白海俠　嚴(yán)亞鋒

陜西中醫(yī)藥大學(xué) (咸陽 712046)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血漿IL-6、TNF-α的影響*

白海俠嚴(yán)亞鋒

陜西中醫(yī)藥大學(xué) (咸陽 712046)

摘要目的：通過實(shí)驗(yàn)觀察腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血漿中白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量的影響，以探討其治療高血壓的作用機(jī)制。方法：采用慢性復(fù)合電刺激加高脂飲食致大鼠高血壓肝熱痰瘀證模型，測定大鼠血漿中IL-6和TNF-α的含量。結(jié)果：與治療前及模型組比較，腦清通顆粒各劑量組從治療第2周后血壓均明顯降低(P<0.01)，且第3周后降壓作用最明顯；與模型組比較，腦清通顆粒各劑量組均能降低模型大鼠血漿中IL-6和TNF-α的含量(P<0.01)。結(jié)論：腦清通顆?？山档透哐獕焊螣崽叼鲎C模型大鼠血壓，其降壓機(jī)制可能與降低血漿中IL-6和TNF-α的含量有關(guān)。

主題詞高血壓/中醫(yī)藥療法@腦清通顆粒動物，實(shí)驗(yàn)大鼠

腦清通顆粒是在首屆國醫(yī)大師、中醫(yī)內(nèi)科專家張學(xué)文教授臨床經(jīng)驗(yàn)方腦清通湯的基礎(chǔ)上研制研發(fā)的中藥復(fù)方制劑。處方由決明子、丹參、姜半夏、川芎、水蛭、山楂、野菊花、神曲、赤芍等11味中藥組成，具有清肝活血、滌痰通絡(luò)的功效，用于眩暈(高血壓)、頭痛、中風(fēng)先兆、中風(fēng)等表現(xiàn)為肝熱痰瘀證的疾病。該方在臨床中治療高血壓肝熱痰瘀證已有20余年，臨床效果非常顯著，且未發(fā)現(xiàn)任何不良反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠高血壓肝熱痰瘀證模型，觀察腦清通顆粒對大鼠血漿中白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量的影響，以探討腦清通顆粒治療高血壓肝熱痰瘀證的治療機(jī)理。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動物SD大鼠70只，雌雄各半，體重180～220g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號SCXK(陜)2007-001。

1.2藥物與試劑

1.2.1受試藥物：腦清通混懸顆粒(12g/袋，每克相當(dāng)于生藥2.04g。臨床用藥劑量：1袋/次，2次/d，即每人每日相當(dāng)于服生藥量48.96g)，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心制備，批號130120。(制備方法：取決明子、水蛭，混合粉碎成粗粉，備用。其余丹參、姜半夏等九味加8倍量水煎煮三次，每次1h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.30(60℃)的稠膏，加入決明子、水蛭粉末，減壓干燥，將干燥物粉碎成細(xì)粉，加入適量糊精、3.5g阿斯巴甜，混勻，制成顆粒，干燥，共制成1000g，即得)

1.2.2對照藥物：卡托普利片、辛伐他汀片、阿司匹林腸溶片。

1.2.3試劑：大鼠IL-6、TNF-α檢測試劑盒(96T，美國R&D公司)。

1.3高脂飼料配制[1]取80g豬油、40g膽固醇置500mL燒杯中，在電爐上加熱使其融化，再加入4g研細(xì)的丙基硫氧嘧啶片和8g膽酸鈉，充分?jǐn)噭?，后加入吐?80、2-丙二醇各80mL及適量的蒸餾水，不斷攪拌，使其均勻，再加蒸餾水至400mL并充分混勻,即生成200g/L豬油、100g/L膽固醇、10g/L丙基硫氧嘧啶和20g/L膽酸鈉的脂肪乳劑，置冰箱保存，用時(shí)加熱融化。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器MC4000無創(chuàng)大鼠血壓測定儀，自然基因科技有限公司；ELx808酶標(biāo)儀，美國BioTek公司；XP504電子分析天平，梅特勒-托利多公司；CO2培養(yǎng)箱，德國BTNDER公司；KDC-160HR型低溫離心機(jī)，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；Forma-86c低溫冰箱。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1造模將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，每日上午定時(shí)用無創(chuàng)大鼠血壓測定儀進(jìn)行測量大鼠血壓，連續(xù)測量3次，取其平均值作為大鼠造模前基礎(chǔ)血壓。隨機(jī)取出60只，參照董艷芬等[2]的方法制造慢性復(fù)合應(yīng)激性高血壓大鼠模型。

