王　冰,舒　艷,梁　佳,姚紅兵

(重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科　400014)

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·論著·

IL-6在兒童慢性鼻竇炎中的表達及其意義*

王冰,舒艷,梁佳,姚紅兵△

(重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科400014)

[摘要]目的研究白細胞介素-6(IL-6)在兒童慢性鼻竇炎(CRS)患兒外周血及腺樣體中的表達情況，探討IL-6在CRS患兒發(fā)生、發(fā)展中的作用機制。方法收集CRS伴有腺樣體肥大患兒95例(CRS組)，變應(yīng)性鼻炎伴有腺樣體肥大患兒70例(變應(yīng)性鼻炎組)，單純腺樣體肥大患兒51例(對照組)，采用 ELISA 法檢測3組患兒外周血中IL-6的水平；免疫組織化學染色觀察3組患兒腺樣體組織中IL-6的分布及表達情況。結(jié)果對照組外周血IL-6的水平為(33.6±6.9) pg/mL，變應(yīng)性鼻炎組為(35.9±5.6) pg/mL，CRS組(49.8±8.3) pg/mL，CRS組與變應(yīng)性鼻炎組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；CRS組與對照組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，變應(yīng)性鼻炎組與對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。腺樣體組織中IL-6主要分布在浸潤的炎性細胞、成纖維細胞，少量分布在間質(zhì)，CRS組與變應(yīng)性鼻炎組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，CRS組與對照組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，變應(yīng)性鼻炎組與對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論兒童CRS外周血中及局部組織中IL-6表達均明顯高于不伴CRS的兒童，提示IL-6可能在兒童CRS的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。

[關(guān)鍵詞]鼻竇炎;慢性病;白細胞介素6;兒童

慢性鼻竇炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是發(fā)生于鼻腔及鼻竇黏膜的一種常見的慢性炎癥性疾病，是兒童耳鼻咽喉科的常見病和多發(fā)病。但對于兒童CRS的研究較少，對于兒童CRS的發(fā)病機制至今仍有很多不明確的地方。IL-6是一種調(diào)節(jié)細胞因子，具有多種的免疫調(diào)節(jié)功能。它能促進T細胞及B細胞增殖和活化，并能促進B細胞產(chǎn)生免疫球蛋白，在機體的很多炎性反應(yīng)中都發(fā)揮著重要作用。已有研究證實IL-6在CRS伴鼻息肉患者的鼻竇黏膜中高表達，而且鼻黏膜細胞的IL-6信號傳導通路可能也發(fā)生了變化[1]。本文旨在通過研究IL-6在CRS患兒外周血及局部組織中的表達情況，進一步探討IL-6在兒童CRS發(fā)病過程中的作用機制。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年6月至2013年2月在本科住院的腺樣體肥大患兒216例，其中男91例，女125例，年齡4～9歲。其中伴有CRS的患兒95例(CRS組)，伴有變應(yīng)性鼻炎患兒70例(變應(yīng)性鼻炎組)，單純腺樣體肥大患兒51例(對照組)。3組患兒年齡、性別、體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。所有入選患兒均無支氣管哮喘病史，并排除心、肺、腦、肝、腎等全身系統(tǒng)性疾病及肝炎、結(jié)核等傳染性疾病。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學倫理委員會備案并批準。入選患兒合法監(jiān)護人均簽署臨床研究同意書，入選的所有CRS患兒均不伴有鼻息肉。

1.2方法

1.2.1外周血的采集與處理于手術(shù)當天清晨采取患兒空腹靜脈血液3～5 mL，保存于抗凝管內(nèi)，以1 200 r/min的速度離心標本15 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱，用于后期的細胞因子的測定。

1.2.2腺樣體標本的處理手術(shù)中取患兒整塊的新鮮腺樣體組織標本，立即用4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋備用。

