盧　丹　王　冬　賈瑞波

(大連市藥品檢驗(yàn)所，大連 116021)

HPLC法測(cè)定甲硝唑氯化鈉注射液中甲硝唑含量的儀器比對(duì)實(shí)驗(yàn)

盧丹王冬賈瑞波

(大連市藥品檢驗(yàn)所，大連 116021)

摘要：建立了高效液相色譜法測(cè)定甲硝唑氯化鈉注射液中甲硝唑含量的儀器比對(duì)方法，并用Z比分?jǐn)?shù)統(tǒng)計(jì)法對(duì)35臺(tái)儀器的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，有效評(píng)價(jià)了不同高效液相色譜儀之間的差異。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜儀器比對(duì)Z比分?jǐn)?shù)

高效液相色譜儀是目前分析領(lǐng)域應(yīng)用較多的分析儀器之一，以此建立的高效液相色譜分析方法也成為儀器分析領(lǐng)域最為廣泛使用的方法。目前，高效液相色譜儀需要按照《JJG705-2014液相色譜儀檢定規(guī)程》進(jìn)行檢定，檢定合格后才能確保出具數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確和可靠，檢定周期為2年。使用部門按需求進(jìn)行期間核查，根據(jù)期間核查結(jié)果評(píng)價(jià)儀器在檢定周期內(nèi)的持續(xù)符合性。而在實(shí)際分析工作中，雖然高效液相色譜儀均檢定合格，且期間核查符合要求，但由于儀器品牌不同，使用年限不同，應(yīng)用領(lǐng)域不同等原因，造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的漂移，從而引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差，雖然這種偏差在誤差允許范圍內(nèi)，但有必要建立一種評(píng)價(jià)方法，用來(lái)評(píng)估不同高效液相色譜儀之間的差異，進(jìn)一步確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠。

1儀器比對(duì)方法的建立

1.1實(shí)驗(yàn)方法

儀器比對(duì)使用的實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)為國(guó)家法定標(biāo)準(zhǔn)，且在本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行過(guò)方法學(xué)確認(rèn)并確認(rèn)合格。本次實(shí)驗(yàn)方法依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版二部[1]中“甲硝唑氯化鈉注射液”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.2實(shí)驗(yàn)人員

高效液相色譜儀的操作人員均經(jīng)過(guò)相應(yīng)培訓(xùn)，并取得高效液相色譜儀上崗證。本次比對(duì)實(shí)驗(yàn)參與操作的人員為5人，每人負(fù)責(zé)操作7臺(tái)高效液相色譜儀，并計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)照品溶液的配制、供試品溶液的配制、比對(duì)樣品的分裝和發(fā)放均由具備相應(yīng)資質(zhì)的同一名人員完成，由2名具備數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)的人員對(duì)比對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3儀器設(shè)備

高效液相色譜儀均檢定合格并在檢定有效期內(nèi)，經(jīng)過(guò)日常維護(hù)保養(yǎng)，運(yùn)行狀態(tài)良好。所使用的其他儀器設(shè)備均應(yīng)檢定或校準(zhǔn)合格。

1.4試劑試藥

比對(duì)過(guò)程中所使用的試劑、試藥均應(yīng)來(lái)源可靠，并在使用有效期內(nèi)使用。

1.5環(huán)境要求

比對(duì)過(guò)程中應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度及濕度的穩(wěn)定，本次實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度控制在25℃±2℃，相對(duì)濕度控制在50%±10%。

1.6測(cè)定要求

比對(duì)實(shí)驗(yàn)應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)程序文件的要求進(jìn)行，并符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系。

2儀器比對(duì)方法應(yīng)用

2.1儀器

參加此次儀器比對(duì)的高效液相色譜儀共有35臺(tái)。按儀器品牌劃分：沃特斯24臺(tái)，安捷倫6臺(tái)，島津4臺(tái)，熱電1臺(tái)。所配檢測(cè)器均為紫外檢測(cè)器，泵系統(tǒng)均為低壓四元梯度，均配備自動(dòng)脫氣機(jī)和柱溫箱，進(jìn)樣方式均為自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，均配備色譜工作站；天平(型號(hào)：BP211D，賽多利斯)。

2.2耗材與試藥

色譜柱為Kromasil C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；甲醇(色譜純，批號(hào)013980，MREDA)；水為超純水(超純水機(jī)，賽多利斯)；甲硝唑?qū)φ掌?批號(hào)100191-201507，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；甲硝唑氯化鈉注射液(規(guī)格250mL：甲硝唑1.25g，批號(hào)20140811，遼寧民康制藥有限公司)。

2.3方法與結(jié)果2.3.1色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm；進(jìn)樣量20μL；理論板數(shù)按甲硝唑峰計(jì)算不低于2000。

2.3.2溶液制備

精密量取甲硝唑氯化鈉注射液1 mL至100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，含甲硝唑標(biāo)示濃度為50.00μg/mL，作為供試品溶液。另取甲硝唑?qū)φ掌?0.00mg，至200mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，含甲硝唑濃度為50.00μg/mL，作為對(duì)照品溶液。

2.3.3含量測(cè)定

按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算甲硝唑的標(biāo)示含量。對(duì)照品溶液與供試品溶液分別進(jìn)樣6次，計(jì)算甲硝唑的含量(結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位XX.XX%)，并計(jì)算含量RSD%(結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位X.XX%)。