將60只大鼠分別放在MC4000型無創(chuàng)大鼠血壓測定儀系統(tǒng)的電刺激箱中，用低頻、低壓交流電進(jìn)行電擊大鼠足底部，同時(shí)用100dB的噪音進(jìn)行刺激，連續(xù)刺激14d。刺激的電源強(qiáng)度以引起大鼠強(qiáng)烈反應(yīng)，但不對大鼠造成損傷為準(zhǔn)。

在造模過程的第8天起，給模型組大鼠在復(fù)合刺激的基礎(chǔ)上，開始用高脂飼料乳劑(1mL/100g)灌胃，連續(xù)10d。

2.2造模成功標(biāo)準(zhǔn)參照董艷芬等制定的應(yīng)激性高血壓判定標(biāo)準(zhǔn)：造模2周后測量大鼠平均收縮壓(SBP)，造模后比造模前大鼠血壓升高值≥20mmHg(1mmHg=0.133kPa)，并且高于115mmHg者，即可判定造模成功。

大鼠肝熱痰瘀證的判定標(biāo)準(zhǔn)：模型組大鼠可見煩躁，易怒，尖叫，精神萎靡，飲食減少，痰涎增多，口唇、舌質(zhì)紫暗，毛色晦暗或泛黃、無光澤，甚至體毛結(jié)穗，大便秘結(jié)等。其中具備4項(xiàng)以上的癥狀即可判定為肝熱痰瘀證。

2.3分組60只大鼠造模成功54只。將造模成功的54只高血壓肝熱痰瘀證大鼠隨機(jī)取出50只，分為模型組、西藥組、腦清通顆粒低、中、高劑量組，每組10只。另外未造模的10只大鼠作為空白組。

2.4給藥分組后各實(shí)驗(yàn)組大鼠開始分別灌胃給藥?？瞻捉M與模型組以0.9%生理鹽水灌胃，西藥組以卡托普利10mg/kg+辛伐他汀5mg/kg+阿司匹林20mg/kg的混合溶液灌胃，腦清通顆粒大、中、小劑量組分別4.0g·kg-1、2.0g·kg-1、1.0g·kg-1的溶液灌胃。每天均在上午給藥1次，給藥體積均為10mL·kg-1，連續(xù)給藥21d。

2.5指標(biāo)測定

2.5.1血壓測量：按照周海哲等[1]的測定方法。實(shí)驗(yàn)大鼠均于實(shí)驗(yàn)前3d進(jìn)行適應(yīng)性測量血壓的訓(xùn)練。每次測量血壓均在每天上午同一時(shí)間進(jìn)行。將4只大鼠置于固定籠中，放入MC4000型大鼠無創(chuàng)血壓測量系統(tǒng)內(nèi)，將大鼠尾巴穿過尾套，尾套和換能器相連接，36℃預(yù)熱10～15min，等大鼠尾動脈完全擴(kuò)張后，給尾套加壓，直至脈搏信號完全消失，再緩慢放氣至其脈搏信號恢復(fù)正常。連續(xù)測量3次，取其平均值。

大鼠每給藥一周后測量血壓一次，測量方法同前。

2.5.2血漿中IL-6和TNF-α的測定：各組末次給藥后，測量血壓，禁食12 h，用10%水合氯醛(3mL/kg)腹腔注射麻醉，分離腹主動脈取血4～6mL，注入抗凝管中，以備測定IL-6和TNF-α的含量。全部血樣在2 h內(nèi)4℃，3000 r/min，離心10min，取血漿在-80℃下冷凍保存。嚴(yán)格按試劑盒說明書測定IL-6和TNF-α的含量。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血壓的影響見表1。

