舒相華 李曉紅 曲偉杰 王紹卿 宋春蓮

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201）

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云南省昌寧豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型血清學(xué)調(diào)查

舒相華 李曉紅 曲偉杰 王紹卿 宋春蓮

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201）

［摘 要］豬圓環(huán)病毒2型是現(xiàn)在危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的疫病之一，為了解云南省昌寧縣豬圓環(huán)病毒2感染情況，為全縣防控該病提供數(shù)據(jù)。2015年以全縣示范基地、規(guī)模戶、公豬站為對(duì)象，采集7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)72家養(yǎng)豬場(chǎng)（戶）的2413頭種豬血液，用ELISA方法檢測(cè)免疫抗體、PCR檢測(cè)病毒核酸。結(jié)果顯示：豬圓環(huán)病免疫抗體陽(yáng)性率為68.89%，帶毒率為4.99%。種母豬的免疫抗體陽(yáng)性率率為54.54%，帶毒率為6.1.%；種公豬的免疫抗體陽(yáng)性率為65.52%，帶毒率為4.93%，昌寧縣種豬群的豬圓環(huán)病毒2型病經(jīng)過(guò)多年努力已得到基本控制，種公豬是今后防控的重點(diǎn)。

［關(guān)鍵詞］豬圓環(huán)病毒2型ELISA PCR血清學(xué)調(diào)查

豬圓環(huán)?。≒orcine circovirus infection）是由豬圓環(huán)病毒引起的豬的一種新的傳染病。豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV）為圓環(huán)病毒屬的成員之一。豬圓環(huán)病可以分為2種血清型，即PCV-1和PCV-2，其中最重要的為PCV-2型，而且PCV-2對(duì)豬的危害極大，甚至?xí)鹨幌盗械呐R床癥狀等等［1］。目前，豬圓環(huán)病毒在全國(guó)都存在，在部分豬場(chǎng)感染率很高，能引起很多疫病發(fā)生及混合感染，造成養(yǎng)豬業(yè)巨大損失。對(duì)該病的防控主要使用弱毒疫苗和滅活疫苗。該病毒感染還能引起免疫抑制，造成其他疫病免疫失敗，為綜合防控豬場(chǎng)疫病發(fā)生，就要控制住該病在豬場(chǎng)的感染，就要定期對(duì)該病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，掌握該病在豬場(chǎng)和一個(gè)地區(qū)的發(fā)病和預(yù)防狀況，才能做出科學(xué)的防控措施。

1　材料與方法

1.1材料來(lái)源與處理

云南省昌寧縣7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)72家養(yǎng)豬場(chǎng)（戶）的2413頭豬，采用前腔靜脈采血的方式采集種豬抗凝血和全血各5ml，全血經(jīng)離心后取上層血清置于-4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2實(shí)驗(yàn)試劑

用于豬圓環(huán)病2型抗體ELISA檢測(cè)試劑盒（IDEXX公司和武漢科前試劑盒）。

用于豬圓環(huán)病2型抗原檢測(cè)PCR（廠家）

1.3試驗(yàn)器材

PCR儀，微量移液槍、恒溫箱、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、燒杯、量筒、微量混勻器

1.4實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.4.1豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測(cè)按試劑盒說(shuō)明書操作方法和結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.4.2豬圓環(huán)病毒2型PCR的簡(jiǎn)單操作，PCV-2 PCR反應(yīng)體系為：PCR總體積為25μl，包括Taq DNA聚合酶12μl，PCV-2-1引物1μl，PCV2-2引物1μl，超純水10μl，待檢DNA模板1μl，瞬時(shí)震蕩瞬時(shí)離心混勻。PCR反應(yīng)參數(shù)為：94℃預(yù)變性120 S；94℃變性45 S，58℃退火45 S，72℃延伸45 S，共30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸8 min。取5μl PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，以出現(xiàn)500bp特異性條帶的樣品為陽(yáng)性。

2　結(jié)果與分析

2.1各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)及散養(yǎng)戶檢測(cè)結(jié)果

本次實(shí)驗(yàn)對(duì)昌寧縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)以及一些散養(yǎng)戶的豬群進(jìn)行圓環(huán)病流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果如下：

結(jié)果顯示：豬圓環(huán)病免疫保護(hù)率為68.89%，感染率為4.99%。

2.2種公、母豬種豬豬圓環(huán)病毒2型、抗體檢測(cè)

