王倩 李從鑄 朱彥

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%。發(fā)達(dá)國家中發(fā)病率居女性生殖道惡性腫瘤首位，死亡率居第二位。多見于老年婦女，高發(fā)年齡為50～60歲，年輕患者有增多趨勢。因此尋找新的評(píng)價(jià)腫瘤惡性程度及判斷預(yù)后的指標(biāo)尤為重要，可以指導(dǎo)個(gè)體化治療。PELP1是一個(gè)新的雌激素受體 (estrogen recepter，ER)共激活因子，能調(diào)節(jié)ER的基因組和非基因組途徑的作用，它可以通過激活Src/MAPK通路而促進(jìn)細(xì)胞的增殖［1］，激活PI3K/Akt通路而抑制細(xì)胞的凋亡［2］。另外，PELP1通過非基因組功能參與細(xì)胞的分化、生存和凋亡。在乳腺癌、卵巢癌等多種激素相關(guān)的腫瘤中，PELP1的研究較多［3－6］，這些研究發(fā)現(xiàn)其除了與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等相關(guān)外，還在腫瘤的激素治療耐藥性中有意義。但PELP1在子宮內(nèi)膜癌中的相關(guān)研究較少［7］。

資料和方法

一、標(biāo)本來源

選取汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院1999年7月至2009年4月開腹手術(shù)并經(jīng)術(shù)后病理確診為子宮內(nèi)膜癌患者76例，其中有1例為透明細(xì)胞癌，其余均為子宮內(nèi)膜樣腺癌。其中取腹水送檢73例。72例行ER、孕激素受體 (progestrone recepter，PR)檢測 (結(jié)果來自術(shù)后病理資料)。49例行腹膜后淋巴結(jié)清掃?；颊吣挲g36～71歲，平均年齡53歲。所有患者術(shù)前均無放化療及激素治療史。病理診斷均經(jīng)HE染色及病理科專家復(fù)核。

二、主要試劑

兔抗人PELP1單克隆抗體 (IHC-00013)購自美國Bethyl Laboratories公司。鼠抗人Ki67單克隆抗體 (M-0350)購自上海長島生物技術(shù)有限公司。二步法免疫組化檢測試劑盒 (PV-9000)購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

三、方法

所有標(biāo)本均經(jīng)過常規(guī)福爾馬林固定和石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，進(jìn)行常規(guī)HE染色和免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)操作按照二步法試劑盒說明書進(jìn)行?？乖迯?fù)采用微波修復(fù)的方法，抗原修復(fù)液選用檸檬酸鹽溶液 (PH6.0，0.01M)。一抗孵育條件選擇4°C過夜 (時(shí)間14～16 h)。一抗稀釋度PELP1為1:150、Ki67為1:50。以PBS代替一抗染色作為空白對(duì)照。

四、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

采用臨床和病理資料雙盲條件下、由兩名病理學(xué)專家進(jìn)行讀片。PELP1和Ki67蛋白陽性表達(dá)均為細(xì)胞核內(nèi)可見棕黃色顆粒。PELP1評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:每張染色切片中陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)占所有腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分比計(jì)數(shù)，分為兩組:＜50%為弱陽性，＞50%為強(qiáng)陽性。

Ki67評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:每張染色切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野 (×400)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞的百分比，分為兩組:＜25%為弱陽性，＞25%為強(qiáng)陽性。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

PELP1和Ki67蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與各臨床病理因素的分析采用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率法。PELP1和Ki67的相關(guān)性研究采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05(雙側(cè))。

結(jié) 果

一、PELP1和Ki67蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)

PELP1和Ki67在子宮內(nèi)膜癌中均呈陽性表達(dá)，但強(qiáng)弱程度不同，定位于癌細(xì)胞核。

二、PELP1蛋白表達(dá)與各子宮內(nèi)膜癌臨床病理因素之間的關(guān)系

PELP1蛋白的表達(dá)在不同分化程度的子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)強(qiáng)度之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，G1組強(qiáng)度＜G2、G3組 (P＜0.01)，但G2、G3組之間無差異。在不同手術(shù)－病理分期的子宮內(nèi)膜癌中，PELP1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度具有差異性，早期組 (Ⅰ期)強(qiáng)度低于中、晚期組 (Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期)(P＜0.01)。不同肌層浸潤深度的子宮內(nèi)膜癌患者中，PELP1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度不同 (P＜0.01)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，PELP1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者強(qiáng) (P＜0.05)。另外，PELP1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度還與雙側(cè)附件是否受累、腹水是否找到癌細(xì)胞有關(guān)。但與宮頸管是否受累、ER、PR的表達(dá)之間均無關(guān)，見表1。

Ki67蛋白的表達(dá)強(qiáng)度在不同分化程度之間具有差異 (P＜0.01)。早期者 (Ⅰ期)Ki67強(qiáng)度低于中、晚期者 (Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期) (P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ki67的表達(dá)強(qiáng)度比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者強(qiáng)，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)，見表1。

