安 樂, 郁長治, 郭小娜*

(1.新疆醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830054)

沙棘葉中總黃酮提取純化工藝研究

安 樂1, 郁長治2, 郭小娜2*

(1.新疆醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830054)

摘要[目的]建立沙棘葉中總黃酮的最佳提取純化工藝。 [方法]采用正交設計試驗，以高效液相色譜圖中主要化學成分的峰面積為指標，考察提取溫度、提取料液比、乙醇濃度對沙棘葉中總黃酮提取率的影響。[結(jié)果]確定沙棘葉中總黃酮的最佳提取條件為A3B2C2，即提取溫度60 ℃、料液比1∶10(g∶mL)、乙醇濃度60%；固定超聲功率60 Hz，時間30 min，連續(xù)提取2次。[結(jié)論]該提取工藝黃酮提取率高，質(zhì)量易于控制，為沙棘中黃酮類成分的提取和測定提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞沙棘；總黃酮；提取工藝

沙棘又名醋柳、沙棗(Fructushippophae)，為胡頹子科(Elaeagnaceae)植物，是公認的珍貴藥食同源植物[1]，主產(chǎn)于我國內(nèi)蒙古、新疆、青海等地。沙棘不僅是理想的生態(tài)植物同時其中含有的各類化合物也具有很高的藥用價值。沙棘是我國古代藏醫(yī)、蒙醫(yī)用來治病的常用藥[2-3]，具有活血散瘀、止咳祛痰、利肺養(yǎng)胃等功效。沙棘葉富含黃酮、有機酸、揮發(fā)油、萜類、氨基酸等多種成分[4-6]。目前研究較多的沙棘黃酮是沙棘中重要的活性成分，其在心血管疾病方面有突出作用，具有抗心肌缺血、抗心律失、抗血栓形成等作用，同時改善免疫系統(tǒng)，抗癌、抗氧化方面同樣發(fā)揮重要作用[7]。近年來國內(nèi)對沙棘果實的研究非常廣泛，已經(jīng)趨于成熟[8-9]，但對沙棘葉及其他部位的開發(fā)利用還較為欠缺。筆者利用正交設計試驗建立了沙棘葉中總黃酮的提取純化工藝，以期為更充分地開發(fā)利用沙棘提供科學的依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象。沙棘葉采自新疆農(nóng)九師。

1.1.2主要儀器。安捷倫1100高效液相色譜儀；科導5200HP超聲提取儀；賽多利斯211D電子分析天平。

1.1.3主要試劑。對照品有異鼠李素、槲皮素、山柰素，木犀草素購買自中國藥品生物制品檢定所。試驗所用的乙腈、甲醇為色譜純級別，水為雙蒸水；鹽酸、磷酸、乙醇及其他試劑均為分析純級別。

1.2方法

1.2.1高效液相色譜分析條件。分析使用Waters C18色譜柱；高效液相檢測波長為360 nm；柱溫箱溫度25 ℃；流動相由甲醇-乙腈-0.4 %磷酸組成，洗脫方式采用梯度洗脫(表1)，運行時間 25 min，流動相流速1 mL/min，進樣量 20 μL。

表1　HPLC梯度條件

1.2.2對照品溶液的配制。分別精密稱取對照品異鼠李素20.00 mg、槲皮素14.95 mm、山奈素10.10 mg；以甲醇溶解稀釋成濃度分別為80.00、59.80、40.40 g/mL的對照品儲備溶液，備用。

1.2.3供試品溶液的配制。稱取沙棘總黃酮提取物60 mg，加入甲醇30 mL、25% 鹽酸5 mL置于50 mL錐形瓶中，將配置好的溶液于 90 ℃水浴中水解60 min后冷卻備用。精密吸取水解后的溶液5 mL，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，搖勻待測。

1.2.4標準曲線的繪制。分別精密移取“1.2.2”條件下的3種對照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL至10 mL的容量瓶中，加入甲醇稀釋定容。在“1.2.1”色譜條件下進樣20 μL，記錄色譜圖。以高效液相色譜圖峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.5正交試驗設計。選取提取溫度(A)、料液比(B)和乙醇濃度(C)為影響沙棘葉中總黃酮提取率的3個主要因素，各因素選取3個水平，采用L9(34)正交試驗表(表2)設計試驗；其他條件為超聲提取功率60 Hz，提取時間30 min，連續(xù)提取2次。精確稱取沙棘葉干粉20.0 g，加入正交設計中的不同溶劑系統(tǒng)，在其他提取條件平行不變的條件下操作，提取結(jié)果按“1.2.1”條件運行，以各組積分峰面積之和與樣品質(zhì)量的比值記作(A/m)為量化指標進行樣品分析。

