0.05)，桃紅四物顆粒高、中、低劑量組及復方丹參片組大鼠的全血中切和高切黏度均顯著降低(P<0.01或P<0.05)，表明桃紅四物顆粒能夠降低模型大鼠的全血黏度；桃紅四物顆粒高、中、低劑量組、桃紅四物湯水煎劑組及復方丹參片組大鼠的血漿黏度均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明桃紅四物顆粒能夠降低模型大鼠的血漿黏度。實驗結(jié)果說明桃紅四物顆粒有效改善其血流變的功能。

表1　桃紅四物顆粒對大鼠全血黏度、血漿黏度的影響(n=10)

注：與空白對照組比較，aP<0.01；與模型對照組比較,bP<0.01,cP<0.05。

3.2大鼠血清ET-1、NO由表2可知，造模后模型對照組大鼠的血清ET-1的濃度較空白對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；血清NO的濃度明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，也說明大鼠的急性血瘀證模型建立成功。與模型對照組相比，桃紅四物顆粒高、中、低劑量組、桃紅四物湯水煎劑組及復方丹參片組大鼠的血清ET-1的濃度均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)。結(jié)果顯示，桃紅四物顆粒能有效降低模型大鼠血清中ET-1的水平。桃紅四物顆粒高、中劑量組、及復方丹參片組大鼠的血清NO的濃度均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01，或P<0.05)。結(jié)果提示，桃紅四物顆粒能夠有效升高模型大鼠血清中NO的水平。

表2　桃紅四物顆粒對大鼠血清ET-1、NO的

注：與空白對照組比較，aP<0.05；與模型對照組比較，cP<0.05；bP<0.01。

4討論

血瘀證是一類與血液、血液循環(huán)有關(guān)的病理過程。中醫(yī)學對于血瘀證的研究認識較早，《黃帝內(nèi)經(jīng)》等經(jīng)典中雖沒有明確提出 “血瘀證”這一概念，但已有血瘀證的相關(guān)描述，如《素問·至真要大論》中的 “血脈凝泣”，《素問·調(diào)經(jīng)論》中的“血凝泣”，《素問·五臟生成》中的“衃血”等[10]。活血化瘀中藥在治療血瘀證方面具有悠久的歷史，常用的活血化瘀中藥有上百種。中醫(yī)將活血化瘀中藥大致分為以下幾類[11]:和血藥(如丹參、生地黃、當歸、赤芍等)、活血藥(如川芎、紅花、益母草、三七等)及破血藥(如水蛭、三棱、莪術(shù)、桃仁等)?，F(xiàn)代醫(yī)藥學研究發(fā)現(xiàn)，活血化瘀中藥通過改善血流動力學、血液流變學、抑制血栓形成、抗動脈粥樣硬化及心肌缺血、抑制炎癥等過程發(fā)揮其活血化瘀作用[12]。

血液流變學是研究關(guān)于血液及其相關(guān)成分流動性和流變性的學科，許多臨床上的主要疾病的發(fā)生和發(fā)展往往存在著血液流變學的異常，因此，在臨床的鑒別診斷和藥物研究中血液流變學的檢測具有十分重要的意義[13]。臨床上血液流變學的常用檢測指標主要包括全血和血漿黏度、紅細胞壓積、血沉等，其中全血黏度和血漿黏度是最常用的反映血液黏滯性的指標[14]。血瘀證的發(fā)生和發(fā)展與血管內(nèi)皮功能的改變有著密切聯(lián)系。其中，ET和NO是較常用也是研究較多的一對調(diào)控血管功能的活性物質(zhì)[15]。ET存在于血管內(nèi)皮以及各種組織和細胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，對維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)起重要作用。ET能夠表現(xiàn)出很強的縮血管功能，缺氧缺血或者理化等因素的刺激下能夠促進ET-1的釋放，進一步促進血管收縮從而增加血栓形成的風險；在血管內(nèi)皮細胞里產(chǎn)生的NO氣體，由于其脂溶性的性質(zhì)，將很快滲透出細胞膜向下擴散進入平滑肌細胞，從而作用于平滑肌細胞，使其松弛，擴張血管，調(diào)節(jié)血流狀態(tài)。同時也會滲透出細胞膜向上擴散進入血液，進入血小板細胞，降低血小板活性，抑制其凝集和向血管內(nèi)皮的黏附，從而防止血栓的形成，預(yù)防動脈粥樣硬化的發(fā)生[16]。ET和NO相互調(diào)控著彼此的合成與釋放，從而調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮和舒張[17]。

通過對桃紅四物顆粒的初步藥效學評價，實驗結(jié)果顯示，桃紅四物顆粒能夠調(diào)節(jié)急性血瘀證模型大鼠血液的高黏滯狀態(tài)，降低大鼠的全血黏度和血漿黏度，使血液流變學功能恢復到正常水平，改善血瘀的相關(guān)癥狀，發(fā)揮對急性血瘀證模型大鼠的治療作用。試驗中也發(fā)現(xiàn)，桃紅四物顆粒能顯著上調(diào)模型大鼠血清中NO的水平，下調(diào)ET-1的表達，桃紅四物顆粒的養(yǎng)血活血、去瘀生新的作用可能與調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能中NO和ET-1的表達有關(guān)。與傳統(tǒng)湯劑相比，由于提取工藝的優(yōu)化，由于各種有效成分充分浸出，結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義，因此桃紅四物顆粒藥效與傳統(tǒng)湯劑基本一致，但制備的顆粒劑具有服用簡便，便于攜帶儲存，不易霉變等優(yōu)勢。下一步將進一步評價桃紅四物顆粒在婦科、內(nèi)科等疾病方面的藥效，為進一步開發(fā)成為院內(nèi)制劑提供理論基礎(chǔ)，同時為今后的應(yīng)用提供一定的參考。

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Pharmacodynamic evaluation of Taohong Siwu Granules

GUO Dong-dong,PENG Dai-yin,LI Shan-shan,et al

(AnhuiKeyLaboratoryofModernizedChineseMaterial,CollegeofPharmacy，AnhuiUniversityofChineseMedicine,Hefei,Anhui230012,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the pharmacodynamic effect of Taohong Siwu Granules and compare its difference from the traditional Taohongsiwu Decoction.MethodsBy copying the acute blood stasis model rats,the treatment group was given different doses of Taohong Siwu granule and a certain dose of positive control drug.Observation model was established,and the related blood rheology and biochemical indicators were detected to explore the primary pharmacodynamics effect of Taohong Siwu granule.ResultsTaohong Siwu granule could decrease the whole blood viscosity and plasma viscosity of model rats,improve the function of the level of blood rheology,effectively reduced the model rats’ serum endothelin-1 (ET-1) levels,and elevated the levels of nitric oxide (NO).ConclusionsAccording to the test results,Taohong Siwu granule can effectively improve the function of hemorrheology in acute blood stasis model rats,and may play the role by reducing the rat serum ET-1 and increasing nitric oxide.

Key words:Complex Mixtures;Taohong Siwu Decoction;Blood Stasis;Therapeutic Equivalency;Hemodynamics;Medicine,Chinese Traditional

基金項目:國家自然科學基金項目(No 81473387) ；國家自然科學基金青年項目(No 81503291)；安徽省自然科學基金項目(No 1408085QH163)

通信作者：彭代銀，男，教授，博士生導師，研究方向：藥理學，E-mail:pengdy@antcm.edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.004

(收稿日期：2016-02-18，修回日期：2016-03-12)