李洪澤，鄭永華,2，胡文達(dá)，唐洪玉,2，周　夢，黎學(xué)練

(1.西南大學(xué)動物科技學(xué)院水產(chǎn)系，重慶北碚　400715；2.西南大學(xué)淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室、水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級重點實驗室，重慶北碚　400715；3.開縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，重慶開縣　405400)

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鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚GOT和GPT活性的影響

李洪澤1，鄭永華1,2，胡文達(dá)1，唐洪玉1,2，周夢1，黎學(xué)練3

(1.西南大學(xué)動物科技學(xué)院水產(chǎn)系，重慶北碚400715；2.西南大學(xué)淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室、水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級重點實驗室，重慶北碚400715；3.開縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，重慶開縣405400)

摘要：采用一次性胸腔注射法，研究了鹽酸環(huán)丙沙星對(30±2.3) g/尾的厚頜魴(Megalobrama pellegrini)幼魚谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性的影響。結(jié)果顯示：隨著給藥時間的延長，厚頜魴的肝臟、肌肉和鰓組織GOT活性呈現(xiàn)不規(guī)則變化；隨著給藥濃度的增加，則出現(xiàn)先升后降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢；隨著給藥時間的延長，試驗前期肝臟GPT活性基本保持不變，試驗中期以后則出現(xiàn)先升后降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，肌肉和鰓組織GPT活性呈現(xiàn)先降后升再降的趨勢；隨著給藥濃度的增加，總體則基本呈現(xiàn)不規(guī)則變化；鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚各組織GOT和GPT活性大小依次為肝臟>鰓>肌肉；通過GOT活性變化可判斷，肝臟、肌肉和鰓組織的休藥期分別為29、27和32 d；通過GPT活性變化可判斷，肝臟、肌肉和鰓組織的休藥期分別為37、28和34 d。

關(guān)鍵詞：鹽酸環(huán)丙沙星；厚頜魴(Megalobrama pellegrini)；GOT；GPT；休藥期

鹽酸環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin hydrochloride)為第三代喹諾酮類抗菌藥品，具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、耐藥性低、藥效較強(qiáng)等特點，對大部分革蘭氏陰性菌有明顯的抑制作用，但是近年來隨著在臨床上的廣泛應(yīng)用，關(guān)于其不良反應(yīng)報道也隨之增多[1-3]。為了解鹽酸環(huán)丙沙星對魚類的影響，試驗以厚頜魴(Megalobramapellegrini)幼魚為研究對象，探討了鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肝臟、肌肉和鰓組織中的谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性的影響，從而為喹諾酮類藥物的安全用藥、毒理學(xué)研究提供基礎(chǔ)資料和科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗對象

健康厚頜魴幼魚購自重慶東平水產(chǎn)養(yǎng)殖公司，平均質(zhì)量為(30±2.3) g。試驗前，采用1.5%食鹽消毒5 min，消毒后，放于水箱中暫養(yǎng)7 d，暫養(yǎng)期間正常喂食，選擇正常健康、無病無傷、規(guī)格一致的個體進(jìn)行正式試驗。

1.2試驗材料

水缸(圓柱形，規(guī)格為0.192 9 m3)、玻璃勻漿器、電子天平(0.0001 g)、高速冷凍離心機(jī)、紫外可見分光光度計、冰箱、解剖工具、注射器。

生理鹽水(0.86%)，魚血安(鹽酸環(huán)丙沙星，凈含量200 g，規(guī)格10%，休藥期為500 ℃·d)購自北京大北農(nóng)動物保健科技有限責(zé)任公司，考馬斯亮藍(lán)(G250)、GOT和GPT試劑盒均購自南京建成生物科技研究所。

1.3試驗方法

將鹽酸環(huán)丙沙星粉劑溶解于去離子雙蒸水中，制成混懸液，然后根據(jù)需要的濃度配置。經(jīng)過預(yù)實驗，設(shè)置6個濃度組，濃度分別為0、50、150、250、350和450 mg/kg魚體重，0 mg/kg即為對照組，每組2個重復(fù)，每個重復(fù)20尾，2 d換水1次。試驗水溫為(25±1.7) ℃。試驗期間，每天早晚各投喂1次，試驗時采用一次性胸腔注射，注射劑量為0.2 mL/尾，對照組注射0.2 mL的生理鹽水。