表1　腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血壓的影響

注：與治療前比較△P<0.05，▲ P<0.01；與模型組比較◇P<0.05，◆P<0.01

表1結(jié)果表明：與治療前及模型組比較，西藥組及腦清通顆粒各劑量組從治療第2周后血壓均明顯降低(P<0.01)，且第3周后降壓作用最明顯。說明腦清通顆粒具有降低高血壓肝熱痰瘀證大鼠血壓的作用，其中大劑量組的作用最明顯。

3.2腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血漿中IL-6和TNF-α的影響見表2。

表2　腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血漿中IL-6和TNF-α的影響

注：與模型組比較△P<0.05，▲ P<0.01；與空白組比較◇P<0.05，◆P<0.01

4討論中醫(yī)無高血壓病名，根據(jù)其頭暈、目眩、頭痛等主要臨床表現(xiàn)，多將本病歸屬于“頭痛”、“眩暈”等的范疇?；静C(jī)為肝腎陰虛，肝陽上亢，痰瘀內(nèi)阻。中醫(yī)關(guān)于高血壓病因病機(jī)的研究占主導(dǎo)地位的理論認(rèn)為：高血壓是由于七情所傷，飲食失節(jié)，內(nèi)傷虛損，引起陰陽平衡失調(diào)，病損的臟器主要在肝、腎及心。主要病機(jī)有肝陽上亢、肝腎陰虛、陰虛陽亢、陰陽兩虛等[3]。張學(xué)文教授認(rèn)為高血壓患者多具有肝熱血瘀，痰濁內(nèi)阻的病機(jī)，治療宜采用“清肝化瘀滌痰法”。張老以臨床使用多年的經(jīng)驗(yàn)方腦清通顆粒治療肝熱痰瘀型高血壓，可使肝火降，血行暢，諸癥消，臨床療效非常顯著。該經(jīng)驗(yàn)方由決明子、丹參、川芎、姜半夏、野菊花、豨簽草、水蛭、赤芍等組成，具有清肝活血、滌痰通絡(luò)之功效，用于眩暈、頭痛、中風(fēng)先兆、中風(fēng)等表現(xiàn)為肝熱痰瘀證的疾病。IL-6主要是由單核-巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的，參與免疫與炎癥反應(yīng)的炎性細(xì)胞因子。IL-6含量升高可使成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增殖，導(dǎo)致產(chǎn)生大量的血小板源生長因子(PDGF)，最終造成周圍血管阻力增高，引起高血壓[4]。TNF-α是由主淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的功能，是一種參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子。研究表明,血漿TNF-α濃度與血壓水平密切相關(guān)。TNF-α可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中一氧化氮合酶的活性,減弱一氧化氮所導(dǎo)致的血管舒張作用,導(dǎo)致血管收縮,血壓升高[5-6]。

本實(shí)驗(yàn)通過觀察腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血壓的影響，發(fā)現(xiàn)腦清通顆粒能降低高血壓肝熱痰瘀證大鼠的血壓。通過觀察腦清通顆粒對高血壓肝熱痰瘀證大鼠血漿IL-6和TNF-α含量的影響，發(fā)現(xiàn)模型組血漿中IL-6和TNF-α的含量明顯高于空白組，說明大鼠血壓的升高與血管內(nèi)IL-6和TNF-α的含量有一定關(guān)系。腦清通顆粒能明顯降低高血壓肝熱痰瘀證大鼠血漿中IL-6和TNF-α的含量，提示腦清通顆?？赡苁峭ㄟ^抑制大鼠血漿中IL-6和TNF-α的釋放，從而達(dá)到降低血壓的目的。

參考文獻(xiàn)

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(收稿2015-08-25；修回2015-09-18)

【中圖分類號】R541.1

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.01.062

*陜西省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目計(jì)劃項(xiàng)目(14JK1195，2013JK0831)