郭棟棟，彭代銀，李珊珊，韓　嵐，張艷艷，王飛龍

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 安徽省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥　230012)

◇藥學(xué)研究◇

桃紅四物顆粒的初步藥效學(xué)研究

郭棟棟，彭代銀，李珊珊，韓嵐，張艷艷，王飛龍

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 安徽省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥230012)

摘要：目的對(duì)復(fù)方桃紅四物湯顆粒(TSG)的藥效學(xué)作出初步評(píng)價(jià)并比較傳統(tǒng)水煎液桃紅四物湯(TSD)作用的差異。方法通過(guò)復(fù)制急性血瘀證大鼠模型，治療組通過(guò)給予不同劑量的桃紅四物顆粒和一定劑量的陽(yáng)性對(duì)照藥，觀察模型建立的情況，檢測(cè)相關(guān)血液流變學(xué)和生化指標(biāo)，探究桃紅四物顆粒的初步藥效學(xué)情況。結(jié)果桃紅四物顆粒能夠降低模型大鼠的全血黏度和血漿黏度，有效改善其血流變的功能；有效降低模型大鼠血清中內(nèi)皮素-1(ET-1)的水平,升高一氧化氮(NO)的水平。結(jié)論根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，桃紅四物顆粒能夠有效改善急性血瘀模型大鼠的血液流變功能，可能通過(guò)降低大鼠血清中ET-1、升高NO而發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞：復(fù)合混合物;桃紅四物湯;血瘀;治療等效;血流動(dòng)力學(xué);醫(yī)學(xué),中國(guó)傳統(tǒng)

桃紅四物湯是調(diào)經(jīng)的經(jīng)典方之一，是《玉機(jī)微義》轉(zhuǎn)引的《醫(yī)壘元戎》中的方子，也稱加味四物湯，桃紅四物湯這一名稱最早見于清·吳謙所著的《醫(yī)宗金鑒》。該方由熟地、當(dāng)歸、白芍、川芎、桃仁、紅花六味藥組成，功效為養(yǎng)血活血[1]。桃紅四物湯以祛瘀為核心，輔助養(yǎng)血、行氣。方中以破血之藥桃仁、紅花為主，活血化瘀；以甘溫之熟地、當(dāng)歸滋陰補(bǔ)肝、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)；白芍養(yǎng)血和血，增補(bǔ)血之力；川芎活血行氣、調(diào)暢氣血，輔助活血之功[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究已經(jīng)表明，該方同時(shí)具有擴(kuò)張血管抗血栓[3]、抗血小板[4]、抗疲勞、抗休克、調(diào)節(jié)免疫功能等作用，在婦科方面也有比較好的療效[5]。

顆粒劑是有別于傳統(tǒng)中藥湯劑的新型制劑，通過(guò)現(xiàn)代化制藥設(shè)備技術(shù)，將傳統(tǒng)飲片經(jīng)過(guò)提取、濃縮、分離、干燥、制粒、包裝等環(huán)節(jié)后，而制成的中藥顆粒制劑，與飲片相比具有一定的優(yōu)勢(shì)，如服用簡(jiǎn)便，便于攜帶儲(chǔ)存，不易霉變，便于調(diào)配，工藝穩(wěn)定，加入矯味劑提高患者依從性等[6]。雖然其仍存在著與傳統(tǒng)飲片相比價(jià)格偏高，與西藥相比質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一、產(chǎn)品規(guī)格不統(tǒng)一等不足，但臨床已推廣并使用。桃紅四物湯目前主要以湯劑用于臨床治療，為了改善傳統(tǒng)湯劑的缺點(diǎn)，擴(kuò)大使用范圍，課題組已將其改良成為顆粒劑，為了保障顆粒劑的質(zhì)量及療效，課題組前期對(duì)桃紅四物湯的醇提取工藝[7]、水提取工藝[8]進(jìn)行優(yōu)選，盡量保證有效成分充分提取。實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立急性血瘀證大鼠模型，實(shí)驗(yàn)組通過(guò)給予不同劑量的桃紅四物顆粒和一定劑量的陽(yáng)性對(duì)照藥，觀察模型建立的情況，檢測(cè)相關(guān)血液流變學(xué)和生化指標(biāo)，探究桃紅四物顆粒的初步藥效學(xué)情況為日后的開發(fā)和應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和參考。