1.4樣品采集與處理

在給藥后的7、14、21、28和35 d采樣，分別從每組取出2尾厚頜魴幼魚進(jìn)行解剖；解剖時，取出魚的鰓、肌肉和肝臟組織，滴加生理鹽水，整個解剖過程在冰盤上進(jìn)行以保持樣品的鮮活；稱重時，用預(yù)冷的去離子雙蒸水沖洗干凈后，用濾紙吸干再稱重。

1.5酶活性的測定

GOT、GPT酶活性嚴(yán)格按照南京建成試劑盒說明書的操作方法進(jìn)行測定，組織蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測定。

1.6休藥期的判定依據(jù)

本試驗休藥期的判定依據(jù)為，當(dāng)其他濃度組的酶活性含量與對照組酶活性含量的平均值剛好達(dá)到同一水平時，即判定為此濃度時的休藥期。

1.7數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理采用Excel2003軟件，單因素方差分析采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，顯著水平為P<0.05，符號不同時，表示差異顯著；相同時表示差異不顯著。

2結(jié)果與分析

2.1鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肝臟組織酶活性的影響

鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肝臟GOT活性的影響見表1。從表1中可看出，在35 d的試驗期內(nèi)，隨著時間的延長，各濃度組基本呈現(xiàn)先降低后升高再降低，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，150 mg/kg和250 mg/kg組，最大值出現(xiàn)在第7天(P<0.05)，其他組則均出現(xiàn)在第21天(P<0.05)；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，第14、28和35天時，酶活性變化不明顯，最大值均與對照組差異不顯著(P>0.05)；第7天，酶活性出現(xiàn)先升后降的趨勢，最大值出現(xiàn)在150 mg/kg組(P<0.05)；第21d時，則出現(xiàn)先升后降再升的趨勢，最大值出現(xiàn)在450 mg/kg組(P<0.05)。

表1　鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肝臟GOT活性的影響

鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肝臟GPT活性的影響見表2，從表2中可知，在35 d的試驗期內(nèi)，隨著時間的延長，除第50 mg/kg組外，肝臟GPT活性呈現(xiàn)先升后降的趨勢，各濃度組酶活性的最大值均出現(xiàn)在第21天，且與對照組差異顯著(P<0.05)；在0～450 mg/kg濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，肝臟GPT活性也基本呈現(xiàn)先降后升的趨勢，第7天時，最大值出現(xiàn)在50 mg/kg組(P>0.05)；第14和21 d時，最大值則分別出現(xiàn)在450 mg/kg和350 mg/kg組(P<0.05)；在第28和35天時，最大值均出現(xiàn)在50 mg/kg組(P<0.05)。

表2　鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肝臟GPT活性的影響

2.2鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肌肉酶活性的影響

從表3可知，在35 d試驗期內(nèi)，隨著試驗時間的延長，厚頜魴幼魚肌肉GOT活性出現(xiàn)先降后趨于穩(wěn)定的趨勢，在350 mg/kg試驗組中，最大值出現(xiàn)在第21 d，其他各組則出現(xiàn)在第7天，其均與對照組差異顯著(P<0.05)；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨著試驗濃度的增加，各濃度組基本均出現(xiàn)先升后降再升的趨勢，第7和14 d時，最大值出現(xiàn)在250 mg/kg 組(P<0.05)；第21天時，最大值出現(xiàn)在350 mg/kg組(P<0.05)；第28和35天時，則分別出現(xiàn)在150 mg/kg組(P>0.05)和450 mg/kg組(P>0.05)。

