●周小麗 趙媛 關圓圓

地黃飲子腦脊液藥物化學研究

●周小麗 趙媛 關圓圓

目的：研究地黃飲子腦脊液藥物化學特性。方法：應用UPLC-MS分析地黃飲子用藥后血清樣品情況，對比不同樣品結果，將血中移行成分、代謝產(chǎn)物與生藥來源確定下來。結果：經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)家兔血清中有9個血中移行成分，有1個產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，2個為黃飲子的原型成分，遠志、五味子藥物貢獻最大，其次為山茱萸、肉芙蓉、附子、麥冬、石菖蒲。結論：深入研究地黃飲子血中移行成分與代謝情況，為藥物正確使用提供了依據(jù)，有助于進一步分析藥物有效成分與作用。

地黃飲子；腦脊液；藥物化學

傳統(tǒng)藥物化學方法是中藥血清藥物化學的基礎，使用現(xiàn)代科技，可以有效對口服中藥后血清成分進行檢測，對藥效相關性進行研究，是一門研究中藥藥效的科學。地黃飲子最早出現(xiàn)在《黃帝素問宣明論方》記載中，用于痰濁上乏、元虛衰的治療。當前，地黃飲子已被當成一種中藥使用，從黃飲子成分著手，分析其中藥血清藥物化學，明確代謝產(chǎn)物，可將藥效物質基礎確定下來，為臨床應用提供指導。

1 資料與方法

1.1 應用儀器

儀器：應用超高效液相色譜儀、三重四級桿串聯(lián)質譜儀、UPLC-MS聯(lián)用系統(tǒng)，應用XR-ODSII（3.0mm×65mm）色普柱（SHIMADZU），高速冷凍離心機（TGL-15G-C），H56MC型超聲震蕩儀；SK-I快速混合器[1]。藥材與試劑：所有藥材有熟地黃、山茱萸、五味子、石斛、肉桂、大棗、生姜、石菖蒲、薄荷等；甲酸胺與五味子醇甲適量。實驗動物為家養(yǎng)白兔，體重1.7～3.2kg。

1.2 方法

（1）制備地黃飲子與單味藥材取黃飲子8味藥材，每個藥材10g，各藥材充分混合然后研磨成粉末，將研磨好的混合粉末放到烤箱中，烘烤片刻，使藥物保持恒重，取2g粉末與單味藥材粉末50g，放置在12mL的稱量瓶內(nèi)，滴入適量甲醇溶液，讓甲醇充分浸泡30min，然后超聲20min，分離出清液，保持2000r·min-1離心頻率，12min后調(diào)整為0.55um濾膜，選取濾出液作為標本溶液。

（2）制備五味子甲醇對照溶液稱重10mg的五味子，將其放置在40mL的稱量瓶內(nèi)，添加適當?shù)募状既芤海浞謸u晃量瓶，使溶液混合稀釋[2]，得到對照溶液。

（3）制備血清樣品。稱取15g的黃飲子組方藥材，混合后滴入1200mL的乙醇試劑，充分對藥液進行浸泡，第二天對藥液進行超聲離心20min，過濾藥液時應用3層紗布，對濃縮后的藥液添加蒸餾水再次稀釋，稀釋出200mL藥液作為復方灌胃藥液。取單味藥各10g，混合后添加乙醇溶液100mL，超聲離心20min[3]，后使用紗布過濾，添加蒸餾水稀釋出200mL，將此部分溶液作為單味藥灌胃藥液。

1.3 樣本分析

取以上樣品，在相同環(huán)境下應用UPLC-MS分析并確定血中移行成分與來源。

2 結果

2.1 對地黃飲子血中移行成分進行認定

對比地黃飲子復方血清樣品與空白血清樣品，繪制色譜圖，對不同色譜段保留時間與分子峰數(shù)據(jù)進行分析，發(fā)現(xiàn)黃飲子復方血清樣品中存在9個移動成分，其保留時間為6.12min，有510個相對分子質量的成分；保留時間為5.06min，其中有154個相對分子質量成分；保留時間6.02min，相對分子質量為215的成分[4]。圖1為某段UPLC-MS分析提取離子色譜。

圖1 地黃飲子復方給藥血清與空白血清樣品UPLC-MS分析提取離子色譜

2.2 地黃飲子血中移行成分來源

通過對比復方樣本與單味藥材樣本、血清樣本，可以對地黃飲子血中移行成分生藥來源與歸屬進行辨別與確認。經(jīng)過五味子樣品、血清本品、無味子醇甲與對照樣品的對比，6號五味子醇甲保留時間無差異，在相對分子質量上兩者相同，可以確定生藥來源于五味子醇甲（詳見圖2）。剩余地黃飲子血中移行成分歸屬與6號存在相似性。其中，1號成分進入血液以后，產(chǎn)生了代謝產(chǎn)物，而2號成分進入血液中的成為為石菖蒲；3號成分為遠志；4號成為與5號成分分別來源于麥冬與遠志與附子；7、8號成分來源于巴戟天與山茱萸[5]；9號成為來源于肉蓯蓉。從以上來源藥物上看，五味子與遠志成分貢獻最大。

圖2 五味子醇甲、體外樣本、血清樣本、地黃飲子復方給藥血清與空白血清樣品UPLC-MS分析提取離子色譜

3 討論

本次研究對黃飲子的血清藥物化學成分與作用機制進行了闡明，分析了地黃飲子血中移行成分，發(fā)現(xiàn)遠志與五味子是最重要的兩個來源藥材。地黃飲子最早出自《黃帝內(nèi)經(jīng)》的相關描述中，功效較多，以滋腎陰、開竅化痰、補腎陽為主可以有效治療冠心病、腦血栓等心腦血管疾??；對中風、神經(jīng)性皮炎以及腦血管意外有顯著預防與治療作用；五味子在生津、收汗以及澀精等方面有著顯著效果，可有效改善中樞神經(jīng)功能，預防心血管疾病，抗血栓的功效也非常顯著，在抗鎮(zhèn)靜、催眠上功效已達到認可；藥物成分中，遠志的安神補腦與開竅化痰的效果顯著，相關報道還顯示消腫功效與遠志成分有關。而對神經(jīng)的作用則體現(xiàn)在體力、智力提升，鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗癡呆上。本次研究顯示，地黃飲子中五味子與遠志發(fā)揮了重要功效，也是地黃飲子藥效顯著的重要原因。本次研究證實了這一結論，可以確定五味子與遠志是治療心腦血管疾病的有效藥物、這一結果為藥效判定提供了更為科學依據(jù)，為其他相關研究提供了更為可靠支持。

綜上所述，經(jīng)過以上臨床研究表明，地黃飲子在治療心腦血管疾病與老年癡呆上作用顯著，可有效改善中樞神經(jīng)功能，減少產(chǎn)生退行性疾病，減少認知障礙。

（作者單位：新鄉(xiāng)醫(yī)學院三全學院）