3結(jié)果統(tǒng)計(jì)

本方法以甲硝唑的含量測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)各高效液相色譜儀之間的差異，35臺(tái)儀器比對(duì)結(jié)果經(jīng)Grubbs檢驗(yàn)[2]，在95%置信水平，數(shù)據(jù)均有效，無(wú)異常值。再通過(guò)Z比分?jǐn)?shù)[3]對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若│Z│≤2，為滿意結(jié)果；2<│Z│<3，為可疑結(jié)果，應(yīng)引起注意；│Z│≥3，為不滿意結(jié)果(離群)。其中31臺(tái)儀器的檢測(cè)結(jié)果為滿意結(jié)果；1臺(tái)儀器出現(xiàn)可疑結(jié)果；3臺(tái)儀器檢測(cè)結(jié)果離群。結(jié)果見(jiàn)圖1及表1。

圖1　甲硝唑氯化鈉注射液中甲硝唑含量比對(duì)實(shí)驗(yàn)Z比分?jǐn)?shù)圖

代碼結(jié)果(%)Z值儀器型號(hào)代碼結(jié)果(%)Z值儀器型號(hào)197.84-3.53Waters2695/29981998.470.51島津LC-2010CHT298.20-1.22Waters2695/24892099.074.37Agilent1200397.62-4.95Waters2695/29962198.16-1.48Waters2695/2489498.35-0.26Waters2695/24892298.30-0.58Agilent1100598.420.19Agilent11002398.21-1.16Waters2695/2489698.13-1.67Waters2695/24892498.16-1.48WatersAcquity798.09-1.93Waters2695/24892598.35-0.26Waters2695/2489898.33-0.39Waters2695/24892698.28-0.71Waters2695/2998998.490.64熱電SUMMITP680A2798.490.64Waters2695/24891098.510.77Waters2695/24892898.641.61Waters2695/24891198.450.39Agilent12602998.460.45Waters2695/29961298.430.26Waters2695/29983098.430.26Waters2695/24871398.420.19島津LC20AD/SPD20A3198.571.16LC20AD/SPD20A1498.38-0.06Waters2695/24893298.591.28Waters2695/24891598.37-0.13Waters2695/29983398.390.00Waters2695/24891698.681.86島津LC-12603498.33-0.39Waters2695/24891798.792.57Agilent12603598.661.73Agilent12601898.28-0.71Waters2695/2487中位值98.39四分位間距IQR0.21低四分位數(shù)98.28高四分位數(shù)98.49標(biāo)準(zhǔn)化IQR0.155673穩(wěn)健CV(%)0.16極小值97.62極大值99.27極差1.65

4討論

(1) 本方法為常量分析方法，如果使用高效液相色譜儀從事微量或痕量分析，應(yīng)將本方法中甲硝唑的含量水平設(shè)置為方法定量限水平，重新進(jìn)行比對(duì)。

(2)儀器比對(duì)實(shí)驗(yàn)要求測(cè)試樣品、實(shí)驗(yàn)環(huán)境及操作過(guò)程的一致性，因此測(cè)定用樣品為同一樣品，由同一人員進(jìn)行配制和分裝；對(duì)照品溶液和供試品溶液均配制一份，以減小稱量和配制過(guò)程的誤差；實(shí)驗(yàn)環(huán)境和儀器操作過(guò)程均按相應(yīng)操作規(guī)程進(jìn)行。

(3) Z比分?jǐn)?shù)統(tǒng)計(jì)法用于評(píng)價(jià)單個(gè)樣本在整體樣本中的離散程度，是當(dāng)前國(guó)際上實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證及比對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)的常用方法。

(4) 參加本次比對(duì)實(shí)驗(yàn)的儀器中，88.6%的儀器達(dá)到滿意結(jié)果，可疑結(jié)果占2.9%，不滿意結(jié)果占8.5%。實(shí)驗(yàn)室可以充分利用儀器比對(duì)結(jié)果，在從事能力驗(yàn)證活動(dòng)、限度邊緣樣品檢測(cè)、不合格樣品復(fù)試等實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中，選擇偏離較小(即Z比分?jǐn)?shù)較小)的儀器進(jìn)行分析；對(duì)于比對(duì)中出現(xiàn)可疑結(jié)果的儀器，在日常使用中應(yīng)加以注意；對(duì)于比對(duì)中出現(xiàn)不滿意結(jié)果的儀器，應(yīng)查找原因，采取有效的糾正措施。

參考文獻(xiàn)

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Comparison of different HPLC assay for determination of metronidazole in metronidazole and sodium chloride injection.

Lu Dan, Wang Dong, Jia Ruibo

(DalianInstituteforDrugControl,Dalian116021,China)

Abstract：An inter-instrument comparison method for the determination of metronidazole in metronidazole and sodium chloride injection by HPLC was established. Z-score was used to analyze the determination results of 35 instruments. This method can evaluate their measurement differences effectively.

Key words：HPLC；inter-instrument comparison；Z-score

作者簡(jiǎn)介：盧丹，本科，2005年畢業(yè)于沈陽(yáng)藥科大學(xué)，現(xiàn)工作于大連市藥品檢驗(yàn)所。

DOI:10.3936/j.issn.1001-232x.2016.03.019

收稿日期：2015-11-26