吳梅 魏思亮 王效靜

DC-CIK細胞聯(lián)合化療治療非小細胞肺癌的近期療效觀察

吳梅 魏思亮 王效靜

目的 探討DC-CIK細胞治療聯(lián)合化療在治療非小細胞肺癌中的臨床意義。方法 隨機選取70例非小細胞肺癌患者，分為實驗組（35例，行DC-CIK細胞治療聯(lián)合TP方案化療）和對照組（35例，單純行TP方案化療）。觀察2組患者治療前后的影像學判定有效率(response rate，RR)及臨床獲益率(clinical benefit rate，CBR)、卡式評分及主要并發(fā)癥改善情況、外周血T細胞亞群結果。DC、CIK細胞由自體外周血單核細胞誘導而成，應用流式細胞術檢測外周血T細胞亞群。結果 實驗組影像學判定有效率與臨床獲益率高于對照組（P﹤0.01）。實驗組生活質量及主要并發(fā)癥改善情況高于對照組（P﹤0.01）。實驗組T細胞亞群：CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56+高于對照組（P﹤0.01）；CD4+CD25+低于對照組（P﹤0.01）。較治療之前，治療組治療15天后CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56+升高，到60天時，維持在較高水平;CD4+CD25+在治療15天時降低，到60天時維持在較低水平。結論 DC-CIK細胞治療聯(lián)合化療對于改善非小細胞肺癌患者免疫功能狀況、提高生活質量，增加臨床療效方面具有積極意義。

肺癌；生物治療；樹突狀細胞；細胞因子誘導的殺傷細胞

目前，肺癌的發(fā)病率和死亡率在世界各國均呈明顯的上升趨勢，是我國最常見的惡性腫瘤之一。手術治療、放療、化療及分子靶向治療等已使腫瘤緩解率有所提高，但肺癌患者的總體生存率并無明顯改善，五年生存率仍不足15%[1]。有研究發(fā)現(xiàn)肺癌的發(fā)生與患者機體免疫功能下降有密切關系[2]。因此細胞免疫生物治療已成為當今肺癌綜合治療的重要組成部分。本研究通過DC-CIK（dendritic cells-cytokine induced killer cells）細胞免疫生物治療聯(lián)合化療治療中晚期非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer）患者，觀察治療前后患者免疫功能指標的動態(tài)變化，原發(fā)病灶和轉移灶的改變，患者生存質量的改善等。 探討細胞免疫生物治療聯(lián)合化療在治療非小細胞肺癌中，改善患者生活質量、增強免疫功能、延長生存期和提高腫瘤綜合治療療效中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按在本科入院順序選取經(jīng)病理證實、卡氏評分＞60分、預計生存期大于3個月的中晚期NSLC患者70例，隨機分為實驗組對和照組，每組35例。實驗組為生物治療加TP方案化療，對照組單純行TP方案化療。2組患者資料差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 入組患者基本臨床資料（n）

1.2 主要儀器及試劑 COBE-Spectra血細胞分離機，美國Terumo公司產(chǎn)品；Guava easycyte流式細胞儀，美國默克密理博公司產(chǎn)品；流式檢測試劑盒，CD3、CD4、CD8、CD56、CD25單抗，美國BD公司。

1.3 DC－CIK制備 由本院生物中心制備并提供，方法同參考文獻[3]。

1.4 治療方法 2組患者入院后完成常規(guī)檢查的同時，先作T細胞亞群檢測，以備對照。實驗組于檢查完成后先行靜脈采血，開始DC-CIK細胞培養(yǎng)，次日行化療；第11天皮下注射DC細胞1×107，第12～16天每天靜脈輸注CIK細胞4×109，21天為1個周期，4周期后開始療效評估。對照組常規(guī)靜脈化療4個周期后開始進行療效評估。伴胸水的患者實驗組在抽胸水后以

CIK細胞4×109胸腔內灌注，對照組于抽胸水后以80 mg順鉑加50 mL生理鹽水胸腔內灌注。

1.5 影像學判定客觀緩解率 參照WHO對實體瘤近期療效評價標準，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、無變化（SD）和進展（PD），以CR+PR統(tǒng)計客觀緩解率（OR）。

1.6 生活質量及主要并發(fā)癥的評估：生活質量按國際通用的Karnofsky評分評價，主要并發(fā)癥按治療前后臨床表現(xiàn)資料判定。

1.7 免疫功能評估 患者分別于治療結束后第15 d、30 d和60 d抽血行T細胞亞群檢測，觀察CD3+(總T細胞)、CD3+CD8+（細胞毒T細胞）、CD3+CD4+（輔助性T細胞）、CD4+/CD8+（Th/Ts比值）、CD4+CD25+（調節(jié)T細胞）、CD3-CD16+CD56+(自然殺傷細胞NK)、CD3+CD16+CD56+(NK-T細胞)值，并與治療前指標進行對照。

