胡師華,侯萌,鄭英平,江艷湖南省長沙市長沙醫(yī)學院

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修正液對小鼠肝細胞的影響研究

胡師華,侯萌,鄭英平,江艷
湖南省長沙市長沙醫(yī)學院

摘要：目的：觀察修正液對小鼠肝細胞的影響。方法：建立修正液對小鼠肝臟損害的模型，分為對照組和修正液組，檢測小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶，并于實驗結束取肝標本觀察肝組織病理學變化。結果：實驗顯示出修正液組小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶活力升高，可引起小鼠肝細胞形態(tài)學上的改變。結論：修正液對小鼠有一定肝臟毒性。

關鍵詞：修正液；肝細胞；谷丙轉氨酶；呼吸吸入

修正液作為一種廉價的實用文具，被廣泛應用于學生學習和文職工作中。根據(jù)調查顯示，在部分大中城市的中小學生中，使用修正類產品人數(shù)比例平均達到50％以上，有些學校甚至達85％以上。由于市面上修正液多含有有毒有機溶劑，主要集中體現(xiàn)在有機溶劑中有害物質——苯和氯代烴含量嚴重超標，氯代烴具有很強致癌性,特別對人體的肝臟損害很大，苯揮發(fā)性強[1]，損害消化系統(tǒng)，對于直接或者間接接觸者都會產生影響[1-2]。本研究制作了小鼠吸入修正液揮發(fā)性氣體的模型，探討了效應－劑量的關系，觀察肝細胞的形態(tài)學變化及損傷的特征，探討修正液對肝細胞的影響，可以為更好的防治因長期使用修正液導致?lián)p害機體的影響提供防治依據(jù)。

1、材料和方法

1.1、實驗材料實驗用品：為網(wǎng)絡渠道銷售的修正液。

1.2、動物和分組

1.2.1、動物：昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重25～30g，由長沙醫(yī)學院實驗動物中心提供。

1.2.2、分組小鼠置于自然通風有穩(wěn)定的人工照明,溫度維持在（20±2）℃室內。自由進食和飲水,按性別隨機分為30min/d雄組、30min/d雌組、15min/d雄組、15min/d雌組、空白對照組共五組，每組8只。

1.3、動物模型制作模擬修正液環(huán)境取一40m×20cm×30cm的無蓋塑料盒，2/3盒頂覆蓋扎洞塑料膜，在距盒頂5cm處設置一鐵絲隔欄，隔欄上放置一玻璃皿，總共倒入10ml修正液，循環(huán)使用，每五天更換一次新修正液。在盒子側壁各開四個直徑1cm的小孔，使空氣對流，造成一個具有修正液氣味的環(huán)境?？瞻讓φ战M：給予正常的條件飼養(yǎng)。30min/d雄組、30min/d雌組：放入5ml的等量修正液，讓其自然揮發(fā)。每天放入環(huán)境中30min。15min/d雄組、15min/d雌組：放入5ml的等量修正液，讓其自然揮發(fā)。每天放入環(huán)境中15min。每天一次，連續(xù)40天。

1.4、測定血清丙氨酸氨基轉移酶活力造模完成后，停止修正液吸入30天。12小時內不喂食，空腹小鼠尾靜脈采血，3000rpm離心10min，用改良的賴氏法測定血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)。

1.5組織形態(tài)學觀察對所取的肝臟組織進行常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，用光學顯微鏡在10×10和10×40下進行觀察。

2、結果

2.1、各組吸入修正液小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶活力(表1)由表1可見，修正液吸入組小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶活力高于空白對照組，30min/d兩組小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶活力高于15min/d兩組。

表1　各組吸入修正液小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶活力(±s,n= 3)

表1　各組吸入修正液小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶活力(±s,n= 3)

組別　n　ALT（U/L）對照組　3　34.67±2.52 15min/d雄組　3　68.66±4.51 15min/d雌組　3　69.00±12.29 30min/d雄組　3　137.33±4.73 30min/d雌組　3　114.67±9.50

2.2、肝組織形態(tài)學變化光鏡結果顯示：空白對照組肝臟未見明顯病變。15min/d兩組部分肝小葉周邊的肝細胞胞漿疏松化，30min/d兩組結構被破壞較15min/d兩組嚴重，肝細胞輪廓均可見。15min/d雄、30min/d雄組正常肝小葉結構被破壞，但無明顯差異(圖2)。15min/d雌組肝細胞索結構尚存，30min/d雌組肝索結構消失，肝竇間隙狹窄，肝細胞排列紊亂，有變性、壞死的肝細胞(圖3)。

圖2.光鏡觀察小鼠肝組織病理形態(tài)學（HE×100）

圖3.光鏡觀察小鼠肝組織病理形態(tài)學（HE×400）

3、討論

本實驗表明，修正液對小鼠的肝細胞具有損害作用,小鼠與修正液接觸時間越長，肝細胞損傷越嚴重，說明與接觸時間成正相關性。。中國消協(xié)對市場上常見的修正液的成分檢驗結果顯示：19

種市場上常見的修正液都不同程度地含有苯、甲苯、二甲苯和幾種氣態(tài)鹵代烴[3]。對市場上的樣品分析，傷害將來源于修正液中超量的甲苯、乙苯、對二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯，而且由于目前對于修正液中二甲苯化合物未加以控制，對于長期使用的青少年的傷害尤為嚴重。劉峻等檢測結果表明修正液中甲苯、乙苯、對二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯風險指數(shù)大于1，會對青少年的健康風險產生影響[4]。帶香文具是小學生的最愛，它是加芳香烴一類具有揮發(fā)性的有機化合物，不僅影響人體的消化系統(tǒng)還會危害神經系統(tǒng)，嚴重時可損傷神經系統(tǒng)和消化系統(tǒng)，出現(xiàn)變態(tài)反應等[5]。由于作為修正液消費主力的青少年處于發(fā)育階段，長期使用修正液不當使得接觸和吸入量過多問題應引起重視。

修正液產品的質量、合格率和產業(yè)發(fā)展存在問題，修正液產品的成分檢測和發(fā)展優(yōu)化需要靠廣大企業(yè)和相關部門共同努力[2]。使用者仍需注意規(guī)范修正液等香味文具的使用。

參考文獻：

[1]徐東群，韓克勤，張愛軍，等.揮發(fā)性有機化合物的檢測方法研究[J].中國環(huán)境衛(wèi)生，2003，6(1-3):60-67.

[2]孫建強，周海安.修正液產品的發(fā)展與現(xiàn)狀分析[J].文體用品與科技，2008，(10)

[3]張偉亞，王成云，李英.涂改液中鹵代烴和苯系物的頂空氣質聯(lián)用測定法[J].環(huán)境與健康雜志，2003。20(1)：44～47.

[4]劉峻,韓陳,江艷,童永琪.修正液中苯系物風險評估及暴露評價[J].環(huán)境化學,2016,35(1):218-221

[5]龔永啟，胡芳，王福群.小學生衛(wèi)生情況初步調查與分析[J].實用全科醫(yī)學，2007，(5)：10.

基金項目:長沙醫(yī)學院2015年大學生研究性學習和創(chuàng)新性實驗計劃項目長醫(yī)教[2015]15號-76。

作者簡介：胡師華（1995-），女，廣西柳州人，2013級臨床醫(yī)學本科在校生。

通訊作者：江艷（1989-），女，湖南益陽人，長沙醫(yī)學院教師。