錢金鋒，楊其昌，謝慧君，張曉娟，沈　屹，高翠玉

(1. 江蘇省南通市第一人民醫(yī)院，江蘇 南通 226001；2. 江蘇省南通瑞慈醫(yī)院，江蘇 南通 226010)

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CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及意義

錢金鋒1，楊其昌1，謝慧君2，張曉娟1，沈屹1，高翠玉1

(1. 江蘇省南通市第一人民醫(yī)院，江蘇 南通 226001；2. 江蘇省南通瑞慈醫(yī)院，江蘇 南通 226010)

[摘要]目的探討CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測118例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的癌組織及相應(yīng)30例癌旁正常乳腺組織中CyclinD1和Survivin的表達(dá)情況，分析二者表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的臨床病理因素(年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、TNM分期)、內(nèi)分泌表型(ER、PR)及預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin陽性表達(dá)率明顯高于正常乳腺組織(P均<0.05)。乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin陽性表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級和TNM分期呈正相關(guān)，與其他臨床病理因素和內(nèi)分泌表型無關(guān)。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示，CyclinD1和Survivin陽性表達(dá)越強，無瘤生存時間越短(P<0.05)。結(jié)論CyclinD1和Survivin的過表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌生物學(xué)行為密切相關(guān)，對判斷腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后具有一定價值。

[關(guān)鍵詞]乳腺浸潤性導(dǎo)管癌；CyclinD1；Survivin

乳腺癌居我國女性最常見的惡性腫瘤第2位，每年新發(fā)病例達(dá)16.9萬，每年女性因乳腺癌死亡的病例約4.5萬[1]。從微觀的角度研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機制，尋找乳腺癌轉(zhuǎn)移潛力及影響轉(zhuǎn)移的相關(guān)因子，對乳腺癌的診斷和治療具有十分重要的意義。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測了乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的癌組織及相應(yīng)癌旁正常乳腺組織中CyclinD1和Survivin的表達(dá)情況，并分析了二者表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者臨床病理特征、內(nèi)分泌表型(ER、PR)及預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1臨床資料

1.1一般資料收集2002年11月—2010年8月南通瑞慈醫(yī)院病理確診的118例女性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者標(biāo)本，患者年齡32～84歲，平均51歲。同時切取其中30例癌旁正常乳腺組織作為對照。

1.2方法手術(shù)切除標(biāo)本均用10%福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，并進(jìn)行HE和免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)染色采用SP法[2]，試劑均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。檢測118例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的癌組織及相應(yīng)30例癌旁正常乳腺組織中CyclinD1和Survivin的表達(dá)情況，分析二者表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的臨床病理因素(年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、TNM分期)、內(nèi)分泌表型(ER、PR)及預(yù)后之間的關(guān)系。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)CyclinD1陽性細(xì)胞著色定位于腫瘤細(xì)胞胞核，浸潤性腫瘤細(xì)胞無著色為陰性(-)，≤50%的腫瘤細(xì)胞胞核著色為弱表達(dá)(+)，>50%的腫瘤細(xì)胞胞核著色為強表達(dá)()[3]。Survivin陽性細(xì)胞著色定位于癌細(xì)胞胞漿，浸潤性腫瘤細(xì)胞無著色為陰性(-)，≤50%的腫瘤細(xì)胞胞漿著色為弱表達(dá)(+)，>50%的腫瘤細(xì)胞胞漿著色為強表達(dá)()[3]。ER和PR陽性細(xì)胞著色定位于腫瘤細(xì)胞胞核，腫瘤細(xì)胞無著色為陰性(-)，≤30%的腫瘤細(xì)胞胞核著色為弱表達(dá)(+)，>30%的腫瘤細(xì)胞胞核著色為強表達(dá)()[4]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法本研究中數(shù)據(jù)運用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料的比較采用雙側(cè)卡方檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。對所有隨訪結(jié)果進(jìn)行分析，采用Log-rank檢驗并做出Kaplan-Meier生存曲線。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1CyclinD1和Survivin蛋白表達(dá)情況CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中陽性表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果見圖1～4。乳腺浸潤性導(dǎo)管癌癌組織中CyclinD1和Survivin的陽性表達(dá)率明顯高于正常乳腺組織(P均<0.05)，見表1。