表2　種公、母豬圓環(huán)、ELISA抗體檢測(cè)和PCR抗原檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果顯示：種母豬的免疫保護(hù)率為54.54%，感染率為6.1.%；種公豬的免疫保護(hù)率為65.52%，感染率為4.93%。母豬的免疫保護(hù)率低于公豬，且感染率高于公豬。表明對(duì)豬圓環(huán)病母豬比公豬更為易感。

2.3進(jìn)行疫苗和不進(jìn)行疫苗的豬場(chǎng)抗原陽(yáng)性

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對(duì)72家豬場(chǎng)調(diào)查分析顯示：一共進(jìn)行了72家調(diào)查，進(jìn)行疫苗防疫的有7家，不進(jìn)行疫苗防疫的有66家，進(jìn)行疫苗防疫的有1家有少數(shù)表現(xiàn)出陽(yáng)性，不進(jìn)行疫苗防疫的都存在陽(yáng)性。

3　討論

（1）豬圓環(huán)病毒2型危害極大，往往伴隨著一系列其他病原的發(fā)生。如可以引起豬圓環(huán)病與豬偽狂犬病的混合感染、豬圓環(huán)病與細(xì)小病的混合感染等等。如李海超等等［2］通過(guò)PCR設(shè)計(jì)引物檢測(cè)來(lái)自自山東、福建、安徽、河北、河南、廣西、遼寧和湖北八個(gè)省豬圓環(huán)病毒2型與豬細(xì)小病毒混合感染，其中在被檢測(cè)的227份病料中，PCV-2擴(kuò)增陽(yáng)性的病料為162份，細(xì)小病毒1陽(yáng)性病料135份，細(xì)小病毒2陽(yáng)性病料107份，表明在采樣的8個(gè)省份的豬群中普遍存在細(xì)小病毒病 和PCV-2的感染，其中兩種病原體的混合感染較為普遍。PCV-2在上述省份的感染率最高（50% ～100%），總陽(yáng)性率達(dá)到71.37%，安徽省樣品的感染率最高為100%；其次為細(xì)小病毒1，總感染率為59.47% （26.67% ～100%），除了河南省和湖南省以外，其他6個(gè)省的感染率均在60%以上。細(xì)小病毒2的感染率較低，為47.14% （27.27%～81.82%），安徽、河北、遼寧和廣西的感染率均在50%以上。各省PCV-2與細(xì)小病 感染的總陽(yáng)性率達(dá)到51.54%，其中PCV-2與細(xì)小病毒病1的混合感染率為44.05%，3種病原體的混合感染率均很低（低于20%）。整體上各病原體的流行分布沒(méi)有一定的地域性，而是與PPCV-2的流行情況成正比。由此，表明豬圓環(huán)病毒2型危害極大，而且圓環(huán)病毒2型的發(fā)生往往伴隨著其他病的發(fā)生。黎發(fā)金等［3］曾表示豬圓環(huán)病危害極大，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行各項(xiàng)生物安全措施，加強(qiáng)環(huán)境消毒、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、減少誘因等。如舍內(nèi)和舍外要進(jìn)行定期的消毒，進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)的人員和車輛也要進(jìn)行消毒措施，定期滅蠅滅鼠，糞污無(wú)害化處理等措施，和嚴(yán)格把好引種關(guān)以及疫苗接種，都是良好且有效的豬圓環(huán)病防治措施。

