魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏

術(shù)前新輔助化療及腸內(nèi)營養(yǎng)對胃癌患者Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響

魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏

目的 探討術(shù)前新輔助化療（NAD）及腸內(nèi)營養(yǎng)（EA）對胃癌患者胃癌組織內(nèi)Akt1、Bcl-2、Bax蛋白影響。方法 選取胃癌患者75例，隨機分為對照組25例、NAD組25例和NAD+EA組25例，分別檢測干預(yù)治療前后胃癌組織中Akt1、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前均顯著降低(P＜0.05)，NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較對照組顯著降低(P＜0.05)。NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低(P＜0.05)，Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高(P＜0.05)，NAD組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P＜0.05)，NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P＜0.01)，NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照組顯著升高(P＜0.05)。結(jié)論術(shù)前NAD結(jié)合EA能降低胃癌組織內(nèi)Akt1、Bcl-2蛋白，提高Bax蛋白水平，可能通過改變蛋白含量抑制腫瘤進(jìn)程。

胃癌；新輔助化療；Akt1；Bcl-2；Bax

新輔助化療（neoadjuvant chemotheraphy，NAD）是一種治療胃癌的綜合性療法，在消化道惡性腫瘤的治療上，已得到越來越廣泛的應(yīng)用[1]。營養(yǎng)支持是緩解胃癌患者營養(yǎng)不良的必要措施。Akt1又稱蛋白激酶B，可調(diào)控細(xì)胞增值和生長，目前研究發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞凋亡和糖代謝方面起到重要作用，Akt1基因位點的突變與腫瘤的發(fā)生及生成關(guān)系密切[2]。Bcl-2/Bax的比例也是決定細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵，當(dāng)比例增大時，細(xì)胞凋亡受抑制，反之則促進(jìn)[3]。本研究對胃癌患者給予NAD及對應(yīng)腸內(nèi)營養(yǎng)（enteral nutrition，EA）支持，觀察胃癌組織內(nèi)Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)變化，以探討NAD及EA支持對胃癌抑制的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8月～2014年6月在河南大學(xué)附屬醫(yī)院的胃癌患者75例，隨機分成3組，各25例。對照組：確診后直接手術(shù)；NAD組：NAD后直接手術(shù)；NAD+EA組：為在行術(shù)前NAD加用EA支持后再行手術(shù)。所有入組患者術(shù)前均有內(nèi)鏡活檢病理，并將活檢標(biāo)本及術(shù)后標(biāo)本存液氮備用。對照組男15例，女10例，平均年齡（54.4±1.6）歲，中分化13例，低分化12例，TNMⅡ期12例，TNMⅢ期13例；NAD組男18例，女7例，平均年齡（51.4±3.2）歲，中分化11例，低分化14例，TNMⅡ期11例，TNMⅢ期14例；NAD+EA組男15例，女10例，平均年齡（52.2±1.0）歲，中分化9例，低分化16例，TNMⅡ期13例，TNMⅢ期12例。各組年齡及性別組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 新輔助化療 第1天靜脈滴注奧沙利鉑（130mg/ m2）；第1～14天，口服卡培他濱（1000mg/m2），2次/d。進(jìn)行2個療程后行手術(shù)治療。

1.2.2 腸內(nèi)營養(yǎng) 采用高脂低糖、含ω-3脂肪酸且熱量供給為62.76～83.68kJ/（kg·d）的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)供給。其他2組自然進(jìn)食。

1.3 檢測方法

1.3.1 試劑 兔抗人AKt1單克隆抗體，Bcl-2、Bax、兔抗人多克隆抗體，SABC試劑盒，DAB顯色試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供。

1.3.2 藥品 注射用奧沙利鉑（齊魯制藥有限公司，批號：20130216）；卡培他濱片（上海羅氏制藥有限公司，批號：20121208）。

1.3.3 Western blot檢測AKt1蛋白的表達(dá) 術(shù)后剪取適量（30～80mg）胃癌組織,加入約500μL RIPA蛋白裂解液和5μL PMSF蛋白保護(hù)液，4℃、12000r/min離心15min后取上清液，測定其中蛋白濃度。行電泳分離，低溫轉(zhuǎn)膜后在TBST溶液中常溫封閉4h，然后加入兔抗人AKt1單克隆抗體（1∶10000稀釋）和小鼠抗人β-action單克隆抗體（1∶10000稀釋），4℃孵育過夜，顯影，定影。蛋白的相對表達(dá)量用灰度值表示，采用Quantity One軟件分析。

