藍(lán)必忠，黃紅燕，黃景灘，湯慶坤，賈雪峰，黃勝，李安華，陳枝，黃旭華

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站，南寧市 530007）

桑尺蠖微粒子病對家蠶的交叉?zhèn)魅拘哉{(diào)查

藍(lán)必忠，黃紅燕，黃景灘，湯慶坤，賈雪峰，黃勝，李安華，陳枝，黃旭華

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站，南寧市 530007）

桑尺蠖是桑園常見的害蟲，也是傳播病原的主要昆蟲之一。在廣西蠶區(qū)調(diào)查了桑尺蠖微粒子病對家蠶的交叉?zhèn)魅拘?。調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)桑尺蠖幼蟲微粒子病自然感染率為0.54%；從桑尺蠖體內(nèi)分離獲得4株微孢子蟲，編號分別為PaBM3、PaBM4、PaBM5和PaBM6，光學(xué)顯微鏡下觀察PaBM3、PaBM5和PaBM6均為長卵圓形，與家蠶微孢子蟲（Nb）存在明顯差異；PaBM4為卵圓形，與Nb相似。通過生物試驗測定，發(fā)現(xiàn)PaBM4微孢子蟲對蟻蠶的半數(shù)感染濃度（IC50）為2.49×105個/mL，是Nb的4.64倍，說明其對家蠶也具有較強的食下感染力，而其對家蠶沒有胚種傳染性；PaBM3、PaBM5和PaBM6三種微孢子蟲對家蠶均無感染力。因此，桑尺蠖微粒子病發(fā)生情況復(fù)雜，潛在對家蠶有交叉?zhèn)魅镜娘L(fēng)險，蠶種生產(chǎn)需要采取措施防控桑尺蠖的危害。

桑尺蠖；家蠶；微粒子病；交叉?zhèn)魅拘?/p>

微孢子蟲是一種嗜昆蟲的病原微生物，據(jù)記載幾乎所有昆蟲物種都有被微孢子蟲感染的情況，部分昆蟲還受到1種以上微孢子蟲感染[1]。根據(jù)眾多研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)微孢子蟲在昆蟲間還具有交叉?zhèn)魅粳F(xiàn)象，而野外昆蟲微孢子蟲對家蠶交叉?zhèn)魅揪褪且l(fā)家蠶微粒子病的重要方式[2]，很多研究者為預(yù)防這種交叉?zhèn)魅拘缘陌l(fā)生，對很多科昆蟲微孢子蟲進(jìn)行了深入調(diào)查。桑尺蠖是一種常見的桑園害蟲，其攜帶的微孢子蟲也可能存在對家蠶交叉?zhèn)魅拘?，梅玲玲等[3]在浙江蠶區(qū)的桑尺蠖體內(nèi)收集得到1株微孢子蟲，發(fā)現(xiàn)該微孢子蟲對家蠶無致病性，以孢子濃度為6×108個/mL給家蠶添食，蠶體發(fā)育依然正常，未檢測出微孢子蟲。沈中元等[4]也從桑尺蠖體內(nèi)分離得到一株微孢子蟲，調(diào)查發(fā)現(xiàn)該微孢子蟲不但能感染寄生家蠶，導(dǎo)致蠶兒發(fā)病，且能引起家蠶胚種傳染，而且在蠶體內(nèi)繼代后，對家蠶胚種傳染率有增加的趨勢，對蠶種生產(chǎn)造成嚴(yán)重影響；黃旭華等[5-7]在廣西蠶區(qū)初步調(diào)查了桑尺蠖對家蠶的交叉?zhèn)魅拘?，發(fā)現(xiàn)桑尺蠖微粒子病自然感染率為3.74%，還從桑尺蠖體內(nèi)分離得到2株微孢子蟲（PaBMⅠ和PaBMⅡ），調(diào)查發(fā)現(xiàn)PaBMⅠ和PaBMⅡ微孢子蟲對家蠶均具有一定的食下傳染力，但均沒有胚種傳染性。