1.2.3ELISA 法檢測患兒血清中IL-6水平采用美國RD公司生產(chǎn)的IL-6 ELISA試劑盒，操作步驟嚴格按照試劑盒說明進行。

1.2.4腺樣體組織中IL-6的表達將腺樣體組織制為厚度為4 μm的石蠟切片。采用SP法對切片進行免疫組織化學染色。以PBS溶液代替一抗作陰性對照。陽性細胞的判定標準為在細胞膜或細胞質(zhì)有環(huán)狀沉淀的棕黃色或棕紅色顆粒狀物質(zhì)。染色結(jié)果參照Form-witz評分方法[2]，采取綜合染色強度及陽性細胞數(shù)兩個方面進行半定量分析，分別評為0～3分。染色強度相同于陰性對照為0分；染色強度較弱，但明顯強于陰性對照為1分；染色清晰為2分；染色強為3分。陽性細胞數(shù)百分比小于10%為0分；在10%～25%為1分；在26%～50%為2分；>50%為3分。根據(jù)兩項指標相加分數(shù)劃為4級：0、1分為“-”；2分為“+”；3、4分為“++”；5、6分為“+++”。“-”和“+”判定為陰性；“++”和“+++”為陽性。

2結(jié)果

2.1外周血中 IL-6水平對照組患兒血清中IL-6水平為(33.6±6.9)pg/mL；變應(yīng)性鼻炎組患兒為(35.9±5.6)pg/mL；CRS組患兒為(49.8±8.3)pg/mL。CRS組與變應(yīng)性鼻炎組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，CRS組與對照組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，變應(yīng)性鼻炎組與對照組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2腺樣體組織中IL-6的表達免疫組織化學染色顯示在CRS組中，IL-6在腺樣體黏膜下浸潤的炎性細胞、成纖維細胞中高表達，細胞間質(zhì)也有少量表達。而在對照組及變應(yīng)性鼻炎組中，在腺樣體組織中只有少量的細胞有IL-6陽性表達。CRS組中腺樣體組織中有62例IL-6陽性表達，而在變應(yīng)性鼻炎組病例中，僅有3例腺樣體組織中IL-6陽性表達。在對照組病例中，也只有2例腺樣體組織中IL-6陽性表達。IL-6在CRS組與變應(yīng)性鼻炎組及對照組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而在變應(yīng)性鼻炎組與對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3討論

IL-6是一種由氨基酸構(gòu)成并可被多種細胞產(chǎn)生的糖蛋白，是一種多功能的細胞因子，它具有多活性、多功能等特點,有著多種不同的生理功能。其中，IL-6具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能,能抑制Th1、Treg細胞的分化[3],是一種具有重要生理病理的多功能和多向性細胞因子，在炎癥、免疫防御及組織損傷中具有重要作用[4]。很多細胞均可產(chǎn)生IL-6，例如單核細胞、血管內(nèi)皮細胞、Th2細胞、成纖維細胞等，還有一些腫瘤細胞也可以產(chǎn)生IL-6。在自然狀態(tài)下，IL-6一般是通過旁分泌和自分泌形式在局部發(fā)揮作用，但在病理狀態(tài)下也可通過內(nèi)分泌形式在全身發(fā)揮作用。目前的研究表明，IL-6與多種炎性疾病有關(guān)，比如風濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘等，在這些炎癥疾病中的高表達，提示IL-6在這些炎性疾病的發(fā)病過程中可能都起著重要作用[5]。

近年來對IL-6在自身免疫性疾病中的免疫調(diào)節(jié)作用的研究得到了很多新的進展。其中IL-6對變應(yīng)性疾病有重要的調(diào)節(jié)作用。比如IL-6在過敏性鼻炎(AR)的發(fā)病機制就起著重要的調(diào)節(jié)作用。有研究證實：Th1/Th2細胞免疫失衡是AR 的重要發(fā)病機制，主要表現(xiàn)為Th2 主導及相關(guān)細胞因子參與的炎癥性疾病[6]。AR的發(fā)生是由IgE介導的，并受多種細胞和細胞因子的調(diào)節(jié)。其中Th2 細胞及其釋放的細胞因子起著重要的作用。而IL-6 為Th2 細胞所釋放的主要細胞因子，主要反映疾病是否處于急性期[7]，對調(diào)節(jié)IgE免疫應(yīng)答具有重要作用。

