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        不同稀釋液對禽流感H5血清抗體檢測結果的影響

        2016-06-03 08:33:41殷紅梅
        中國畜牧獸醫(yī)文摘 2016年4期
        關鍵詞:血清檢測

        殷紅梅

        (廣元市農(nóng)業(yè)局,四川廣元 628000)

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        不同稀釋液對禽流感H5血清抗體檢測結果的影響

        殷紅梅

        (廣元市農(nóng)業(yè)局,四川廣元 628000)

        [摘 要]本試驗通過血液凝集抑制試驗(HA)和血液凝集試驗(HI)試驗方法檢測禽流感H5抗體,分別使用PBS液(0.01mol/L,pH7.2)和生理鹽水作為稀釋液,檢測待測3份未知血清樣品,1份已知陽性血清和1份已知陰性血清,每份樣品做3個重復。經(jīng)χ2分析發(fā)現(xiàn),PBS液組和生理鹽水組檢測結果差異性不顯著(P>0.05)。試驗結果證明,在日常監(jiān)測中可以使用生理鹽水替代PBS液作為稀釋液通過血凝及血凝抑制試驗檢測禽流感H5血清抗體。

        [關鍵詞]禽流感血凝及血凝抑制PBS液生理鹽水

        當前畜牧業(yè)特別是養(yǎng)禽業(yè)快速發(fā)展,活禽及禽產(chǎn)品交易頻繁,加劇了禽流感發(fā)生風險,2015年農(nóng)業(yè)部公布高致病性禽流感疫情10起,2016年公布2起,涵蓋家禽和野生鳥類,近期四川省成都市青羊區(qū)發(fā)生1起人感染禽流感H5N1病例。國家和地方加強禽流感防控工作力度,在強化免疫的同時,也加強了禽流感抗原抗體監(jiān)測,監(jiān)測頻次和數(shù)量逐年增加。按照國標,禽流感抗體血凝及血凝抑制方法的緩沖液為PBS溶液。PBS溶液配備花的時間多,勞動量大,不利于大規(guī)模檢測。在不影響檢測結果的前提下,能將緩沖液替換為生理鹽水,可以大大減輕勞動量。

        1 材料及方法

        1.1試劑

        PBS液(0.01mol/L,pH7.2)、阿氏液和生理鹽水(8.5g/ L)。阿氏液的配制方法為:葡萄糖20.5g,檸檬酸鈉8g,檸檬酸0.55g,NaCl4.2g,加水至1000ml。

        1.2待檢血清和抗原

        禽流感H5抗原及陽性血清來源于哈維科生物;雞血清由廣元市昭化區(qū)獸醫(yī)實驗室提供。

        1.3檢測方法

        PBS組按GB 19442-2004,生理鹽水組將GB 19442-2004所有使用的PBS液更換為生理鹽水。

        2 結果

        2.1血凝試驗結果

        使用PBS液和生理鹽水作為稀釋液,均有3個重復一個血凝單位為29倍,1個重復為28倍,兩個處理均按29倍作為一個血凝單位。

        表1 不同稀釋液對禽流感H5血凝試驗的檢測結果

        2.2血凝抑制結果

        經(jīng)χ2檢驗,兩組試驗對血凝抑制結果差異性不顯著,P〉0.05。

        3 討論

        3.1影響HA和HI試驗的因素

        影響禽流感血凝及血凝抑制試驗結果的因素有血清樣品質(zhì)量、器材選用、操作水平、稀釋液、結果判定。膠凍樣血清樣品可能導致樣品量不足或出現(xiàn)非特異性凝集;溶血樣品影響結果判定。微量反應板對HA和HI試驗反應時間和反應結果具體一定影響,鞏薇等認為兔出血癥病毒HA和HI試驗使用90℃V型板和一次性U型板[1],禽流感防治技術規(guī)范(GB 19442-2004)和新城疫診斷技術規(guī)范(GB/T 16550-2008)要求HA和HI試驗使用90℃V型板。操作水平包括移液器使用、抗原配制以及紅細胞洗滌等因素均會影響檢測結果[2]。在環(huán)境溫度20℃~25℃,經(jīng)過15~30min即可讀出抗原效價和血清抗體滴度。當溫度過低,出現(xiàn)結果慢;環(huán)境溫度過高,超過30℃時,試驗結果出現(xiàn)快,一旦時間過長,結果就會消失,使整板無凝集現(xiàn)象。判讀試驗結果時,將微量反應板傾斜45℃,孔底沉淀的紅細胞流動呈淚珠樣流淌,邊緣無凝集顆粒者為凝集完全抑制;如果淚珠樣流淌線較細,可能是反應時間不夠,需靜置一段時間再判讀。

        表2 不同稀釋液對H5血凝抑制試驗的檢測結果

        3.2不同稀釋液對HA和HI試驗的影響

        禽流感防治技術規(guī)范(GB 19442-2004)中HA和HI試驗稀釋液為PBS液(0.01mol/L,PH7.2),新城疫診斷技術(GB/T 16550-2008)中HA和HI試驗稀釋液為生理鹽水。孫淑清等認為用PBS液(pH=7.2)測定的陽性血清抗體滴度比用生理鹽水高出一孔。雷莉輝認為pH=7.0時,紅細胞沉淀最充分,圖形最清晰。本試驗在B樣品出現(xiàn)PBS液血凝抑制結果比生理鹽水高一孔,其他樣品結果基本一致,總體結果經(jīng)χ2分析差異性不顯著。

        4 結論

        日常監(jiān)測中可以使用生理鹽水替代PBS液作為稀釋液通過血凝(HA)及血凝抑制(HI)試驗檢測禽流感H5血清抗體。

        參考文獻

        [1] 鞏薇,衛(wèi)禮,付瑞.兔出血癥病毒血凝試驗及血凝抑制試驗影響因素的探討[J]. 實驗動物科學與管理,2003,(20):7-10.

        [2] 常磊,孫婭莉,吳德喜,等.血凝和血凝抑制試驗的影響因素[J].中國家禽,2011,(16):57-58.

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