董媛媛，劉石萍，孔衛(wèi)平，史延卿，王海利

(1. 河北省邯鄲市人民醫(yī)院，河北 邯鄲 056002；2. 河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001；3. 河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056001)

?

巨噬細(xì)胞移動抑制因子和血管內(nèi)皮生長因子在食管癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義

董媛媛1，劉石萍2，孔衛(wèi)平3，史延卿2，王海利1

(1. 河北省邯鄲市人民醫(yī)院，河北 邯鄲 056002；2. 河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001；3. 河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056001)

[摘要]目的研究巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義。方法選取食管鱗癌組織標(biāo)本58例為研究對象，同時選取癌旁正常食管組織標(biāo)本40份為正常對照，應(yīng)用微波EliVisionTM免疫組織化學(xué)法檢測2組組織標(biāo)本中MIF和VEGF的表達(dá)情況，并進(jìn)行分析研究。結(jié)果在食管鱗癌組織中MIF和VEGF陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常食管組織(P均<0.05)，表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。兩者的表達(dá)情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及病理分期有明顯關(guān)系(P均<0.05)；相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，MIF與VEGF呈正相關(guān)表達(dá)(P<0.05)。結(jié)論MIF和VEGF在食管鱗癌組織中陽性表達(dá)率高，二者表達(dá)情況在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮不同的作用，臨床上檢測二者可為評估食管鱗癌惡性程度提供參考。

[關(guān)鍵詞]食管鱗癌組織；MIF蛋白；VEGF蛋白；EliVisionTM免疫組化

食管癌是比較多見的惡性腫瘤，其發(fā)病率居惡性腫瘤發(fā)病的第6位，病死率居惡性腫瘤死亡的第4位。食管鱗癌屬于最主要的食管癌病理類型，是目前食管癌的主要研究對象?？紤]到因食管鱗癌的早期診斷比較困難，大多數(shù)患者出現(xiàn)臨床癥狀就診時已屬中、晚期，臨床亟待找到一種具有實(shí)用價值的解決方法。巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)在細(xì)胞增殖、凋亡等方面起著重要作用；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是血管新生的重要的促進(jìn)因子，血管的形成是腫瘤生長、浸潤、轉(zhuǎn)移和侵襲的基礎(chǔ)。本研究分析了二者在食管癌黏膜組織中的表達(dá)水平變化及與臨床病理特征的關(guān)系，旨在為食管癌的早期發(fā)現(xiàn)、監(jiān)測、預(yù)后的判斷,確定復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險提供依據(jù)。

1臨床資料

1.1一般資料選擇2011年1月—2013年12月邯鄲市人民醫(yī)院和邯鄲市中心醫(yī)院收治并存檔的58例食管鱗癌病例的蠟塊，男35例，女23例；年齡47～78歲，中位年齡63.6歲。由邯鄲市中心醫(yī)院高年資病理醫(yī)師按照WHO標(biāo)準(zhǔn)[1]對全部病例的切片進(jìn)行復(fù)查，均確保病歷資料的準(zhǔn)確性。并選取同期行食管鱗癌切除患者的食管上、下殘端40例作為正常食管黏膜組織進(jìn)行對照。

1.2方法采用微波EliVisionTM法, 參照文獻(xiàn)[2-3]報道方法操作，陽性對照切片為已知陽性食管癌切片，陰性對照切片為PBS緩沖液代替一抗。試劑盒、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及兔抗人MIF單克隆抗體和兔抗人VEGF多克隆抗體均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.3結(jié)果判斷MIF陽性主要定位于細(xì)胞核，VEGF陽性表達(dá)則主要定位于細(xì)胞質(zhì)，陽性信號以各種抗體在細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)取每張切片的5個高倍視野(×400)，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%～25%為(+)，>25%～50%為()，>50%為()。(～)為陽性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson方法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1MIF和VEGF在正常食管組織、食管鱗癌組織中的表達(dá)情況40例正常食管黏膜組織中MIF陽性表達(dá)4例(10%)，VEGF陽性表達(dá)7例(18%)；58例食管鱗癌組織中MIF陽性表達(dá)35例(62%)，VEGF陽性表達(dá)44例(76%)。2組MIF及VEGF陽性表達(dá)率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。MIF和VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況見圖1和圖2。

圖1　MIF在食管鱗癌組織中的表達(dá)(×400)

2.2食管鱗癌中MIF和VEGF的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系食管鱗癌中MIF和VEGF的表達(dá)與組織學(xué)分級、臨床病理分期、肌層浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

2.3食管鱗癌組織中MIF和VEGF的相關(guān)性分析食管鱗癌組織中MIF和VEGF的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=-3.233，P<0.05)。見表2。

圖2　VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)(×400)