圖1　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1弱表達(dá)表現(xiàn)(SP，×200)

圖2　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1強表達(dá)表現(xiàn)(SP，×200)

2.2CyclinD1和Survivin蛋白表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者臨床病理因素及內(nèi)分泌表型的關(guān)系CyclinD1和Survivin蛋白在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的陽性表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級和TNM分期呈正相關(guān)(P均<0.05)，與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小和內(nèi)分泌表型無相關(guān)性(P均>0.05)。見表2。

圖3　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Survivin弱表達(dá)表現(xiàn)(SP，×200)

圖4　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Survivin強表達(dá)表現(xiàn)(SP，×200)

例

2.3乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)關(guān)系Survivin在CyclinD1陰性的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的陽性表達(dá)率為43.5%(20/46)，在CyclinD1弱表達(dá)的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的陽性表達(dá)率為68.8%(42/61)，在CyclinD1強表達(dá)的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)率為72.7%(8/11)。相關(guān)分析顯示，Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)與CyclinD1陽性表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

2.4乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性本研究共隨訪到102例，隨訪1～98個月，隨訪率為86.4%。5年、3年、1年總生存率分別為65.7%(67/102)、81.4%(83/102)及95.1%(97/102)。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示：CyclinD1(-)、(+)及()表達(dá)者5年總生存率分別為80.0%(8/10)、43.4%(23/53)及10.3%(4/39)，CyclinD1陽性表達(dá)越強，無瘤生存時間越短(P<

表2　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征及內(nèi)分泌表型的關(guān)系　例

表3　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白

圖5　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1表達(dá)對預(yù)后影響的生存曲線

3討論

圖6　乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Survivin表達(dá)對預(yù)后影響的生存曲線

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多基因參與、多階段、多步驟的復(fù)雜過程，包括癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞程序性死亡減少等[5]。近年來的研究表明CyclinD1和Survivin是參與腫瘤細(xì)胞增殖與抗凋亡的重要因子[3，6-8]。

CyclinD1是周期素依賴激酶的調(diào)節(jié)因子，作用于G1期，參與G0/G1期的轉(zhuǎn)換調(diào)控，是細(xì)胞周期的正性調(diào)控因子[9]，能夠促進(jìn)DNA的合成，加速細(xì)胞增殖，并且與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。CyclinD1是Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的靶基因，當(dāng)Wnt信號通路被激活，使β-catenin在細(xì)胞漿中聚集并形成復(fù)合物[10]，從而激活CyclinD1基因轉(zhuǎn)錄[11]。有研究證實，CyclinD1的擴增與過表達(dá)與人體多種腫瘤有關(guān)[12-13]。本研究結(jié)果顯示，CyclinD1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，表明CyclinD1陽性表達(dá)在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵性作用。CyclinD1陽性表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級和TNM分期呈正相關(guān)，與其他臨床病理特征和內(nèi)分泌表型無顯著相關(guān)性，并發(fā)現(xiàn)隨著CyclinD1陽性表達(dá)的增強，患者無瘤生存時間縮短。提示CyclinD1的過表達(dá)預(yù)示著患者的預(yù)后不良及低生存率，進(jìn)一步顯示CyclinD1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用，對臨床的早期診斷和預(yù)后評估具有重要意義。