1.3.4 Western blot檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá) 術(shù)后剪取適量（30～80mg）胃癌組織,加入約500μL RIPA蛋白裂解液和5μL PMSF蛋白保護(hù)液，4℃、12000r/min離心15min后取上清液，測定Bcl-2、Bax蛋白濃度。具體操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。蛋白的相對表達(dá)量用灰度值表示，采用Quantity One軟件分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組治療前后Akt1蛋白含量表達(dá)比較 NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前均顯著降低（P＜0.05），NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較對照組顯著降低（P＜0.05）。見表1。

表1 各組治療前后Akt1蛋白含量表達(dá)比較（x±s）

2.2 各組治療前后Bcl-2/Bax蛋白含量表達(dá)比較 NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低（P＜0.05），Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高（P＜0.05），NAD組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低（P＜0.05），NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低（P＜0.01），NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照組顯著升高（P＜0.05）。見表2。

表2 各組Bcl-2/Bax檢測IOD值比較（x±s）

3 討論

胃癌患者手術(shù)前常存在營養(yǎng)不良，影響腫瘤術(shù)后的預(yù)后及總體療效；因此，術(shù)前給予EA，糾正營養(yǎng)不良以更利于治療進(jìn)行。但單一的營養(yǎng)支持又可能促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖，引發(fā)術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[4]。NAD在殺滅癌細(xì)胞同時，會使患者出現(xiàn)消化道不良反應(yīng)，影響預(yù)后。所以在術(shù)前給予EA同時加入NAD，既可以達(dá)到抑制癌細(xì)胞的作用，又可以供給機體足夠的營養(yǎng)，作為胃癌綜合治療的一種手段，有利于延長患者生存期，提高生活質(zhì)量，降低手術(shù)風(fēng)險及術(shù)后并發(fā)癥[5]。

Akt又稱蛋白激酶B，Akt1是其三個分型之一，Akt通過磷酸化caspase-9前體，發(fā)揮抗凋亡作用，從而促進(jìn)細(xì)胞生長、存活及腫瘤生成[6-7]，Bcl-2/Bax的比例也是決定細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵[8]，當(dāng)比例增大時，細(xì)胞凋亡受抑制，反之則促進(jìn)。Bcl-2是一種跨膜蛋白，存在于線粒體膜,改變膜的通透性抑制細(xì)胞色素C釋放實現(xiàn)抑制凋亡作用[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前、對照組顯著降低（P＜0.05）。NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低（P＜0.05），Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高（P＜0.05），NAD組及NAD+EA治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前、對照組顯著降低（P＜0.05），NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照前顯著升高（P＜0.05），提示使用NAD+EA均可能通過降低Akt1、Bcl-2蛋白，提高Bax蛋白，抑制抗凋亡作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡實現(xiàn)抑制抗腫瘤作用，進(jìn)而達(dá)到了治療效果。

[1] 黃晉熙，楊鐵軍，王程虎，等.術(shù)前新輔助化療結(jié)合腸內(nèi)營養(yǎng)對胃癌患者腫瘤細(xì)胞增殖活性的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2015,25(3): 28-30.

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[5] 范朝剛,李國力,王緒林,等.輔助性營養(yǎng)支持對胃癌致消化道梗阻病人新輔助化療的作用[J].腸內(nèi)與腸外營養(yǎng),2008,15(4):222-223.

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[9] 田爽，王迪，李曉東，等.輔酶Q10對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)Bcl-2的表達(dá)增強及Bax和GSK-3β表達(dá)的抑制[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2013,29(7):698-701.

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Objective To evaluate the effect of of neoadjuvant chemotherapy combined with enteral nutrition on Akt1, Bcl-2, Bax protein in patients with gastric cancer. Methods 75 patients with gastric cancer were randomly divided into the control group (n=25), neoadjuvant chemotherapy group (NAD group, n=25) and neoadjuvant chemotherapy plus enteral nutrition group (NAD+EA group, n=25). The content of Akt1, Bcl-2, Bax protein in gastricancer tissue were detected by westernblot before and after treatment. Results The content of Akt1 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment(P＜0.05). The content of Akt1 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than control group (P＜0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment (P＜0.05). The content of Bax were increased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment (P＜0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD group than control group (P＜0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD+EA group than control group (P＜0.01). The content of Bax were increased after treatment in NAD group and NAD+EA group than control group (P＜0.05). Conclusion Preoperative neoadjuvant chemotherapy combined with enteral nutrition can decrease the content of Akt1, Bcl-2, increase the Bax protein, the inhibition of tumor procession may realize by changing the protein content.

Gastric cancer; Neoadjuvant chemotherapy; Akt1; Bcl-2; Bax

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.26.001

河南大學(xué)校內(nèi)基金（No:2013YBZR021）

河南 475000 河南大學(xué)附屬淮河醫(yī)院消化內(nèi)科 （魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏）

索智敏 E-mail：suozhiminkf@126.com