表1 PELP1和Ki67蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌各臨床參數(shù)之間的關(guān)系

表2 子宮內(nèi)膜癌中PELP1蛋白和Ki67蛋白之間的關(guān)系 (總例數(shù)n=76)

三、PELP1蛋白和Ki67表達(dá)之間的相關(guān)性

在子宮內(nèi)膜癌中，PELP1蛋白與Ki67蛋白的表達(dá)呈正相關(guān) (P＜0.05)，相關(guān)系數(shù)r=0.244。見表2。

討 論

一、PELP1和Ki67與子宮內(nèi)膜癌

由于人類壽命延長和肥胖人群增多，近20年間子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率居高不下，而且死亡率呈明顯上升趨勢。但至今尚無判斷子宮內(nèi)膜癌療效和預(yù)后的可靠指標(biāo)。PELP1蛋白作為一種新的ER共激活因子，其在腫瘤形成過程中起到原癌基因的作用，在多種激素相關(guān)性腫瘤中表達(dá)異常［4］，在子宮內(nèi)膜癌中，PELP1亦出現(xiàn)異常定位和表達(dá)［8］，該研究證實(shí)，PELP1可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和進(jìn)展中起重要作用［9］。

Ki67是一種細(xì)胞核相關(guān)抗原，是目前臨床上廣泛應(yīng)用的檢測細(xì)胞增殖的標(biāo)志。Ki67的檢測對(duì)于判斷腫瘤的惡性程度、進(jìn)展及其生物學(xué)行為具有重要的意義。有研究報(bào)道，子宮內(nèi)膜隨卵巢激素的變化而發(fā)生周期性的變化，在一個(gè)生理周期中，Ki67在增生期子宮內(nèi)膜中有表達(dá)，而在分泌期內(nèi)膜中表達(dá)則明顯減少［10］。

Ki67在除了G0期和G1期之外的所有細(xì)胞周期中都有表達(dá)，定位在細(xì)胞核，與細(xì)胞的合成代謝有關(guān)，其表達(dá)的高低反映了細(xì)胞增殖的程度。

二、PELP1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征之間的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)，PELP1蛋白定位于腫瘤細(xì)胞核中，與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中不一致［8］。而關(guān)于PELP1蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌各臨床病理特征之間的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測PELP1蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，結(jié)果顯示，其表達(dá)強(qiáng)度在高分化子宮內(nèi)膜癌中明顯低于中低分化組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)，早期患者PELP1的表達(dá)強(qiáng)度低于晚期患者，其差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)，另外在深肌層浸潤的患者中，PELP1的表達(dá)量高于淺肌層者 (P＜0.01)，上述結(jié)果說明，PELP1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，腫瘤的進(jìn)展越快、惡性程度越高，PELP1的表達(dá)量越高，提示PELP1可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌患者病情進(jìn)展的指標(biāo)。

本研究亦顯示，對(duì)于宮頸管受累、雙附件轉(zhuǎn)移及腹水陽性的患者，PELP1的表達(dá)明顯高于陰性患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，而臨床病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的主要因素，由此可見，PELP1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，其表達(dá)量越高，預(yù)后越差，提示PELP1可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的指標(biāo)。

PELP1作為一種ER共激活因子，調(diào)節(jié)ER的基因組和非基因組途徑［11－12］，其在正常子宮內(nèi)膜的周期性變化中起重要作用，也與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。但本研究發(fā)現(xiàn)PELP1的表達(dá)強(qiáng)度與在ER、PR的不同表達(dá)之間無差異，該結(jié)果可能與選取的樣本量過少有關(guān)。

三、Ki67的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征之間的關(guān)系

本研究顯示，隨著子宮內(nèi)膜癌分化程度的降低、手術(shù)－病理分期的進(jìn)展，Ki67的表達(dá)強(qiáng)度增加。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ki67的表達(dá)強(qiáng)度高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，表明Ki67可能成為評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜癌增殖、分化及判斷預(yù)后的指標(biāo)。本研究結(jié)果與多項(xiàng)研究結(jié)果一致［13－15］。

四、PELP1和Ki67蛋白的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌中的相互關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，PELP1和Ki67蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的的表達(dá)呈正相關(guān)，可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和進(jìn)展中起協(xié)同作用，但其共同作用的機(jī)制尚不明確，由于本實(shí)驗(yàn)選取的病例數(shù)較少，結(jié)果可能有所偏倚，尚有待進(jìn)一步大樣本的研究證實(shí)。

聯(lián)合檢測PELP1和Ki67兩種蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為及預(yù)后的指標(biāo)，且可能對(duì)個(gè)體化治療提供依據(jù)。另外二者具有協(xié)調(diào)作用，如能同時(shí)對(duì)其進(jìn)行基因水平的干預(yù)，可能對(duì)腫瘤的生物學(xué)行為具有更強(qiáng)的抑制作用，從而顯著提高子宮內(nèi)膜癌的臨床治療效果。

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