（2）通過(guò)對(duì)昌寧縣部分豬場(chǎng)豬圓環(huán)病ELISA抗體檢測(cè)和PCR抗原檢測(cè)，顯示豬圓環(huán)病免疫保護(hù)率為68.89%，帶毒率或者感染率為4.99%。崔亞蘭等［4］收集2007至2011年貴州省9個(gè)市（州）不同飼養(yǎng)規(guī)模（養(yǎng)豬戶）及屠宰場(chǎng)未免疫豬血清樣本共4980頭份，2011年19個(gè)豬場(chǎng)（屠宰場(chǎng)）存在的可疑病料有133份，分別采用ELISA及PCR方法對(duì)PCV2抗體及抗原進(jìn)行檢測(cè)。證明，豬圓環(huán)病是可以通過(guò)合理的防治及防控操作和有效的免疫程序?qū)⒏腥韭式档?。魯富有等?］對(duì)普洱市豬圓環(huán)病2型的血清學(xué)調(diào)查采自10縣（區(qū)）103個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）30個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)1430戶散養(yǎng)戶的3379頭份豬血清樣品，采用ELISA方法進(jìn)行豬圓環(huán)病毒-2型血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果顯示，普洱市10縣（區(qū)）陽(yáng)性感染率從2005年的10.12% 逐年上升至2013年的67.66%。說(shuō)明昌寧縣的種豬豬圓環(huán)病的陽(yáng)性率高于普洱市的，需要進(jìn)行防控，進(jìn)一步防治豬圓環(huán)病，降低患病率。肖俊等［6］為了解楚雄州豬圓環(huán)病毒病流行情況，采用ELISA 方法對(duì)采自楚雄州9縣1市規(guī)?；i場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬只血清共362份，進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型感染的血清流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果表明：共檢出陽(yáng)性有347份，陽(yáng)性率為95.86%。其中采自規(guī)模豬場(chǎng)的222份樣品中，陽(yáng)性有210份，陽(yáng)性率為94.56%；農(nóng)戶散養(yǎng)戶140份樣品，陽(yáng)性有137份，陽(yáng)性率為97.86%。說(shuō)明昌寧縣豬圓環(huán)病得到有效的防控，可以通過(guò)免疫降低患病率。

（3）本次試驗(yàn)結(jié)果表明，種母豬的感染率為6.1.%；種公豬的感染率為4.93%，同時(shí)種公豬的抗體保護(hù)率也高于母豬的抗體保護(hù)率，進(jìn)一步表明，對(duì)于豬圓環(huán)病種母豬比種公豬更為易感。進(jìn)行疫苗的家數(shù)患病少，不進(jìn)行疫苗的基本患病。所以豬場(chǎng)應(yīng)該定期進(jìn)行疫苗，進(jìn)行免疫接種，防止豬圓環(huán)病2型的發(fā)生。王一平等［7］研究PCV-2疫苗的特性和免疫效力，并對(duì)近年來(lái)有關(guān)PCV-2活載體疫苗、核酸疫苗及標(biāo)記疫苗等新型疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以防止豬圓環(huán)病毒2型的發(fā)生。

（4）PCV-2 的感染及引起疾病已經(jīng)成為全球養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的一大問(wèn)題，這是繼豬繁殖與呼吸綜合征之后出現(xiàn)的又一重大養(yǎng)豬業(yè)的疾病。歐美等國(guó)至今對(duì)PCV-2 感染的控制仍是束手無(wú)策普遍采取的策略是控制繼發(fā)感染，所以，對(duì)豬圓環(huán)病的控制不僅應(yīng)在做好豬場(chǎng)的衛(wèi)生消毒工作、應(yīng)激因素的降低或避免、飼養(yǎng)管理水平的提高和改善斷奶仔豬的營(yíng)養(yǎng)水平的基礎(chǔ)上，還要重點(diǎn)采取藥物預(yù)防方案控制如豬副嗜血桿菌、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌、豬鏈球菌等其他病原菌的繼發(fā)感染，最大限度地降低豬群的死亡率，減少經(jīng)濟(jì)損失。

4　結(jié)論

結(jié)果說(shuō)明，豬圓環(huán)病毒病在昌寧縣已局部控制住流行態(tài)勢(shì)，建議豬場(chǎng)及時(shí)免疫疫苗，并對(duì)種豬群定期監(jiān)測(cè)和檢測(cè)等防預(yù)措施。定期進(jìn)行疫苗防控，并且保證畜舍衛(wèi)生，如定期滅鼠、驅(qū)趕蒼蠅蚊蟲等等，逐步減少疫病的發(fā)生，再進(jìn)一步防控疫病。

參考文獻(xiàn)

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［2］ 李海超，王娟，李一經(jīng)，等.八省份豬群豬圓環(huán)病毒2型與豬細(xì)環(huán)病毒混合感染的調(diào)查［J］.中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2013，43（12）：1313-1320.

［3］ 黎發(fā)金，諸云本，周劍敏.等豬圓環(huán)病毒病的危害及防控對(duì)策［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014，（18）：259-266.

［4］ 崔亞蘭，王開(kāi)功，張華，等.2007-2010年貴州省豬圓環(huán)病毒感染的流行病學(xué)調(diào)查［J］.畜牧與獸醫(yī)，2013，45（3）：70-73.

［5］ 魯富有，彭海生，解明華，等.普洱市豬圓環(huán)病毒-2型的血清學(xué)調(diào)查與分析［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2015，（1）：53-57.