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        術(shù)前新輔助化療及腸內(nèi)營養(yǎng)對胃癌患者Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響

        2016-06-13 06:26:21魏倫收張娟娟康玉華丁春生索智敏
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2016年26期
        關(guān)鍵詞:胃癌輔助營養(yǎng)

        魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏

        術(shù)前新輔助化療及腸內(nèi)營養(yǎng)對胃癌患者Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響

        魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏

        目的 探討術(shù)前新輔助化療(NAD)及腸內(nèi)營養(yǎng)(EA)對胃癌患者胃癌組織內(nèi)Akt1、Bcl-2、Bax蛋白影響。方法 選取胃癌患者75例,隨機分為對照組25例、NAD組25例和NAD+EA組25例,分別檢測干預(yù)治療前后胃癌組織中Akt1、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前均顯著降低(P<0.05),NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較對照組顯著降低(P<0.05)。NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低(P<0.05),Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高(P<0.05),NAD組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P<0.05),NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P<0.01),NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照組顯著升高(P<0.05)。結(jié)論術(shù)前NAD結(jié)合EA能降低胃癌組織內(nèi)Akt1、Bcl-2蛋白,提高Bax蛋白水平,可能通過改變蛋白含量抑制腫瘤進(jìn)程。

        胃癌;新輔助化療;Akt1;Bcl-2;Bax

        新輔助化療(neoadjuvant chemotheraphy,NAD)是一種治療胃癌的綜合性療法,在消化道惡性腫瘤的治療上,已得到越來越廣泛的應(yīng)用[1]。營養(yǎng)支持是緩解胃癌患者營養(yǎng)不良的必要措施。Akt1又稱蛋白激酶B,可調(diào)控細(xì)胞增值和生長,目前研究發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞凋亡和糖代謝方面起到重要作用,Akt1基因位點的突變與腫瘤的發(fā)生及生成關(guān)系密切[2]。Bcl-2/Bax的比例也是決定細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵,當(dāng)比例增大時,細(xì)胞凋亡受抑制,反之則促進(jìn)[3]。本研究對胃癌患者給予NAD及對應(yīng)腸內(nèi)營養(yǎng)(enteral nutrition,EA)支持,觀察胃癌組織內(nèi)Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)變化,以探討NAD及EA支持對胃癌抑制的機制。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2013年8月~2014年6月在河南大學(xué)附屬醫(yī)院的胃癌患者75例,隨機分成3組,各25例。對照組:確診后直接手術(shù);NAD組:NAD后直接手術(shù);NAD+EA組:為在行術(shù)前NAD加用EA支持后再行手術(shù)。所有入組患者術(shù)前均有內(nèi)鏡活檢病理,并將活檢標(biāo)本及術(shù)后標(biāo)本存液氮備用。對照組男15例,女10例,平均年齡(54.4±1.6)歲,中分化13例,低分化12例,TNMⅡ期12例,TNMⅢ期13例;NAD組男18例,女7例,平均年齡(51.4±3.2)歲,中分化11例,低分化14例,TNMⅡ期11例,TNMⅢ期14例;NAD+EA組男15例,女10例,平均年齡(52.2±1.0)歲,中分化9例,低分化16例,TNMⅡ期13例,TNMⅢ期12例。各組年齡及性別組間兩兩比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

        1.2 方法

        1.2.1 新輔助化療 第1天靜脈滴注奧沙利鉑(130mg/ m2);第1~14天,口服卡培他濱(1000mg/m2),2次/d。進(jìn)行2個療程后行手術(shù)治療。

        1.2.2 腸內(nèi)營養(yǎng) 采用高脂低糖、含ω-3脂肪酸且熱量供給為62.76~83.68kJ/(kg·d)的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)供給。其他2組自然進(jìn)食。

        1.3 檢測方法

        1.3.1 試劑 兔抗人AKt1單克隆抗體,Bcl-2、Bax、兔抗人多克隆抗體,SABC試劑盒,DAB顯色試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供。

        1.3.2 藥品 注射用奧沙利鉑(齊魯制藥有限公司,批號:20130216);卡培他濱片(上海羅氏制藥有限公司,批號:20121208)。

        1.3.3 Western blot檢測AKt1蛋白的表達(dá) 術(shù)后剪取適量(30~80mg)胃癌組織,加入約500μL RIPA蛋白裂解液和5μL PMSF蛋白保護(hù)液,4℃、12000r/min離心15min后取上清液,測定其中蛋白濃度。行電泳分離,低溫轉(zhuǎn)膜后在TBST溶液中常溫封閉4h,然后加入兔抗人AKt1單克隆抗體(1∶10000稀釋)和小鼠抗人β-action單克隆抗體(1∶10000稀釋),4℃孵育過夜,顯影,定影。蛋白的相對表達(dá)量用灰度值表示,采用Quantity One軟件分析。

        1.3.4 Western blot檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá) 術(shù)后剪取適量(30~80mg)胃癌組織,加入約500μL RIPA蛋白裂解液和5μL PMSF蛋白保護(hù)液,4℃、12000r/min離心15min后取上清液,測定Bcl-2、Bax蛋白濃度。具體操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。蛋白的相對表達(dá)量用灰度值表示,采用Quantity One軟件分析。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料用例數(shù)(n)表示,計數(shù)資料組間率(%)的比較采用χ2檢驗;以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組治療前后Akt1蛋白含量表達(dá)比較 NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前均顯著降低(P<0.05),NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較對照組顯著降低(P<0.05)。見表1。

        表1 各組治療前后Akt1蛋白含量表達(dá)比較(x±s)

        2.2 各組治療前后Bcl-2/Bax蛋白含量表達(dá)比較 NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低(P<0.05),Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高(P<0.05),NAD組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P<0.05),NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P<0.01),NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照組顯著升高(P<0.05)。見表2。