為了更加充分了解廣西蠶區(qū)桑尺蠖微粒子病對家蠶的交叉?zhèn)魅拘?，本文選擇在家蠶母種、原種生產(chǎn)應(yīng)用的桑園內(nèi)調(diào)查桑尺蠖微粒子病自然感染率，以及桑尺蠖微孢子蟲對家蠶的致病性，以期為控制野外昆蟲微粒子病對家蠶交叉?zhèn)魅咎峁┮罁?jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試微孢子蟲的來源和純化 從廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站武鳴基地桑園、石埠桑園和站內(nèi)桑園捕捉的桑尺蠖幼蟲體內(nèi)分離得到的4株微孢子蟲，暫命名為PaBM3、PaBM4、PaBM5和PaBM6；家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis，簡稱Nb）由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站蠶病研究室提供。參照文獻(xiàn)[3]的方法，對PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子進(jìn)行提取、純化。

1.1.2 供試家蠶品種 932×芙蓉。

1.2 方法

1.2.2 桑尺蠖微粒子病發(fā)生率調(diào)查 2015年5月至7月到廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站武鳴基地桑園、石埠桑園和站內(nèi)桑園捕捉的桑尺蠖幼蟲，并采取逐只研磨鏡檢方式進(jìn)行檢驗，調(diào)查桑尺蠖微粒子病自然感染率。

1.2.2 4種微孢子蟲孢子大小及形態(tài)觀測 將純化的PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子液制成臨時標(biāo)本，置600倍相差顯微鏡（OLYMPUS BX51）下觀察，分別用明美顯微數(shù)碼測量分析系統(tǒng)（V1.0）的測微尺測量各種孢子的長軸與短軸，每種孢子樣品均測量30粒孢子。

1.2.3 4種微孢子蟲對家蠶致病性

1.2.3.1 對家蠶的食下感染力測定 將 PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb微孢子蟲孢子液梯度稀釋成108～103個/mL系列稀釋液，分別取各稀釋濃度的孢子液0.1 mL，涂抹于面積為8 cm2的桑葉片，飼喂1區(qū)蟻蠶（30頭），每種處理設(shè)3個重復(fù)。待蟻蠶吃凈帶毒桑葉后，改用經(jīng)過含有效氯濃度為0.5%的漂白粉精溶液浸泡消毒10 min的無毒桑葉飼養(yǎng)至5齡起蠶，對試驗區(qū)的每一頭蠶逐一研磨鏡檢，調(diào)查感染率，以Nb感染組作為對照。用Reed-Muench法計算出半數(shù)感染濃度（IC50）[8]。

1.2.3.2 對家蠶的胚種傳染調(diào)查 分別給2齡起蠶經(jīng)口接種PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6微孢子蟲孢子液（PaBM3、PaBM5和PaBM6濃度為1×108個/mL，PaBM4為1×107個/mL），常規(guī)條件下利用潔凈桑葉飼育至上蔟，并保護至化蛹、化蛾，單蛾制種，單蛾手磨鏡檢，將感染孢子的母蛾所產(chǎn)的卵圈，進(jìn)行卵面消毒、即時浸酸處理、催青，孵化蟻蠶，飼養(yǎng)至3齡起蠶，逐頭鏡檢（包括死卵），計算孢子胚種傳染率，每種微孢子蟲調(diào)查5個卵圈。同時在5齡起蠶添食家蠶微孢子蟲（Nb）孢子液（濃度為1×106個/mL）作為對照[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑尺蠖微粒子病發(fā)病率情況

調(diào)查廣西桑園內(nèi)桑尺蠖微粒子病發(fā)生情況。結(jié)果如表1，在不同地點的桑園內(nèi)調(diào)查都發(fā)現(xiàn)桑尺蠖攜帶微孢子蟲，且存在一定的野外自然感染率。

表1 桑園內(nèi)桑尺蠖微粒子病自然發(fā)生率

2.2 4種微孢子蟲的基本形狀與大小

由表2和圖1可知，PaBM3、PaBM5和PaBM6微孢子蟲孢子呈長卵圓形，與Nb孢子的形狀、大小有明顯差異，3株微孢子蟲間的大小也存在一定差異；PaBM4呈卵圓形，與Nb孢子的形狀相似。各種微孢子蟲孢子折光性強，在普通顯微鏡下觀察呈淡綠色。