1.8 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件進行處理，率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組患者影像學判定近期客觀緩解率 經(jīng)影像學檢查,實驗組35例患者中,完全緩解9例,部分緩解17例,穩(wěn)定6例,惡化3例。有效率(response rate，RR)為74.2%,臨床獲益率(clinical benefit rate，CBR)為91.4%;而對照組35例患者中完全緩解6例,部分緩解12例,穩(wěn)定9例,惡化8例,有效率為

51.4 %,臨床獲益率為77.1%。實驗組有效率和臨床獲益率顯著高于對照組（P﹤0.01）。見表2。

表2 實驗組與對照組近期客觀緩解率（n）

2.2 患者生活質量及主要并發(fā)癥改善情況 實驗組35例患者治療后Karnofsky評分增加10分以上的27例（77.1%），對照組為24例（68.5%），實驗組高于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義。NSLC伴腦轉移患者實驗組7例，對照組8例經(jīng)上述治療加頭部放療后病變都得到控制，顱內高壓表現(xiàn)消退，無統(tǒng)計學意義。NSLC伴胸水實驗組13例，經(jīng)治療后胸水全部消退，有效率

100%;對照組12例，經(jīng)治療后8例胸水消退，有效率為66.6%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。NSLC伴肝轉移實驗組6例經(jīng)治療后2例轉移灶完全消失，3例轉移灶縮小，大的轉移灶縮小超過50%，1例轉移灶進展，有效率為83.3%；對照組4例肝轉移治療后1例轉移灶消失，2例穩(wěn)定，1例進展，有效率為25%，2組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。

2.3 免疫學評價 實驗組治療后外周血T細胞亞群改變情況見圖1。35例患者CD3+：治療后15、30、60天分別是（43.7±2.14）、（52.1±6.95）、（53.6±6.06），與治療前（38.5±2.8）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。CD3+CD8+：治療后15、30、60天分別是（25.5±3.09）、（31.1±4.56）、（33.3±5.75），與治療前（14.8±2.7）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。CD3+CD4+：治療后15、30、60天分別是：（18.2±3.86）、20.8±6.82）、（20.3±4.7）與治療前（19.4±2.7）比較有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義。CD4+CD25+：治療后15、30、60天分別是：（8.4±1.3）、（7.2±1.4）、（6.7±1.5）與治療前（6.7±1.5）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。CD3-CD16+CD56+：治療后15、30、60天分別是：（15.9±2.07）、（16.8±2.6）、（18.9±2.07）與治療前（12.2±2.3）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。CD3+CD16+CD56+：治療后15、30、60天分別是：（2.8±1.46）、（4.0±1.7）、（4.2±1.69）與治療前（2.0±1.06）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。對照組治療后外周血T細胞亞群檢測結果與治療前比較差異無統(tǒng)計學意義。實驗組與對照組各亞群檢測結果對照見表3。

圖1 實驗組治療前后T細胞亞群檢測結果

3 討論

非小細胞肺癌是常見的肺部惡性腫瘤，全身化療帶來的毒副作用是治療不易延續(xù)的重要原因之一。尋求新的綜合抗腫瘤途徑，以延長進展期肺癌患者的生成期、改善生存質量，具有非常積極的意義。近年隨著分子生物學的發(fā)展，免疫治療已成為腫瘤治療的新方法。腫瘤生物免疫治療具有符合生理、低毒和有效的特點，有著巨大的臨床研究和應用價值，是未來腫瘤治療的發(fā)展方向。樹突狀細胞（dentritic cell,DC）和細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine induced killers,CIK）是腫瘤細胞免疫治療的兩種重要細胞，前者識別抗原，激活獲得性免疫應答，后者通過細胞毒作用和分泌細胞因子殺傷腫瘤細胞，兩者聯(lián)合可高效殺傷腫瘤細胞[4]。

DC是體內功能最強的抗原提呈細胞（antigen precenting cells,APC）。成熟的DC是唯一能激活幼稚T淋巴細胞的專職抗原提呈細胞，在誘導高效而特異的抗腫瘤免疫中起關鍵作用[5]。DC是啟動、調控并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)，有研究表明，包括肺癌在內的惡性腫瘤患者體內往往存在DC功能缺陷，無法有效地提呈腫瘤抗原給T細胞，造成了免疫忽視或免疫逃逸[6]，是腫瘤發(fā)生發(fā)展和惡化的重要免疫學基礎。CIK是一類非主要組織相容性復合物（MHC）和非T細胞受體（T cell receptor,YCR）限制性的免疫活性細胞[7]。CIK細胞含有大量的分泌顆粒，當與靶細胞結合后，CIK細胞脫顆粒，釋放其中的穿孔素和顆粒酶，前者在靶細胞膜上形成穿膜樣結構，從而改變細胞的滲透壓和通透性；后者具有胰蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的特性，同時表達酶活性破壞細胞膜結構，以上兩者的共同作用可導致腫瘤細胞壞死[8]。因此，目前DC、CIK細胞是腫瘤過繼免疫治療的首選方案，它可以在不損傷機體免疫系統(tǒng)結構和功能的前提下，直接殺傷腫瘤細胞，調節(jié)和增強機體的免疫功能，產(chǎn)生持久的抗腫瘤作用，清除微小殘留灶，成為腫瘤手術、放化療后的重要輔助治療用段。而化療可以最大限度地減少腫瘤細胞，達到腫瘤負荷與T細胞應答之間的平衡，使之有利于T細胞作用。化療可以用來改變腫瘤微環(huán)境，以利于維持有效的抗腫瘤免疫應答?；熆梢杂脕磉x擇全身性免疫調節(jié)通路，以使免疫最大化和/或效應T細胞擴增。

