劉　娜　姜麗波　張淑英　姚宇寧　許玲玲

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院血液內(nèi)科，黑龍江　齊齊哈爾　161000)

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老年白血病患者Survivin基因表達(dá)變化及其對(duì)預(yù)后的影響

劉娜姜麗波張淑英姚宇寧許玲玲

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院血液內(nèi)科，黑龍江齊齊哈爾161000)

〔摘要〕目的探討老年白血病患者Survivin基因表達(dá)變化及其對(duì)預(yù)后的影響。方法老年白血病患者41例，其中初治患者22例，緩解患者12例，復(fù)發(fā)患者7例。體檢的健康人群中隨機(jī)選擇15例作為對(duì)照組。檢測(cè)各組的Survivin基因表達(dá)情況及外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)情況。結(jié)果對(duì)Survivin基因在不同白血病細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行檢測(cè)和比較，急性非淋巴細(xì)胞白血病組和急性淋巴細(xì)胞白血病組均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。檢測(cè)各組及對(duì)照組Survivin基因的陽(yáng)性表達(dá)，初治組和復(fù)發(fā)組Survivin基因陽(yáng)性表達(dá)率分別為90.91%和85.71%，均顯著高于對(duì)照組的20.00%和緩解組的41.637%(P<0.05)。經(jīng)白細(xì)胞計(jì)數(shù)和檢測(cè)，處于正常水平11例，其余30例均存在計(jì)數(shù)異常。分析Survivin基因的陽(yáng)性表達(dá)情況與白細(xì)胞計(jì)數(shù)的關(guān)系，白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常組的Survivin基因陽(yáng)性表達(dá)率(86.67%)顯著高于正常組(45.45%，P<0.05)。結(jié)論對(duì)老年白血病患者而言，其體內(nèi)Survivin基因表達(dá)水平的變化與疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在十分密切的聯(lián)系。

〔關(guān)鍵詞〕白血?。籗urvivin基因；基因表達(dá)

Survivin基因?qū)儆谝环N十分重要的凋亡抑制蛋白，僅在胚胎組織及各種腫瘤組織中發(fā)生表達(dá)〔1〕。Survivin基因具有一定的腫瘤特異性，和各種腫瘤細(xì)胞的分化及轉(zhuǎn)移等活動(dòng)都具有十分密切的聯(lián)系。以往有學(xué)者通過建立動(dòng)物模型并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)〔2〕，Survivin基因和p53蛋白之間存在十分密切的聯(lián)系，在胃癌前病變過程中，二者可以共同作用，發(fā)揮出一定的協(xié)同作用。為了對(duì)胃癌前病變予以有效的干預(yù)，并盡可能延緩癌變進(jìn)程，可以采用下調(diào)Survivin基因的表達(dá)及降低凋亡促進(jìn)基因P53突變等方式。本研究探討老年白血病患者Survivin基因表達(dá)變化及其對(duì)預(yù)后的影響。

1資料與方法

1.1一般資料老年白血病患者41例，均為本院血液科住院患者。其中男25例，女16例，年齡60～81歲，平均(69.25±8.15)歲。均經(jīng)臨床診斷，確診為白血病，急性非淋巴細(xì)胞白血病30例，急性淋巴細(xì)胞白血病11例。其中初治患者22例，緩解患者12例，復(fù)發(fā)患者7例。在本院接受體檢的健康人群中隨機(jī)選擇15例作為對(duì)照組。本次研究相關(guān)內(nèi)容和方法均經(jīng)本院倫理部門審核并批準(zhǔn)。

1.2收集標(biāo)本無菌條件下采集骨髓樣本，常規(guī)處理之后，分離單個(gè)核細(xì)胞。利用磷酸緩沖溶液(由天津百倫斯生物技術(shù)有限公司提供)進(jìn)行2次洗滌，添加Trizol試劑(由北京飛美斯分析科技有限公司提供)，混合均勻之后保存待用。

1.3RT-PCR檢測(cè)利用Trizol試劑盒(由北京厚生博泰科技有限公司提供)進(jìn)行總RNA提取，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，并利用分光光度計(jì)對(duì)總RNA的純度和完整性進(jìn)行檢測(cè)。進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA。進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物置于瓊脂糖凝膠(由上海源培生物科技股份有限公司提供)中予以電泳，并進(jìn)行半定量檢測(cè)。

1.4白細(xì)胞計(jì)數(shù)抽取外周血，采用庫(kù)爾特顆粒計(jì)數(shù)法，利用全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(由杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司提供)進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1Survivin基因在不同白血病細(xì)胞中的表達(dá)情況急性非淋巴細(xì)胞白血病組和急性淋巴細(xì)胞白血病組Survivin基因陽(yáng)性表達(dá)率〔20例(66.67%)、9例(81.82%)〕均顯著高于對(duì)照組〔3例(20.00%)，P<0.05〕。見圖1。