表2 各種微孢子蟲的形態(tài)和大小

圖1 PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子的形態(tài)（×600）

2.3 4種桑尺蠖微孢子蟲對家蠶的致病性

2.3.1 對家蠶的半數(shù)感染濃度（IC50） PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb對家蠶的食下感染力如表3，在4種桑尺蠖微孢子蟲中，只有PaBM4對家蠶具有食下感染力，其IC50為2.49×105個/mL，而PaBM3、PaBM5、 PaBM6對家蠶沒有感染力，即使添食高濃度（108個/mL）孢子液，3種孢子也未能感染家蠶；同一時間測定的Nb的IC50是5.36×104個/mL，PaBM4的IC50是Nb的4.64倍，說明PaBM4對家蠶也具有較強的食下感染力，只是稍微比Nb弱一些。

表3 各種微孢子蟲對家蠶的食下傳染力調(diào)查

2.3.2 對家蠶的胚種傳染力 調(diào)查發(fā)現(xiàn)4種桑尺蠖微孢子蟲感染家蠶后，在后代的蠶兒均未檢出孢子，說明各種桑尺蠖微孢子蟲對家蠶沒有胚種傳染力。而家蠶微孢子蟲在卵殼、死卵、蟻蠶和3齡蠶均發(fā)現(xiàn)有孢子，檢出率達(dá)到53.50%，對家蠶具有很強的胚種傳染力。

3 討論

桑尺蠖與家蠶一樣是鱗翅目昆蟲[4]，屬于中等體型昆蟲，繁殖能力極強，嚴(yán)重影響桑園桑葉產(chǎn)量及質(zhì)量，特別是在蠶期，當(dāng)桑園無法噴藥，會造成短期暴發(fā)，如廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站科技人員2008年5月底到武鳴原蠶基地調(diào)查時，發(fā)現(xiàn)桑尺蠖蟲口密度尚小，但到7月中旬再次進(jìn)行調(diào)查時就發(fā)現(xiàn)桑園中桑尺蠖為害大暴發(fā)[5]。如桑園內(nèi)桑尺蠖發(fā)生微粒子病，通過蟲體繁殖將快速擴散微孢子病原，對家蠶有交叉?zhèn)魅镜娘L(fēng)險。

本文試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)在廣西各地桑園內(nèi)的桑尺蠖均具有一定的微粒子病自然感染率，在3個地方收集得到4株感染桑尺蠖的微孢子蟲，從形態(tài)上比較，有3株微孢子蟲（PaBM3、PaBM5和PaBM6）相似，均屬于長卵圓形，但也稍微有一些差異，而且該3株微孢子蟲對家蠶沒有致病性；另外1株微孢子蟲（PaBM4）形態(tài)與家蠶微孢子蟲（Nb）相似，屬于卵圓形，而且對家蠶具有較強的食下感染力，但沒有胚胎傳染性。根據(jù)初步分析認(rèn)為PaBM3、PaBM5和PaBM6等3株微孢子蟲，可能是桑尺蠖微孢子蟲的原始種；而PaBM4微孢子蟲很可能原來就是由家蠶微孢子蟲感染給桑尺蠖的。PaBM3、PaBM5和PaBM6是否是同一株微孢子蟲？PaBM4是否是一株家蠶微粒子孢子，有待對各類微孢子蟲進(jìn)行分子遺傳學(xué)研究才能夠得到確切結(jié)論。

綜上所述，廣西桑園桑尺蠖攜帶的微孢子蟲分布復(fù)雜，存在對家蠶交叉?zhèn)魅镜娘L(fēng)險，在蠶種生產(chǎn)中應(yīng)引起足夠重視，并加強防范。

［1］蒲蟄龍.昆蟲病理學(xué)[M].廣州：廣東科技出版社，1992，405 -464.

［2］鄭祥明，楊瓊，方定堅，等.廣東省昆蟲微孢子蟲資源調(diào)查及交叉感染的研究[J].蠶業(yè)科學(xué)，2003，29（4）：380-383.

［3］梅玲玲，金偉.家蠶微孢子蟲和桑尺蠖微孢子蟲的研究[J].蠶業(yè)科學(xué)1989，15:135-138.