表3　鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚肌肉GOT活性的影響

從表4可知，在試驗期間，隨著時間的延長，350 mg/kg組厚頜魴幼魚肌肉GPT活性出現(xiàn)先升后降的趨勢，其他各濃度組則出現(xiàn)先降后升再降，然后趨于平穩(wěn)的趨勢，最大值均出現(xiàn)在第21天，且均與對照組差異顯著(P<0.05)；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，第7、14和35天時，基本出現(xiàn)先升后降的趨勢，最大值分別出現(xiàn)在150 mg/kg組(P<0.05)、350 mg/kg組(P<0.05)和450 mg/kg組(P>0.05)；第21天時，出現(xiàn)先升后降再升的趨勢，最大值出現(xiàn)在450 mg/kg組(P<0.05)；第28天時，則出現(xiàn)先降后增的趨勢，最大值出現(xiàn)在450 mg/kg組(P>0.05)。

表4　鹽酸環(huán)丙沙星鈉對厚頜魴幼魚肌肉GPT活性

2.3鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚鰓組織酶活性的影響

從表5可知，在試驗期間，厚頜魴幼魚鰓組織GOT活性隨著時間的延長，350 mg/kg組，出現(xiàn)先降后升再降，然后再升的趨勢，其他各濃度組則出現(xiàn)先降后升再降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，最大值均出現(xiàn)在第7天(P<0.05)；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨著濃度的升高，在第7天和第28天時，出現(xiàn)先降后升的趨勢，最大值分別出現(xiàn)在450 mg/kg組(P<0.05)和50 mg/kg組(P<0.05)；第14、21和35d時，則出現(xiàn)先升后降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，最大值分別出現(xiàn)在250 mg/kg組(P<0.05)、150 mg/kg組(P<0.05)和350 mg/kg組(P>0.05)。

表5　鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚鰓組織GOT活性的影響

從表6中可知，在試驗期間，隨著時間的延長，250 mg/kg組，鰓組織GPT活性變化出現(xiàn)先降后升，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，其他各濃度組則出現(xiàn)先降后升再降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，50、350和450 mg/kg最大值均出現(xiàn)在第28天(P<0.05)，150和250 mg/kg組則分別出現(xiàn)在第7天(P<0.05)和21 d(P>0.05)；在0～450 mg/kg范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的升高，第7和35天，出現(xiàn)先升后降在升的趨勢，最大值出現(xiàn)在150 mg/kg組(P<0.05)和450 mg/kg組(P<0.05)；第14天和第28天，則出現(xiàn)先降低后升高的趨勢，最大值出現(xiàn)在450 mg/kg組(P<0.05)和50 mg/kg組(P<0.05)；第21天時，出現(xiàn)先升后降的趨勢，最大值出現(xiàn)在150 mg/kg組(P<0.05)。

表6　鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚鰓組織GPT活性的影響

3討論

GPT和GOT是廣泛存在于動物線粒體中的重要的氨基酸轉(zhuǎn)氨酶[4]，在動物機(jī)體代謝中扮演著重要的角色。臨床試驗中，經(jīng)常通過測定轉(zhuǎn)氨酶的活性變化來判斷組織機(jī)體受損狀況，其中在肝功能檢測時是不可或缺的重要指標(biāo)。肝臟組織中的GOT、GPT活性升高，表明肝功能在恢復(fù)增強(qiáng)，在正常范圍情況下，肝細(xì)胞中GOT、GPT相對越高，表明肝細(xì)胞受損程度越低[5]。

3.1鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚各組織GOT活性的影響

GOT廣泛分布于各組織器官，與組織細(xì)胞進(jìn)行旺盛的氨基酸代謝相適應(yīng)。細(xì)胞質(zhì)和線粒體中的谷草轉(zhuǎn)氨酶是保證蘋果酸穿梭作用的重要酶系之一，其在體內(nèi)具有極其重要的生理功能[5]。

