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        GnRH-A抗原主動免疫母羊?qū)ρ錖H激素濃度的作用

        2016-06-03 08:33:40郭春艷
        中國畜牧獸醫(yī)文摘 2016年4期

        郭春艷

        (招遠市畢郭畜牧獸醫(yī)站,山東煙臺 264000)

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        GnRH-A抗原主動免疫母羊?qū)ρ錖H激素濃度的作用

        郭春艷

        (招遠市畢郭畜牧獸醫(yī)站,山東煙臺 264000)

        [摘 要]目的:探討促性腺激素釋放激素的類物-A(GnRH-A)對動物生殖激素LH調(diào)節(jié)的效果和作用機理。方法:以EDC.HCL為耦合劑,將GnRH-A與BSA連接為復合物,再加入弗氏不完全佐劑制成抗原乳劑;30只小尾寒羊與山東省招遠市本地羊雜交的F1代隨機分成6組,每組注射不同劑量的抗原,用ELISA法測定血清LH激素含量。

        [關(guān)鍵詞]促性腺激素釋放類似物-A(GnRH-A) 抗原制備 LH 綿羊

        1 實驗材料和方法

        1.1實驗材料

        1.1.1實驗動物

        5~6月齡母綿羊30只,體重24.21±2.51kg,隨機均分為6組(n=5),分別標記為EG-Ⅰ、EG-Ⅱ、EG-Ⅲ、EG-Ⅳ、EG-Ⅴ和CG(對照組)。預飼15d。

        1.1.2試劑和藥物

        (1)促性腺激素的釋放類似物GnRH-A

        (2)1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亞胺鹽酸鹽(3)牛血清白蛋白

        (4)弗氏不完全佐劑

        (5)培養(yǎng)基:硫乙醇酸培養(yǎng)基、酪胨瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖白胨湯培養(yǎng)基

        1.2實驗方法

        1.2.1GnGH-A抗原的制備

        以碳二亞胺鹽酸鹽為耦合劑,將促性腺激素釋放激素類似物與牛血清白蛋白連接為復合物,再加入弗氏不完全佐劑制成抗原乳劑。

        對照液的制備除不使用促性腺激素釋放激素類似物外,其余方法與上述相同。

        1.2.2抗原注射見表1

        表1 各組實驗綿羊抗原注射劑量和時間

        1.2.3血樣采集

        分別在0d、7d、14d、21d、28d、35d、45d、60d和70d頸靜脈采血。采血前動物禁食12h,采集的血樣立即以2005~3000r/min離心10~15min,分離血清,-20℃保存。

        1.2.4檢測項目

        (1)GnRH抗體效價測定用ELASA法測定。

        (2)血清LH濃度測定 用綿羊LH酶聯(lián)免疫分析法(ELASA法)測定。

        (3)用回歸方程計算濃度。

        (4)數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析使用Spss18.0統(tǒng)計軟件包處理數(shù)據(jù),用平均值±標準差(±SD)表示,以 Tukey LSD 進行多重比較。P〈0.05表示差異顯著。

        2 實驗結(jié)果

        2.1測定值分析 見表1

        從表1得出,EG-I、EG-II 、EG-III 、EG-IV、 EG-V,以及對照組在注射抗原起35d處理組之間無差異性,45d時EG-IV與EG-V 血清LH濃度差異顯著,EG-IV組LH水平高于EG-V;70d時血清LH濃度抗原組與對照組差異顯著,并且在70d抗原組LH濃度顯著高于對照組,猶以EG-3最為明顯。

        2.2血清LH測定值

        通過試驗可看出各組LH濃度在注射抗原起到35d之間始終保持在一個穩(wěn)定的波動范圍內(nèi),從35d起都開始上升,EG-III急劇上升,抗原組變動平穩(wěn),但總體水平顯著高于對照組。在70dEGIIIEG-IVEG-V對照組都有所下降,但對照組下降更快,抗原各組總體水平顯著高于對照組,并且以黃線(EG-III)最顯著。

        3 結(jié)論

        自抗原注射起至45d,GnRH-A對綿羊機體無影響,實驗的第 45d時GnRH-A加強免疫可以增強綿羊分泌LH激素;第70d時GnRH-A主動免疫綿羊?qū)ρ錖H激素的作用是增強的?!纒(ng/L)

        表1 母羊血清LH測定值

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