研究顯示:DC、CIK細胞免疫生物治療聯(lián)合化療組四療程后，影像學客觀評價其有效率和臨床獲益率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。生活質量及主要并發(fā)癥改善情況高于對照組。實驗組35例患者CD3+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56+分別于治療后15天開始上升，1個月后維持在較高水平，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。CD3+CD4+：治療后與治療前比較有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義；CD4+CD25+：治療后15天回調到正常水平，60天時仍保持穩(wěn)定狀態(tài)，顯著優(yōu)于對照組。結果表明：接受DC、CIK治療的實驗組患者特異性和非特異性免疫功能均增強，臨床有效率提高，且無毒副作用。提示DC-CIK細胞治療聯(lián)合化療對于改善非小細胞肺癌患者免疫功能狀況、提高生活質量，增加臨床療效方面有積極意義,具有很好的臨床應用前景。

表3 實驗組與對照組T細胞亞群檢測結果（x±s）

[1] Swisher SG,Roth JA.Clinical update of AD-P53gene therapy for lung cancer[J].Surg Oncol clin N AM,2002 11(3):521-535.

[2] Van Cruijsen H,Gallegos Ruiz M,Van der Valk P,et al.Tissue microarray analysis of ganglioside N-glycolyl GM3 expression and signal transducer and activator of transcription(STAT)-3 activation in relation to dendritic cell infiltration and microvessel density in non-small cell lung cancer[J]. BMC Cancer,2009,9(1):180-181.

[3] 盛春華，鮑鋒，徐爽，等.化療聯(lián)合DC-CIK細胞治療非小細胞肺癌的臨床研究[J].細胞免疫治療,2013(2)：37-40.

[4] Marten A,Ziske C,Schottker B, et al.Interactions between dentritic cells and cytokine-induced kellr cells lead to an activation of both populations[J]. J Immunol,2001,24(6)：502-510.

[5] Babatz J,Rolling C,Lobel B,et al.Induction of celler immune responses against carcinoma bryonic antigen in patients with metastatic tumors after vaccination with alteved peptide ligand baded dendrtic cells[J]. Cancer Inmunol Immunothers，2006,55(3):268-276.

[6] Jefford M,Maraskovsky E,Cebon J,et al.The use of dentritic cells in cancer therapy[J].Lancet Oncol，2001,2(6):343-353.

[7] Flieger D,Kufer P,Beier L,et al.A bispecific digle-clain antibody directed against RPCAM/CD3 in combination with the cytokines interferon alpha and interleukin-2 efficiently retargets and CD+3CD+56 nuturalliller-like T lymphocytes to EPCAM-expressing tumor cells[J].Cancer Immunol Immunolter,2000,49(8):441-448.

[8] 趙光強，葉聯(lián)華，段林燦，等.全身化療和支氣管動脈灌注聯(lián)合CIK過繼免疫治療III期非小細胞肺癌的臨床研究[J].中國肺癌雜志，2009，6（12）：493-494.

Objective Discussing the Clinical effects of dendritic cells (DC) and cytokine induced killer (CIK) cells combined with chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods Randomly selected 70 cases of non-small cell lung cancer patients, divided into experimental group (35 Cases, take dendritic cells and cytokine induced killer cells combined with TP chemotherapy regimens) and control group (35 Cases, take chemotherapy alone). Compare the effectiveness of the experimental group and control group about response rate (RR) and clinical benef i t rate (CBR), Karnofsky performance score(KPS), improvement of complications, T lymphocyte subtypes in peripheral blood. dendritic cells (DC) and cytokine induced killer (CIK) induced by peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Application Flow Cytometry(FCM) to detect T lymphocyte subtypes from peripheral blood. Results The level of response rate (RR) and clinical benef i t rate (CBR), Karnofsky performance score (KPS), improvement of complications from experimental group better than control group (P<0.01). The level of CD3+, CD3+CD8+, CD3+CD4+, CD3-CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+from experimental group are higher than control group (P<0.01), CD4+CD25+is lower than control group (P<0.01). Compared with before treatment, in experimental treatment after 15 days, the level of CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3-CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+are increase, when to 60 days,the level maintain at a high line; the level of CD4+CD25+is decreases after 15 days, when to 60 days, the level maintain at a low line. Conclusion DC and CIK cells combined with chemotherapy is of an positive signif i cance in improving immune status and quality of life ,increasing the clinical curative effect.

Lung carcinoma; Biotherapy; Dendritic cells; Cytokine induced killer cells

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.36.005

安徽 233030 蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院呼吸科 （吳梅 魏思亮王效靜）