從試驗結(jié)果可知，隨著給藥時間的延長，肝臟、肌肉和鰓組織酶活性呈現(xiàn)先降后升再降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢。此結(jié)果與黃光中等[6]、王媛等[7]和蔡深文等[8]研究結(jié)果中的隨著試驗時間的延長而出現(xiàn)先升后降的結(jié)果不相符，造成此類原因，最主要的可能是本試驗采用注射的給藥方式，試驗前期由于注射使魚類都會產(chǎn)生一定的應(yīng)激性，使得酶活性降低；試驗中期則是由于魚類對注射藥物的應(yīng)激性恢復(fù)和藥物產(chǎn)生藥效的影響，而出現(xiàn)上升的趨勢；試驗后期則是由于藥物的藥效消失，魚類恢復(fù)正常，酶活性趨于穩(wěn)定的趨勢。在試驗期內(nèi)，隨著給藥濃度的增加，肝臟、肌肉和鰓組織GOT活性變化，基本出現(xiàn)先升后降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，個別濃度組則出現(xiàn)不規(guī)則變化。此結(jié)果與黃光中等[6]和王丙蓮等[9]的研究結(jié)果基本一致，與王媛等[7]和蔡深文等[8]的結(jié)果不一致，造成此類原因可能是由于給藥濃度設(shè)置造成的，本試驗的濃度設(shè)置梯度較大，而王媛和蔡深文的濃度設(shè)置要相對較小。

根據(jù)試驗數(shù)據(jù)分析還可以得出，注射鹽酸環(huán)丙沙星后厚頜魴幼魚組織GOT活性大小依次為肝臟>鰓>肌肉；肝臟、肌肉和鰓組織的休藥期分別為29、27和32 d。此結(jié)果與此藥品標(biāo)注的500℃·d相比稍大。

3.2鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚各組織GPT活性的影響

正常情況下，動物體內(nèi)的GPT主要存在于各組織細(xì)胞中，只有極少量釋放入血液中，所以血清中此酶活力很低。當(dāng)這些組織產(chǎn)生病變時，血清中GPT活力就會顯著增高[5]。鄭永華等[10]，Nemcs等[11]和汝少國[12]的研究表明，隨著環(huán)境脅迫的增大，肝臟中 GPT和 GOT 活性逐漸降低，血漿中的則顯著升高；盧敬讓[13]認(rèn)為，隨著鎘濃度的增加，中華絨螯蟹血清中GPT活性則增強(qiáng)；蔡深文等[9]利用乳酸諾氟沙星處理草魚，隨著濃度的增大和時間的延長，GPT活性均無顯著差異；林立等[14]用丙溴磷對家兔進(jìn)行處理，家兔肝臟GPT和GOT活力均顯著高于丙酮對照組。

根據(jù)試驗數(shù)據(jù)分析可以看出，在試驗期內(nèi)，隨著給藥時間的延長，試驗前期肝臟GPT活性基本保持不變，試驗中期以后則出現(xiàn)先升后降，然后趨于穩(wěn)定的趨勢，最大值則基本出現(xiàn)在第21天，肌肉和鰓組織GPT活性則基本呈現(xiàn)先降后升再降的趨勢，最大值則基本出現(xiàn)在第21和28天；在試驗期內(nèi)，隨著給藥濃度的增加，總體則基本呈現(xiàn)不規(guī)則變化。此結(jié)果與朱仙珍等[15]的結(jié)果基本一致。與文獻(xiàn)[8,10-13]的研究結(jié)果不一致，造成此類原因，可能與本試驗采用注射的給藥方式和濃度設(shè)置有關(guān)，采用注射的方式可能給魚造成傷害，從而使酶活性首先出現(xiàn)降低的趨勢，隨著時間的延長，注射造成的傷害逐漸好轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)而變成藥物的作用，從而出現(xiàn)升高的趨勢，上升到一定的高度，由于藥物藥效的下降，則出現(xiàn)下降直至穩(wěn)定的趨勢；鄭永華、NEMCS、汝少國和蔡深文等研究結(jié)果濃度設(shè)置范圍較小，本試驗濃度設(shè)置范圍較大，基本包括一個周期，而其他研究者的研究則主要為前期。

從試驗數(shù)據(jù)中，還可以得出，鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚組織GPT活性大小依次為肝臟>鰓>肌肉；肝臟、肌肉和鰓組織的休藥期分別為37、28和34 d。此結(jié)果與此藥品標(biāo)注的500度日相比稍大。

4小結(jié)

采用注射的給藥方式，試驗前期由于注射使魚類都會產(chǎn)生一定的應(yīng)激性，使得酶活性降低；試驗中期則是由于魚類對注射藥物的應(yīng)激性恢復(fù)和藥物產(chǎn)生藥效的影響，而出現(xiàn)上升的趨勢；試驗后期則是由于藥物的藥效消失，魚類恢復(fù)正常，酶活性趨于穩(wěn)定的趨勢。