1實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠70只，雌性，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)：SCXK(蘇)2011-0003。實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2藥品及試劑桃紅四物顆粒、桃紅四物湯水煎劑，實(shí)驗(yàn)室自制；復(fù)方丹參片(批號(hào)：20140316)，華佗國(guó)藥股份有限公司；鹽酸腎上腺素注射液，批號(hào)：10140902，上海禾豐制藥有限公司；NO試劑盒，批號(hào)：20141217，南京建成生物工程研究所；ET-1試劑盒，批號(hào)：E-30589，上海源葉生物技術(shù)有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器RT-6000型酶標(biāo)儀，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；JW-3021HR型高速冷凍離心機(jī)，安徽嘉文儀器裝備有限公司；RT-3100型洗板機(jī)，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；DNP-9052BS-Ⅲ型電熱恒溫箱，上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司；UV-1800型紫外分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司；GL-88B漩渦混合器，其林貝爾儀器制造有限公司；LG-R-80B型全自動(dòng)血液黏度儀,北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1受試藥物的制備桃紅四物顆粒，實(shí)驗(yàn)室自制；桃紅四物湯水煎劑，按處方比例桃仁∶當(dāng)歸∶紅花∶川芎∶白芍∶熟地黃(3∶3∶2∶2∶3∶4)進(jìn)行煎煮，即得。

2.2動(dòng)物分組及給藥將適應(yīng)性飼養(yǎng)后的大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型對(duì)照組、桃紅四物顆粒的高、中、低(18、9、4.5 g·kg-1)劑量組、復(fù)方丹參片陽(yáng)性對(duì)照組(0.4 g·kg-1)、桃紅四物湯水煎劑組(9 g·kg-1)，每組10只。連續(xù)灌胃給藥14 d，每天1次，空白組、模型組以等量的生理鹽水。末次灌胃給藥1 h后，除正常對(duì)照組外，各試驗(yàn)組大鼠皮下注射鹽酸腎上腺素注射液(0.8 mg·kg-1)，共2次，兩次注射時(shí)間間隔為4 h。首次注射后2 h，將各組大鼠置于0～2℃冰水浴4 min，建立急性血瘀證大鼠模型[9]。

2.3樣品的采集與處理急性血瘀證大鼠模型建立成功12 h后，3.5%水合氯醛麻醉，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血。取上述各組大鼠肝素抗凝后的全血，每只5 mL，進(jìn)行全血黏度(低切1/s、低切5/s、中切30/s、高切200/s)和血漿黏度的測(cè)定。取每只全血2 mL，以3 500 r·min-1離心10 min后吸取上層血清，保存待用。采用ELISA法測(cè)定大鼠血清中的ET-1含量，采用化學(xué)法測(cè)定血清中的NO含量，實(shí)驗(yàn)操作分別按ET-1、NO試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行。

3結(jié)果

3.1大鼠血液流變學(xué)由表1可知，造模后模型對(duì)照組大鼠的全血黏度較空白對(duì)照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，血漿黏度較空白對(duì)照組明顯升高，存在顯著性差異(P<0.01)，說(shuō)明大鼠的急性血瘀證模型建立成功。與模型對(duì)照組相比，桃紅四物顆粒的高、中、低劑量組、桃紅四物湯水煎劑組及復(fù)方丹參片組大鼠的全血低切黏度均顯著降低(P<0.01或P<0.05)，桃紅四物顆粒高、中、低劑量組及復(fù)方丹參片組大鼠的全血中切和高切黏度均顯著降低(P<0.01或P<0.05)，表明桃紅四物顆粒能夠降低模型大鼠的全血黏度；桃紅四物顆粒高、中、低劑量組、桃紅四物湯水煎劑組及復(fù)方丹參片組大鼠的血漿黏度均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明桃紅四物顆粒能夠降低模型大鼠的血漿黏度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明桃紅四物顆粒有效改善其血流變的功能。

