雷雨婷 彭麗 卓建芳

【摘要】目的：探討湖南地區(qū)克氏原螯蝦體表及體內(nèi)金黃色葡萄球菌細(xì)菌數(shù)量的具體分布，為控制小龍蝦的金葡菌及正確健康烹飪，衛(wèi)生食用小龍蝦提供參考。方法：通過從湖南省不同地區(qū)的20個(gè)市場共買來60只小龍蝦，在無菌操作下采集克氏原螯蝦體內(nèi)外的樣品并對金黃色葡萄球菌進(jìn)行分離培養(yǎng)與生化鑒定，并采用B-P平板法對分離的菌株進(jìn)行測定，以及體內(nèi)外對比分析。結(jié)果：湖南不同地區(qū)各市場的可是原螯蝦體內(nèi)外均有葡萄球菌的污染，且檢出率約為23.5%（P<0.05）。結(jié)論：湖南地區(qū)克氏原螯蝦金黃色葡萄葡萄球菌細(xì)菌數(shù)體表大于體內(nèi)。

【關(guān)鍵詞】湖南地區(qū)，克氏原螯蝦，金黃色葡萄球菌

創(chuàng)新性課題編號長醫(yī)教[2014]10號-68

克氏原鰲蝦，俗稱小龍蝦，也可以叫做紅鰲蝦或者淡水小龍蝦，原產(chǎn)于美國，是美國淡水蝦類養(yǎng)殖的重要品種。

金黃色葡萄球菌在自然界分布極廣，空氣、土壤、水以及人和動(dòng)物的體表粘膜等處均有可能存在。

本文以湖南各地區(qū)小龍蝦為研究對象，通過對金黃色葡萄球菌的鑒定及數(shù)目的檢測，確定其致病，指導(dǎo)人們健康營養(yǎng)食用小龍蝦。

一、材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)材料樣品來自湖南省不同地區(qū)的20個(gè)市場共60只克氏原螯蝦；Baird-Parker平板（北京奧博星生物技術(shù)有限公司）；BHI培養(yǎng)基（杭州百思生物技術(shù)有限公司）；兔血漿（北京奧博星生物技術(shù)有限公司）

2.實(shí)驗(yàn)方法

（一）提取樣品：在無菌將來自于湖南省不同地區(qū)的20個(gè)市場共60只克氏原螯蝦體表的殼和體內(nèi)內(nèi)臟分開提取并搗碎。

（二）制作BP平板

（三）金黃色葡萄球菌的分離及增菌培養(yǎng)

（）無菌稱取體內(nèi)外組織樣品各25g，分別放入裝有225ml生理鹽水中均質(zhì)，于8000r/min均質(zhì)2min，制成10：1稀釋液。

（1）分別無菌吸取上述10：1的稀釋液各1ml，注入裝有9ml生理鹽水的成100：1的稀釋液。

（2）重復(fù)上述步驟3次，直至制成100000：1的稀釋液，并做好相應(yīng)標(biāo)記。

（3）將上述步驟搖床培養(yǎng)的每試管稀釋液，分別吸取0.3ml、0.3ml、0.4ml涂布于BP平板，36±1℃培養(yǎng)45-48h。

（4）挑取BP平板上的可疑菌落1個(gè)或以上，分別接種到BHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，標(biāo)記好，36±1℃搖床培養(yǎng)18-24h。

二、結(jié)果

1.金黃色葡萄球菌的分離

從湖南不同地區(qū)20個(gè)市場采集的體內(nèi)外樣品不同濃度在B-P平板上分離生長情況不同（見表一），但菌株均為呈圓形、光滑突起、濕潤、直徑為1-2mm、顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。（體內(nèi)見圖一，體外見圖二）

2.金黃色葡萄球菌的生化鑒定

（一）革蘭染色

從BP平板上挑取疑似菌落進(jìn)行染色在鏡下均為葡萄串狀結(jié)構(gòu)。

（二）觸媒實(shí)驗(yàn)

從BP平板上挑取疑似菌落進(jìn)行實(shí)驗(yàn)均為陽性。

（三）凝固酶實(shí)驗(yàn)

陽性

3.金黃色葡萄球菌的藥敏實(shí)驗(yàn)

4.體內(nèi)外金黃色葡萄球菌的計(jì)數(shù)

體內(nèi)的金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)：220 CFU/ml

體外的金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)：15000 CFU/ml

三、討論

金黃色葡萄球菌是一種主要的食源性致病菌之一，國內(nèi)學(xué)者們對食品中金黃色葡萄球菌污染狀況進(jìn)行研究，其結(jié)果表明食品種類不同金葡菌的污染情況也不同，牛奶和速凍食品中的金葡菌污染情況已研究的很透徹，而本研究工作從長沙美食小龍蝦為思考點(diǎn)，從而開展對湖南地區(qū)克氏原鰲蝦體內(nèi)外金葡菌的測定及其對比分析，得到小龍蝦體內(nèi)外具體的金葡菌的細(xì)菌計(jì)數(shù)，從體內(nèi)外不同金葡菌的多少思考如何更好的在食用小龍蝦前進(jìn)行清洗、烹飪及食用，由于近年來食品安全隱患成為熱點(diǎn)，并且本研究結(jié)果對小龍蝦食品產(chǎn)業(yè)提供一定意義上的參考指導(dǎo)，并指導(dǎo)人們更健康營養(yǎng)食用小龍蝦。

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通訊作者：張瓊