根據(jù)試驗數(shù)據(jù)分析顯示，各組織中的GOT活性隨著給藥時間趨向于先降后升再降，之后趨于穩(wěn)定；隨著給藥濃度增加，GOT活性基本趨向于先升后降，之后趨向于穩(wěn)定，個別濃度試驗組則出現(xiàn)不規(guī)則波動。GPT活性變化與GOT活性有所區(qū)別，隨著給藥時間GPT活性在肝臟中變化與肌肉、鰓組織變化有所不同。試驗前期階段，肝臟組織中的GPT活性基本保持不變，試驗中期階段以后呈現(xiàn)先升后降，隨后趨于穩(wěn)定，最大值基本出現(xiàn)在第21天；肌肉與鰓組織中的GPT活性呈現(xiàn)先降后升再降的趨勢，最大值出現(xiàn)在第21天和第28天，隨給藥濃度分組變化呈現(xiàn)不規(guī)則變化。

鹽酸環(huán)丙沙星對厚頜魴幼魚各組織GOT、GPT活性影響大小為：肝臟>鰓>肌肉。根據(jù)GOT活性數(shù)據(jù)變化顯示，厚頜魴幼魚肝臟、肌肉和鰓組織休藥期為29、27和32 d；根據(jù)GOT活性數(shù)據(jù)變化顯示，厚頜魴幼魚肝臟、肌肉和鰓組織休藥期為37、28和34 d。

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(責(zé)任編輯：鄧薇)

The effects of ciprofloxacin hydrochloride on GPT and GOT activity in juveniles of Megalobrama pellegrini

LI Hong-ze1，ZHENG Yong-hua1,2，HU Wen-da1，TANG Hong-yu1,2，ZHOU Meng1，LI Xue-lian3

(1.DepartmentofFisheries，CollegeofAnimalScienceandTechnology，SouthwesternUniversity，Beibei400715，Chongqing，China；2.KeyLaboratoryofFreshwaterfishReproductionandDevelopment，MinistryofEducation，KeyLaboratoryofAquaticScienceofChongqing,SouthwestUniversity，Beibei400715，Chongqing，China；3.FisheriesTechnicalExtensionStateofKaixian，Kaixian405400，Chongqing，China)

Abstract：The effects of ciprofloxacin hydrochloride on GPT and GOT activity in juveniles of Megalobrama pellegrini (30±2.3g) were studied by the method of disposable pleural injection，and the withdrawal period.The results showed that,during the trial period，GOT activity in liver，muscle and gill tissue were changed irregularly with the increment of time；With the increment of the concentration of administration，it decreased after increased firstly，and then tended stabilizing；With the increment of time，in the early test，GPT activity in liver were remained no changes，in the medium test，it increased firstly and then decreased，and stabilized，GPT activity in muscle and gill tissue increased after decreased firstly，and then decreased；With the increment of the concentration of administration，the base irregular changed,the order of,GOT and GPT activity were liver>gill tissue >muscle；according to the changes of GOT activity，the withdrawal period of liver，muscle，gill tissue were 24 d，23 d，27 d respectively； according to the changes of GPT activity，the withdrawal period of liver，muscle，gill tissue were 29 d，27 d，30 d respectively.

Key words：Ciprofloxacin Hydrochloride；Megalobrama pellegrini；GOT；GPT；Withdrawal period.

收稿日期：2015-10-12；

修訂日期：2016-03-26

第一作者簡介：李洪澤(1988-)，男，碩士研究生，研究方向為漁業(yè)生態(tài)與環(huán)境。E-mail：lihz0227@163.com通訊作者：唐洪玉。E-mail:thy1970@163.com

中圖分類號：S948

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1000-6907-(2016)03-0060-06

資助項目：農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(200903048-08)；重慶市科技平臺與基地建設(shè)(專家大院)項目(cstc2013pt-zjdy80004)；重慶市水產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測方法開發(fā)研究項目