表1　桃紅四物顆粒對(duì)大鼠全血黏度、血漿黏度的影響(n=10)

注：與空白對(duì)照組比較，aP<0.01；與模型對(duì)照組比較,bP<0.01,cP<0.05。

3.2大鼠血清ET-1、NO由表2可知，造模后模型對(duì)照組大鼠的血清ET-1的濃度較空白對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血清NO的濃度明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，也說(shuō)明大鼠的急性血瘀證模型建立成功。與模型對(duì)照組相比，桃紅四物顆粒高、中、低劑量組、桃紅四物湯水煎劑組及復(fù)方丹參片組大鼠的血清ET-1的濃度均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。結(jié)果顯示，桃紅四物顆粒能有效降低模型大鼠血清中ET-1的水平。桃紅四物顆粒高、中劑量組、及復(fù)方丹參片組大鼠的血清NO的濃度均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，或P<0.05)。結(jié)果提示，桃紅四物顆粒能夠有效升高模型大鼠血清中NO的水平。

表2　桃紅四物顆粒對(duì)大鼠血清ET-1、NO的

注：與空白對(duì)照組比較，aP<0.05；與模型對(duì)照組比較，cP<0.05；bP<0.01。

4討論

血瘀證是一類與血液、血液循環(huán)有關(guān)的病理過(guò)程。中醫(yī)學(xué)對(duì)于血瘀證的研究認(rèn)識(shí)較早，《黃帝內(nèi)經(jīng)》等經(jīng)典中雖沒(méi)有明確提出 “血瘀證”這一概念，但已有血瘀證的相關(guān)描述，如《素問(wèn)·至真要大論》中的 “血脈凝泣”，《素問(wèn)·調(diào)經(jīng)論》中的“血凝泣”，《素問(wèn)·五臟生成》中的“衃血”等[10]?；钛鲋兴幵谥委熝鲎C方面具有悠久的歷史，常用的活血化瘀中藥有上百種。中醫(yī)將活血化瘀中藥大致分為以下幾類[11]:和血藥(如丹參、生地黃、當(dāng)歸、赤芍等)、活血藥(如川芎、紅花、益母草、三七等)及破血藥(如水蛭、三棱、莪術(shù)、桃仁等)?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，活血化瘀中藥通過(guò)改善血流動(dòng)力學(xué)、血液流變學(xué)、抑制血栓形成、抗動(dòng)脈粥樣硬化及心肌缺血、抑制炎癥等過(guò)程發(fā)揮其活血化瘀作用[12]。

血液流變學(xué)是研究關(guān)于血液及其相關(guān)成分流動(dòng)性和流變性的學(xué)科，許多臨床上的主要疾病的發(fā)生和發(fā)展往往存在著血液流變學(xué)的異常，因此，在臨床的鑒別診斷和藥物研究中血液流變學(xué)的檢測(cè)具有十分重要的意義[13]。臨床上血液流變學(xué)的常用檢測(cè)指標(biāo)主要包括全血和血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、血沉等，其中全血黏度和血漿黏度是最常用的反映血液黏滯性的指標(biāo)[14]。血瘀證的發(fā)生和發(fā)展與血管內(nèi)皮功能的改變有著密切聯(lián)系。其中，ET和NO是較常用也是研究較多的一對(duì)調(diào)控血管功能的活性物質(zhì)[15]。ET存在于血管內(nèi)皮以及各種組織和細(xì)胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，對(duì)維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)起重要作用。ET能夠表現(xiàn)出很強(qiáng)的縮血管功能，缺氧缺血或者理化等因素的刺激下能夠促進(jìn)ET-1的釋放，進(jìn)一步促進(jìn)血管收縮從而增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)；在血管內(nèi)皮細(xì)胞里產(chǎn)生的NO氣體，由于其脂溶性的性質(zhì)，將很快滲透出細(xì)胞膜向下擴(kuò)散進(jìn)入平滑肌細(xì)胞，從而作用于平滑肌細(xì)胞，使其松弛，擴(kuò)張血管，調(diào)節(jié)血流狀態(tài)。同時(shí)也會(huì)滲透出細(xì)胞膜向上擴(kuò)散進(jìn)入血液，進(jìn)入血小板細(xì)胞，降低血小板活性，抑制其凝集和向血管內(nèi)皮的黏附，從而防止血栓的形成，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生[16]。ET和NO相互調(diào)控著彼此的合成與釋放，從而調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮和舒張[17]。