1～2為急性非淋巴細(xì)胞白血病組，3～4為急性淋巴細(xì)胞白血病組，5～8為對(duì)照組圖1　Survivin基因在各組表達(dá)情況

2.2各組Survivin基因的陽(yáng)性表達(dá)情況初治組和復(fù)發(fā)組Survivin基因陽(yáng)性表達(dá)率〔20例(90.91%)和6例(85.71%)〕均顯著高于對(duì)照組和緩解組〔5例(41.67%)，P<0.05〕。

2.3Survivin基因的陽(yáng)性表達(dá)情況與白細(xì)胞計(jì)數(shù)的關(guān)系經(jīng)白細(xì)胞計(jì)數(shù)和檢測(cè)，處于正常水平的有11例，其余30例均計(jì)數(shù)異常。白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常組Survivin基因的陽(yáng)性表達(dá)率 〔26例(86.67%)〕顯著高于白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常組〔5例(45.45%)，P<0.05〕。

3討論

在各種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中，細(xì)胞凋亡都發(fā)揮著十分重要的作用〔3〕。而對(duì)腫瘤細(xì)胞而言，其凋亡會(huì)受到諸多凋亡相關(guān)基因的控制和影響。凋亡抑制蛋白是一類特殊的調(diào)節(jié)因子，可以參與細(xì)胞周期之中，并在終效應(yīng)階段發(fā)揮出十分重要的作用〔4〕。Survivin即為一種重要的凋亡抑制蛋白，由142個(gè)氨基酸組成，位于染色體的17q25。Survivin沒有環(huán)指結(jié)構(gòu)，僅含有單一的BIR功能區(qū)〔5〕。Survivin基因可以有效防止細(xì)胞發(fā)生凋亡，其作用機(jī)制主要通過對(duì)凋亡酶產(chǎn)生移植來阻礙細(xì)胞的凋亡。Survivin基因在正常細(xì)胞中幾乎不存在，但在人類各種腫瘤組織癌細(xì)胞中，Survivin含量十分豐富〔6〕。Survivin可在多種轉(zhuǎn)化細(xì)胞系中表達(dá)，并見于所有人類十分常見的腫瘤組織，例如前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌等。胡夢(mèng)澤等〔7〕指出，在多種腫瘤之中，均存在survivin基因表達(dá)的情況，為了對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖予以有效的抑制，可以積極設(shè)計(jì)不同的具有一定活性的survivin 小干擾RNA序列，以實(shí)現(xiàn)對(duì)survivin基因表達(dá)的有效沉默。孫文宣〔8〕對(duì)Survivin在急性髓系白血病中的表達(dá)及其在白血病中的致病作用進(jìn)行了分析，Survivin表達(dá)量和白血病患者的、外周血、血紅蛋白水平及骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)、年齡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、性別等變量之間不存在關(guān)系，但如果經(jīng)檢測(cè)Survivin呈現(xiàn)出陽(yáng)性，則表明可能會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重感染。對(duì)于經(jīng)檢測(cè)Survivin呈現(xiàn)出陽(yáng)性的患者，其治愈率低于Survivin呈陰性的患者，但復(fù)發(fā)率高于陰性患者。最終認(rèn)為，在急性髓系白血病患者的骨髓中，Survivin會(huì)出現(xiàn)高水平表達(dá)的情況，表明Survivin和急性髓系白血病的發(fā)生及發(fā)展之間存在十分密切的聯(lián)系，且可作為急性髓系白血病患者預(yù)后不良的重要參考指標(biāo)。本研究表明在白血病患者體內(nèi)白血病細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)中，包括增殖和分化、抗凋亡等，Survivin基因的表達(dá)均可以發(fā)揮出十分重要的作用來。

4參考文獻(xiàn)

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3李勇，王力利，王銀潔，等.胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中鋅指蛋白139與腫瘤細(xì)胞凋亡和生存素及B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2的關(guān)系及意義研究〔J〕.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015；18(3)：250-4.

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7胡夢(mèng)澤，師曉東，王天有，等.小干擾RNA沉默survivin基因表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞A549、Hela S3和K562的影響及小干擾RNA序列的篩選〔J〕.中華實(shí)用兒科臨床雜志，2014；29(3)：194-8.

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〔2014-12-11修回〕

(編輯苑云杰)

第一作者：劉娜(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事白血病研究。

〔中圖分類號(hào)〕R733.7

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)09-2178-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.059