但是IL-6在炎性反應(yīng)中的作用不是單向的，它具有致炎和抗炎的雙向功能。它的作用與水平有關(guān),當組織中的IL-6水平正常時對機體是有利的,但是當IL-6水平過高就會引起一系列的炎性損害。近年研究發(fā)現(xiàn)：IL-6在呼吸系統(tǒng)炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,這主要表現(xiàn)在IL-6對氣道炎癥的發(fā)生和氣道結(jié)構(gòu)重建的促進作用。CRS也是一種呼吸道疾病,有研究證實IL-6在CRS的鼻腔黏膜中表達升高,同樣IL-6在鼻息肉的炎癥和氣道重建中也有著重要作用[8]。有研究發(fā)現(xiàn)鼻竇炎患者鼻腔灌洗液中IL-6水平增高，而在鼻息肉中IL-6的作用卻存在爭議。Danielsen等[8]曾報道鼻息肉中IL-6水平較正常下鼻甲中的IL-6水平更高，提示IL-6可能促進鼻息肉的發(fā)展。張美麗等[9]研究發(fā)現(xiàn),IL-6存在基因多態(tài)性,且IL-6的某些基因型與CRS易感性有一定的關(guān)系。

兒童CRS的誘因當中，腺樣體肥大是一個重要的病因[10]。由于腺樣體肥大影響患兒鼻腔通氣及引流功能，進而引起兒童CRS。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-6在腺樣體組織中的表達與腺樣體肥大的分級相關(guān)，腺樣體肥大越明顯，腺樣體組織中的IL-6水平越高，提示腺樣體組織中IL-6高表達導致局部免疫異常，與兒童腺樣體肥大引起的各種耳鼻喉科并發(fā)癥相關(guān)[11]。Rudmik等[12]研究發(fā)現(xiàn),在腺樣體組織中含有豐富的肥大細胞、巨噬細胞、漿細胞等淋巴細胞,腺樣體發(fā)炎時可以通過激活肥大細胞,釋放多種分泌性介質(zhì),其中包括組胺、類胰蛋白酶等,使外周血單核細胞釋放IL-6增加。

本研究發(fā)現(xiàn)，IL-6在伴有CRS患兒血漿中的水平明顯升高，而腺樣體組織中IL-6的表達也明顯升高，作者推測IL-6可能通過一些途徑作用于炎癥細胞，使炎癥細胞合成釋放多種細胞炎性因子，同時又可直接或間接地促進炎癥細胞的聚集及活化，從而促進了細胞因子和炎癥細胞的惡性循環(huán)，使得鼻黏膜炎癥持續(xù)存在并加重，從而參與CRS的發(fā)生，但其具體作用機制有待進一步研究。

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Expression and significance of interleukin-6 in children with chronic rhinosinusitis*

WangBing,ShuYan,LiangJia,YaoHongbing△

(DepartmentofOtolaryngology,HeadandNeckSurgery,theChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014,China)

[Abstract]ObjectiveTo evaluate the expression of interleukin-6(IL-6) on peripheral blood and adenoid in children with chronic rhinosinusitis (CRS) and adenoidal hypertrophy,to investigate the mechanism of IL-6 on the occurrence and development of CRS.MethodsA total of 216 cases of hypertrophic adenoids were collected,including 95 CRS children with hypertrophic adenoid(CRS group),70 children with allergic rhinitis and hypertrophic adenoid (AR group)and 51 children with hypertrophic adenoid(control group).The plasma IL-6 concentrations were detected by ELISA,and the expression and distribution of IL-6 in adenoid tissue was detected by immunohistochemistry.ResultsThe plasma IL-6 level in CRS group was (49.8±8.3)pg/mL,significantly higher than that of in control group (33.6±6.9)pg/mL and in AR group (35.9±5.6)pg/mL,differences had statistic significance(P<0.05).However,there was no statistically significant difference between AR group and control group.Meanwhile,the presence of IL-6 in adenoid tissue was mainly seen in inflammation cells and fibroblasts while less in mesenchymal cells,there were statistical differences between CRS group and control group/AR group (P<0.05),but no statistical difference between AP group and control group(P>0.05).ConclusionAmong children with CRS,expression of IL-6 whether in peri-plasma or in focal tissue was higher than those without CRS,demonstrating that IL-6 may play an important role in the pathogenesis and developemnt of CRS in children.

[Key words]sinusitis;chronic disease;interleukin-6;children

doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.01.007

基金項目：重慶市衛(wèi)生局課題資助項目(20090116)。

作者簡介：王冰(1977-)，講師，碩士，主要從事耳鼻喉研究。通訊作者，E-mail:yaohongbing@163.net。

[中圖分類號]R765.4

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)01-0019-02

(收稿日期：2015-09-18修回日期：2015-10-25)