［4］沈中元，徐莉，劉挺，等.桑尺蠖和絲棉木金星尺蠖的微孢子蟲對家蠶病原性和胚種傳染性研究[J].蠶業(yè)科學(xué)，1996，22（1）：36-41.

［5］黃旭華，朱方容，劉吉平，等.廣西桑尺蠖微孢子蟲的初步研究[C].中國蠶學(xué)會桑樹病蟲害防治學(xué)術(shù)研討會論文集，2008：165-170.

［6］黃旭華，潘志新，朱方容，等.廣西野外昆蟲微孢子蟲對家蠶交叉感染情況調(diào)查[J].廣西蠶業(yè)，2010，47（4）：15-20.

［7］黃旭華，潘志新，朱方容，等.不同來源的昆蟲微孢子蟲對家蠶的感染力與體外發(fā)芽率調(diào)查[J].蠶業(yè)科學(xué)，2011，37（1）：138-141.

［8］浙江大學(xué).家蠶病理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000：242-243.

［9］黃旭華，朱方容，劉吉平，等.廣西菜粉蝶微孢子蟲對家蠶的病原性研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，40（4）：415-419.

2016年全區(qū)蠶種生產(chǎn)形勢分析暨產(chǎn)銷交流會在南寧召開

2016年2月29日下午，廣西蠶種業(yè)協(xié)會在南寧召開2016年全區(qū)蠶種生產(chǎn)形勢分析暨產(chǎn)銷交流會。自治區(qū)農(nóng)業(yè)廳經(jīng)作處吳孝文副處長、廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)及全區(qū)24家蠶種生產(chǎn)會員單位代表共39人參加了會議。

廣西蠶種業(yè)協(xié)會潘志新理事長在會上作2015年協(xié)會工作總結(jié)。會議肯定了協(xié)會及全區(qū)各蠶種生產(chǎn)單位相關(guān)蠶業(yè)工作者去年一年來的工作成績，并結(jié)合2015年的生產(chǎn)發(fā)放情況和當(dāng)前整個行業(yè)的生產(chǎn)形勢，對2016年我區(qū)蠶種生產(chǎn)總體形勢作出預(yù)測分析。潘志新理事長在會上指出，去年受全球經(jīng)濟下滑影響，蠶繭價格持續(xù)走低，蠶農(nóng)積極性受到打擊，繭絲綢行業(yè)面臨著嚴(yán)峻考驗，今年隨著各級黨委政府重視和國家一路一帶經(jīng)濟政策的推行，再加上外圍經(jīng)濟逐步復(fù)蘇和我國經(jīng)濟繼續(xù)保持持續(xù)、健康、穩(wěn)定的增長，預(yù)計2016年干繭、生絲價格從歷史高位回調(diào)震蕩加固后會再次走高。蠶種生產(chǎn)單位應(yīng)該樹立信心，共同維護市場穩(wěn)定，加強生產(chǎn)管理，保障全區(qū)蠶種生產(chǎn)安全和足量供應(yīng)。

會議還就今年上半年全區(qū)蠶種生產(chǎn)計劃、指導(dǎo)價格、質(zhì)量保障，蠶種場設(shè)施設(shè)備更新和蠶種市場管理等事項進(jìn)行了商討，達(dá)成共識。

最后，會議對2016年全區(qū)蠶種質(zhì)量評比獲獎單位進(jìn)行了頒獎。其中，有3家蠶種場獲得一等獎，7家蠶種場獲得二等獎，13家蠶種場獲得三等獎。

（廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站 蘇林）

S884.21；

A；

1006-1657（2016）01-0012-4

2016-01-05；

2016-2-20

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目（No.桂科重14121002-4-2）；國家自然科學(xué)基金項目（No.31560048）；廣西農(nóng)業(yè)重點科技計劃項目（No.201508）。

信息］藍(lán)必忠（1985—），男，本科，農(nóng)藝師，從事栽桑養(yǎng)蠶與桑蠶良種繁育推廣工作。E-mail:longbishan1@163.com

信息］黃旭華（1978—），男，碩士研究生，高級農(nóng)藝師。E-mail:40304713@qq.com