        表2 各組Bcl-2/Bax檢測IOD值比較(x±s)

        3 討論

        胃癌患者手術(shù)前常存在營養(yǎng)不良,影響腫瘤術(shù)后的預(yù)后及總體療效;因此,術(shù)前給予EA,糾正營養(yǎng)不良以更利于治療進(jìn)行。但單一的營養(yǎng)支持又可能促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖,引發(fā)術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[4]。NAD在殺滅癌細(xì)胞同時,會使患者出現(xiàn)消化道不良反應(yīng),影響預(yù)后。所以在術(shù)前給予EA同時加入NAD,既可以達(dá)到抑制癌細(xì)胞的作用,又可以供給機體足夠的營養(yǎng),作為胃癌綜合治療的一種手段,有利于延長患者生存期,提高生活質(zhì)量,降低手術(shù)風(fēng)險及術(shù)后并發(fā)癥[5]。

        Akt又稱蛋白激酶B,Akt1是其三個分型之一,Akt通過磷酸化caspase-9前體,發(fā)揮抗凋亡作用,從而促進(jìn)細(xì)胞生長、存活及腫瘤生成[6-7],Bcl-2/Bax的比例也是決定細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵[8],當(dāng)比例增大時,細(xì)胞凋亡受抑制,反之則促進(jìn)。Bcl-2是一種跨膜蛋白,存在于線粒體膜,改變膜的通透性抑制細(xì)胞色素C釋放實現(xiàn)抑制凋亡作用[9-10]。

        本研究結(jié)果顯示,NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前、對照組顯著降低(P<0.05)。NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低(P<0.05),Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高(P<0.05),NAD組及NAD+EA治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前、對照組顯著降低(P<0.05),NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照前顯著升高(P<0.05),提示使用NAD+EA均可能通過降低Akt1、Bcl-2蛋白,提高Bax蛋白,抑制抗凋亡作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡實現(xiàn)抑制抗腫瘤作用,進(jìn)而達(dá)到了治療效果。

        [1] 黃晉熙,楊鐵軍,王程虎,等.術(shù)前新輔助化療結(jié)合腸內(nèi)營養(yǎng)對胃癌患者腫瘤細(xì)胞增殖活性的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2015,25(3): 28-30.

        [2] 程玉,李春輝,劉海旺,等.Akt1信號通路在胃癌組織中的表達(dá)及意義[J].廣東醫(yī)學(xué),2015,36(4):560-562.

        [3] Li Z,Pang L,Fang F,et al.Resveratrol attenuates brain damage in a rat model of focal cerebral ischemia cia up-regulation of hippocampal Bcl-2[J]. Brain Res,2012,1450:116-124.

        [4] 黎介壽.腫瘤營養(yǎng)學(xué)的興起及臨床應(yīng)用[J].腸外與腸內(nèi)營養(yǎng),2004, 11(1):1-2.

        [5] 范朝剛,李國力,王緒林,等.輔助性營養(yǎng)支持對胃癌致消化道梗阻病人新輔助化療的作用[J].腸內(nèi)與腸外營養(yǎng),2008,15(4):222-223.

        [6] Osakim,Oshimuram,Hoh.PI3K-Akt pathway:its functions and alterations in human cancer[J].Apoptosis,2004,9(6):667.

        [7] 徐麗,金清東,宮喜,等.褪黑素的抗胃癌效應(yīng)及其引起的Bcl-2、Bax、p21和p53的表達(dá)變化[J].生理學(xué)報,2014,66(6):723-729.

        [8] 馮俊偉,張志勇,王愛軍,等.結(jié)直腸癌組織中TAZ表達(dá)與Bcl-2、Bax、Caspase-3的關(guān)系及臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志,2014,34(19): 5419-5420.

        [9] 田爽,王迪,李曉東,等.輔酶Q10對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)Bcl-2的表達(dá)增強及Bax和GSK-3β表達(dá)的抑制[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2013,29(7):698-701.

        [10] 楊洪穎,張文軍,左燕紅.胃癌組織中Ezrin表達(dá)與Bcl-2/Bax關(guān)系及其預(yù)后[J].解放軍醫(yī)藥雜志,2015,27(1):78-81.

        Objective To evaluate the effect of of neoadjuvant chemotherapy combined with enteral nutrition on Akt1, Bcl-2, Bax protein in patients with gastric cancer. Methods 75 patients with gastric cancer were randomly divided into the control group (n=25), neoadjuvant chemotherapy group (NAD group, n=25) and neoadjuvant chemotherapy plus enteral nutrition group (NAD+EA group, n=25). The content of Akt1, Bcl-2, Bax protein in gastricancer tissue were detected by westernblot before and after treatment. Results The content of Akt1 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment(P<0.05). The content of Akt1 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than control group (P<0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment (P<0.05). The content of Bax were increased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment (P<0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD group than control group (P<0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD+EA group than control group (P<0.01). The content of Bax were increased after treatment in NAD group and NAD+EA group than control group (P<0.05). Conclusion Preoperative neoadjuvant chemotherapy combined with enteral nutrition can decrease the content of Akt1, Bcl-2, increase the Bax protein, the inhibition of tumor procession may realize by changing the protein content.

        Gastric cancer; Neoadjuvant chemotherapy; Akt1; Bcl-2; Bax

        10.3969/j.issn.1009-4393.2016.26.001

        河南大學(xué)校內(nèi)基金(No:2013YBZR021)

        河南 475000 河南大學(xué)附屬淮河醫(yī)院消化內(nèi)科 (魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏)

        索智敏 E-mail:suozhiminkf@126.com

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