例

表2　MIF和VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)相關(guān)性　例

3討論

MIF 是一種由活化T 細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，是一種獨(dú)特的促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)生的細(xì)胞因子，可以抑制腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞的游走， 參與多種細(xì)胞的生物學(xué)功能，如影響正常細(xì)胞的有絲分裂和惡性細(xì)胞增殖、黏附、血管生成和器官纖維化等，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有密切關(guān)系。臨床上檢測發(fā)現(xiàn)MIF在正常人體血清中呈低水平表達(dá)，而在前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等[4-7]惡性腫瘤患者的血清中檢測到MIF呈過度表達(dá)。 研究證實(shí)MIF在腫瘤組織中的主要作用機(jī)制是誘導(dǎo)腫瘤血管生成和降解ECM及基底膜使其發(fā)展、浸潤，首先MIF誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞增加金屬蛋白酶(MMPs)的分泌[8]，MMPs是降解腫瘤組織ECM及基底膜的必要步驟；接著參與腫瘤的血管新生過程，血管生成需要白細(xì)胞介素(IL)和組織生長因子等促血管生長因子的調(diào)控，MIF可以通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞達(dá)到控制促血管生長因子分泌[9]。本研究結(jié)果顯示MIF在食管癌組織中表達(dá)水平明顯高于正常食管組織，說明MIF蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)水平的增高參與了食管鱗癌的發(fā)生。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在食管鱗癌組中MIF蛋白的表達(dá)與cTNM、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān) ，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中差異較為明顯，提示MIF蛋白高表達(dá)在食管癌的浸潤、進(jìn)展、發(fā)生轉(zhuǎn)移中發(fā)揮一定的促進(jìn)作用，其作用機(jī)制印證MIF蛋白通過降解腫瘤組織ECM及基底膜和促進(jìn)微血管形成等方面參與腫瘤轉(zhuǎn)移的各個環(huán)節(jié)。檢測其在食管鱗癌的水平高低有一定的臨床價值和實(shí)際意義。

腫瘤不管在轉(zhuǎn)移還是自身需要的營養(yǎng)均需要通道路徑提供運(yùn)輸，其中新生的血管扮演著重要的角色。新生血管不僅為腫瘤生長提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)，還為癌細(xì)胞播散提供途徑。有研究發(fā)現(xiàn)VEGF和MMPs共同作用可以通過降解血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)、降低血管屏障作用，使新生血管基底膜缺損加重[10]，并通過滲透作用，促進(jìn)大量的癌細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，從而在多種腫瘤的血管形成、浸潤、轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用[11]。檢測發(fā)現(xiàn)食管鱗癌患者血清中VEGF水平的升高[12]，反映出癌癥患者血清中VEGF水平升高從某種程度上促進(jìn)癌組織的發(fā)展，為腫瘤的侵襲性生長提供了條件，在腫瘤血管新生過程中起到重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)食管鱗癌組織中VEGF的表達(dá)水平與腫瘤分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)[13]，本研究也得到了相同的結(jié)果，這些證據(jù)證實(shí)VEGF和腫瘤分化、TNM分期等密切相關(guān)，提示VEGF在食管癌發(fā)展、浸潤過程中發(fā)揮了一定作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，MIF蛋白和VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，表明兩種蛋白的高表達(dá)在食管癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移過程中起到協(xié)同作用，MIF可能參與和促進(jìn)腫瘤血管生成，腫瘤血管新生是依賴于多因子調(diào)節(jié)的病理過程，其中VEGF是最重要的調(diào)節(jié)途徑之一。MIF可能是通過上調(diào)VEGF的表達(dá)，進(jìn)而刺激腫瘤血管新生或血管形成，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。聯(lián)合檢測MIF及VEGF表達(dá)情況，有助于臨床對食管癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后進(jìn)行評估，值得臨床推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Yoshinaga K,Ito K,Moriya T,et al. Roles of intrinsic angogenesis in hibitor, vasohibin,in cervical carcinomas[J]. Cancer Sci,2011,102(2):446-451

[2]宋文慶,武世伍,俞嵐,等. maspin在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與微血管密度的關(guān)系[J]. 中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2013,33(3),25-29

[3]李明珠,戴順東,齊新陽,等. 結(jié)直腸癌中δ-catenin的表達(dá)與癌細(xì)胞增殖狀態(tài)的相關(guān)性[J]. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,40(12)：1065-1068

[4]Bando H，Matsumoto G，Bando M,et al. Expression of maerophage migration inhibitory faetor in human breast cancer:association with nodal spread[J]. Jpn J Cancer Res,2002,93(4):389-396

[5]He XX,Yang J,Ding YW，et al. Increased epithelial and serum expression of migration inhibitory factor(MIF) in gastric cancer:potential role of MIF in gastric carcinogenesis[J]. Gut,2006,55(6):797-802

[6]White ES,Flaherty KR,Carskadon S,et al. Macrophage migration inhibitory faetor and CXC chemokine expression in non-small cell lung cancer:role in angiogenesis and Prognosis[J]. Clin Cancer Res,2003,9(2):853-860

[7]Akbar SM,Abe M,Murakami H,et al. Macrophage migation inhibitory factorin hepatocellular careinoma and liver cirrhosis:relevance to pathogenesis[J]. Cancer Lett,2001,171(2):125-132

[8]劉倩,楊紅,張尚福. MIF和CD147在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J]. 四川大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版,2010，41(1)：85-90

[9]鄧瑋,易永芬,閆田靜,等. 胃癌組織和細(xì)胞中P115、M IF的表達(dá)及意義[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2011,33(3):241-245

[10] 徐海濤,張慶廣,張連國,等. VEGF在食管鱗癌中的表達(dá)及意義[J]. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010，33(3):182-185

[11] Lee ES,Hua SW,Bell DH. Differences in cell proliferation and prognostics significance of prolifetating cell nuclear antigen and Ki-67 antigen immunoreaction in situ and invasive carcinomas of the extrahepatictract[J]. Cancer,2005,78(5):1001-1005

[12] 劉石萍,董媛媛,孔衛(wèi)平,等. MIF、MMP-9和VEGF在食管癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015，37(2):133-136

[13] Chen L,Ren GS,LI F,et al. ExPression of Livin and vaseular endothelial growth factor in different clinieal stages of human esophageal eareinoma[J]. World J Gastroenterol，2008，14(37):5749-5754

[收稿日期]2015-11-19

[中圖分類號]R735.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B

[文章編號]1008-8849(2016)12-1331-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.12.028