通過(guò)對(duì)桃紅四物顆粒的初步藥效學(xué)評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，桃紅四物顆粒能夠調(diào)節(jié)急性血瘀證模型大鼠血液的高黏滯狀態(tài)，降低大鼠的全血黏度和血漿黏度，使血液流變學(xué)功能恢復(fù)到正常水平，改善血瘀的相關(guān)癥狀，發(fā)揮對(duì)急性血瘀證模型大鼠的治療作用。試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，桃紅四物顆粒能顯著上調(diào)模型大鼠血清中NO的水平，下調(diào)ET-1的表達(dá)，桃紅四物顆粒的養(yǎng)血活血、去瘀生新的作用可能與調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能中NO和ET-1的表達(dá)有關(guān)。與傳統(tǒng)湯劑相比，由于提取工藝的優(yōu)化，由于各種有效成分充分浸出，結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此桃紅四物顆粒藥效與傳統(tǒng)湯劑基本一致，但制備的顆粒劑具有服用簡(jiǎn)便，便于攜帶儲(chǔ)存，不易霉變等優(yōu)勢(shì)。下一步將進(jìn)一步評(píng)價(jià)桃紅四物顆粒在婦科、內(nèi)科等疾病方面的藥效，為進(jìn)一步開發(fā)成為院內(nèi)制劑提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)為今后的應(yīng)用提供一定的參考。

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Pharmacodynamic evaluation of Taohong Siwu Granules

GUO Dong-dong,PENG Dai-yin,LI Shan-shan,et al

(AnhuiKeyLaboratoryofModernizedChineseMaterial,CollegeofPharmacy，AnhuiUniversityofChineseMedicine,Hefei,Anhui230012,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the pharmacodynamic effect of Taohong Siwu Granules and compare its difference from the traditional Taohongsiwu Decoction.MethodsBy copying the acute blood stasis model rats,the treatment group was given different doses of Taohong Siwu granule and a certain dose of positive control drug.Observation model was established,and the related blood rheology and biochemical indicators were detected to explore the primary pharmacodynamics effect of Taohong Siwu granule.ResultsTaohong Siwu granule could decrease the whole blood viscosity and plasma viscosity of model rats,improve the function of the level of blood rheology,effectively reduced the model rats’ serum endothelin-1 (ET-1) levels,and elevated the levels of nitric oxide (NO).ConclusionsAccording to the test results,Taohong Siwu granule can effectively improve the function of hemorrheology in acute blood stasis model rats,and may play the role by reducing the rat serum ET-1 and increasing nitric oxide.

Key words:Complex Mixtures;Taohong Siwu Decoction;Blood Stasis;Therapeutic Equivalency;Hemodynamics;Medicine,Chinese Traditional

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No 81473387) ；國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(No 81503291)；安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No 1408085QH163)

通信作者：彭代銀，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥理學(xué)，E-mail:pengdy@antcm.edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.004

(收稿日期：2016-02-18，修回日期：2016-03-12)