表2　正交試驗因素水平

2結(jié)果與分析

2.1HPLC色譜條件由圖1可見，在“1.2.1”色譜條件下，樣品中各組分的色譜峰分離度良好，符合高效液相色譜定量分析的要求。

注：1為槲皮素；2為木犀草素；3為山柰素；4為異鼠李素。Note: 1. Quercetin; 2. Luteolin; 3. Kaemperfol; 4. Isorhamnetin.圖1　混合對照品(a)和沙棘樣品(b)色譜圖Fig. 1　Chromatograms of mixed reference substances (a) and F. hippophae samples (b)

2.2線性關(guān)系的考察以峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線，得到槲皮素、山柰素和異鼠李素的線性方程分別為Y=66.96X-5.99(r=0.999 5)、Y=50.11X-19.5(r=0.999 9)、Y=69.13X-39.5(r=0.999 9)，表明它們分別在5.98～47.84、4.04～32.32、8.00～64.00 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3正交試驗由表3可知，影響沙棘葉中總黃酮提取率的因素主次順序依次為A、C、B，且提取沙棘葉中總黃酮的最佳工藝條件為A3B1C2，即提取溫度60 ℃、料液比為1∶8(g∶mL)、乙醇濃度60%；但在實際操作過程中干燥的沙棘葉粉末吸水性較大，影響提取的流動性，不利于循環(huán)超聲提取，且方差分析可知，在P>0.1時，料液比對總黃酮的提取無顯著性影響，綜合分析考慮將料液比確定為1∶10。最終確定提取沙棘葉中總黃酮的最佳工藝條件為A3B2C2，即提取溫度60 ℃、料液比為1∶10、乙醇濃度60%，其中超聲功率60 Hz，時間30 min，連續(xù)提取2次。

表3　正交試驗結(jié)果分析

3結(jié)論

該研究以沙棘葉中的總黃酮峰面積為提取指標，分別考察了提取溫度、乙醇濃度、料液比對提取效率的影響，并通過正交設計試驗對提取方法進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，沙棘葉中總黃酮最佳工藝條件為提取溫度60 ℃、料液比1∶10、乙醇濃度60%，超聲功率60 Hz，時間30 min，連續(xù)提取2次。該提取工藝總黃酮提取率高且穩(wěn)定，質(zhì)量易于控制，為沙棘中黃酮類成分的提取和測定提供依據(jù)。

參考文獻

[1] 趙志永,王東健,陳奇凌,等.沙棘果實各部位黃酮含量的測定分析[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2015(6): 59-60.

[2] 金敬紅,孫曉明,吳素玲.沙棘高效高值綜合利用技術(shù)的研究[J].中國野生植物資源,2015(4):81-86.

[3] 南星梅,顧健.藏藥五味沙棘口服液的制備工藝及藥效學評價[J].西南民族大學學報(自然科學版),2014(5):701-705.

[4] 田景民,陳貴林.沙棘果渣總黃酮提取工藝響應面法優(yōu)化與抗氧化活性研究[J].食品安全質(zhì)量檢測學報,2014(9):2813-2820.

[5] 鄭京.沙棘葉中總黃酮的提取與測定[J].江蘇化工,2008(1):36-38.

[6] 楊云裳,張應鵬,李春雷,等.沙棘汁中總黃酮提取及純化研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2011(3):570-571.

[7] 李利軍,陳江梅,賀建超,等.沙棘果汁總黃酮含量測量不確定度的評定[J].西北大學學報,2010(6):1036-1040.

[8] 孫斌,瞿偉菁,張曉玲,等.高效液相色譜法測定沙棘籽渣中黃酮苷元含量[J].中國藥學雜志,2005(2):139-141.

[9] 劉娟,楊艷麗.HPLC 法測定沙棘不同部位槲皮素和異鼠李素的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2010(6):16-17.

Extraction and Purification of Total Flavones from Leaves ofFructushippophae

AN Le1, YU Chang-zhi2, GUO Xiao-na2*

(1. The Fifth Teaching Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang 830011; 2. The First Teaching Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang 830054)

Abstract[Objective] To develop a method for extraction and purification of total flavones from leaves of Fructus hippophae. [Method] With HPLC peak area of major chemical compounds as the index, orthogonal test design was designed. Effects of extraction temperature, solid-liquid ratio and ethanol concentration on the extraction rate of flavones of F. hippophae were researched. [Result] The optimal extraction condition was A3B2C2, which was 60 ℃ extraction temperature, 1∶10 (g∶mL) solid-liquid ratio, 60% ethanol concentration, 60 Hz extraction power, 30 min extraction time and 2 extraction times. [Conclusion] This method is easy control and has high extraction rate of flavones, which provides the basis for extraction and detection of flavones from leaves of F. hippophae.

Key wordsFructus hippophae; Total flavones; Extraction

作者簡介安樂(1987- )，女，回族，新疆烏魯木齊人，藥師，從事中藥新劑型研究。*通訊作者，藥師，碩士，從事藥物新劑型研究。

收稿日期2016-03-08

中圖分類號S 789

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)11-154-02