Survivin是近年來發(fā)現(xiàn)的凋亡蛋白抑制因子(IAP)的家族成員之一，在多數(shù)腫瘤中均有表達(dá)，具有細(xì)胞周期依賴性和明顯的組織選擇性，其與腫瘤新生毛細(xì)血管的形成有關(guān)[14]。Survivin高表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的多種誘導(dǎo)途徑，比如P53、Fas、 Casepase 等途徑，從而促進(jìn)其增殖，腫瘤病程的進(jìn)展同Survivin的表達(dá)密切相關(guān)[15-16]。Wu等[17]研究發(fā)現(xiàn)Survivin在腫瘤組織中高表達(dá)可以促進(jìn)VEGF誘導(dǎo)新生毛細(xì)血管的形成、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和毛細(xì)血管網(wǎng)形成，為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供豐富的血供。 另外，Survivin在細(xì)胞有絲分裂中也有重要作用[18]，如卵裂溝的形成、微管的聚合和胞質(zhì)的分裂；Survivin在腫瘤組織中強表達(dá)可以使腫瘤細(xì)胞的周期縮短，跳過G2/M期的檢查點，完成異常有絲分裂，使腫瘤細(xì)胞逃避凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織，提示其可能與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生相關(guān)，是其形成的重要因素；且Survivin表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級和TNM分期呈正相關(guān)，與其他臨床病理特征和內(nèi)分泌表型無顯著相關(guān)性，提示Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等過程中起著重要作用。本研究結(jié)果還顯示，隨著Survivin陽性表達(dá)的增強，患者無瘤生存時間越短，提示Survivin基因可作為乳腺癌預(yù)后判斷的指標(biāo)，其與患者的預(yù)后密切相關(guān)。

本研究結(jié)果還顯示，Survivin和CyclinD1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，與文獻(xiàn)[20-22]的報道一致，提示Survivin和CyclinD1在細(xì)胞周期調(diào)控中既有獨立的功能，又有協(xié)同作用，其機制可能為：CyclinD1過度表達(dá)，激活細(xì)胞周期依賴激酶4，從而加速細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，在G2/M期，Survivin抑制Caspase-3活性，抑制凋亡，加速增殖，共同導(dǎo)致細(xì)胞增殖與凋亡平衡破壞，從而發(fā)生癌變[23]。因此，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌前病變組織中聯(lián)合檢測Survivin和CyclinD1的表達(dá)，對于乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的早期診斷、治療以及預(yù)后有重要意義。

綜上所述，CyclinD1和Survivin的過表達(dá)均與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌生物學(xué)行為密切相關(guān)，對判斷腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后具有一定價值。臨床通過聯(lián)合檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CyclinD1和Survivin表達(dá)情況，能夠有效預(yù)測患者的預(yù)后。

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Expression and significance of CyclinD1 and Survivin in breast invasive ductal carcinoma

QIAN Jinfeng1, YANG Qichang1, XIE Huijun2，ZHANG Xiaojuan1,SHEN Yi1, GAO Cuiyu1

(1.The First People's Hospital of Nantong, Nantong 226001, Jiangsu, China; 2.Nantong RICH Hospital, Nantong 226010, Jiangsu, China)

Abstract:Objective It is to explore the expression and clinical significance of CyclinD1 and Survivin in breast invasive ductal carcinoma. Methods The expressions of CyclinD1 and Survivin in 118 cases of the invasive ductal carcinoma of breast and 30 cases of the corresponding normal tissues adjacent to cancer were detected by immunohistochemistry. The relationship of CyclinD1 and Survivin expressions to age, tumor site, tumor size, lymph node metastasis, histological grade, TNM stage, endocrine phenotype (such as ER, PR) and prognosis of the patients with invasive ductal carcinoma of breast was analyzed. Results The positive rates of the CyclinD1 and Survivin in the invasive ductal carcinoma of breast were significantly higher than those in the corresponding normal tissues adjacent to cancer (P<0.05).The positive expression of CyclinD1 and Survivin in the invasive ductal carcinoma tissue was positively related with the lymph node metastasis, histological grade and TNM stage (P<0.05), not related with other clinical factors and endocrine phenotype (P>0.05). The Kaplan-Meier survival curve analysis showed that the positive expression of CyclinD1 and Survivin were stronger, the tumor free survival time was shorter (P<0.05). Conclusion CyclinD1 and Survivin overexpression were closely related to the biological behavior of breast invasive ductal carcinoma, judging tumor invasion, metastasis and prognosis of a certain value.

Key words:breast invasive ductal carcinoma; CyclinD1;Survivin

[收稿日期]2015-11-02

[中圖分類號]R737.9

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)11-1151-05

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.11.003

[作者簡介]錢金鋒，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理方面的研究。[通信作者]楊其昌，E-mail：ntyangqc@163.com