劉艷萍 王思威 孫海濱

摘要：【目的】對(duì)除蟲脲在荔枝上的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為該藥在荔枝上的合理使用提供科學(xué)依據(jù)。【方法】通過(guò)建立除蟲脲在荔枝全果和果肉的前處理方法和液相色譜—二級(jí)管陣列紫外檢測(cè)器的儀器方法，對(duì)除蟲脲進(jìn)行定量分析；通過(guò)兩年（2013～2014年）兩地（廣東、廣西）的殘留試驗(yàn)，研究除蟲脲在荔枝上的殘留及消解動(dòng)態(tài)?！窘Y(jié)果】除蟲脲在荔枝果肉和全果上平均回收率分別為84.1%～84.8%和82.7%～84.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.9%～4.3%和3.2%～4.2%，最小檢出量為5×10-10 g ，在荔枝全果和果肉上的最低檢測(cè)濃度均為0.01 mg/kg。除蟲脲在荔枝上的消解半衰期為3.5～4.9 d；以125.0～187.5 mg/kg劑量、施用3～4次，采收間隔期為7和10 d時(shí)，荔枝果肉上的殘留量均小于0.01 mg/kg，全果上的殘留量分別為0.05～0.23和0.01～0.05 mg/kg?！窘Y(jié)論】除蟲脲在荔枝上防治荔枝蒂蛀蟲時(shí)施用劑量以125.0 mg/kg為宜，施藥次數(shù)3次，安全間隔期10 d。

關(guān)鍵詞： 除蟲脲；荔枝；殘留分析；使用評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)： S667.1；X592 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）11-1880-05

Abstract：【Objective】Safety of diflubenzuron in litchi was evaluated， in order to provide a scientific basis for rational use of diflubenzuron in litchi production. 【Method】An effective method was developed for quantitative analysis of diflubenzuron by HPLC-PDA（high performance liquid chromatography with photo-diode array） in whole fruit and flesh of litchi. Terminal residue and degradation dynamics of diflubenzuron in litchi were studied in Guangdong and Guangxi during 2013-2014. 【Result】Results showed that， spiked recoveries of diflubenzuron in whole fruit and flesh of litchi were 84.1%-84.8% and 82.7%-84.9%， respectively， with relative standard deviations of 2.9%-4.3% and 3.2%-4.2%. Limit of detection（LOD） was 5×10-10 g， and limit of quantification（LOQ） was 0.01 mg/kg in whole fruit and flesh. Half life of diflubenzuron in litchi was 3.5-4.9 d. Furthermore， terminal residues of diflubenzuron in flesh were less than 0.01 mg/kg， terminal residues of diflubenzuron in whole litchi were 0.05-0.23 and 0.01-0.05 mg/kg， respectively， when spraying 125.0-187.5 mg/kg diflubenzuron three or four times， and pre-harvest interval was 7 or 10 days. 【Conclusion】Recommended dosage of diflubenzuron is 125.0 mg/kg for prevention and control of Conopomorpha sinensis Bladley by spraying three times at pre-harvest interval of 10 days.

Key words： diflubenzuron； litchi； residue analysis； application evaluation

0 引言

【研究意義】除蟲脲（Diflubenzuron）是一種特異性低毒殺蟲劑，屬苯甲酰類，對(duì)害蟲有胃毒和觸殺作用，其通過(guò)抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成，使幼蟲在蛻皮時(shí)不能形成新表皮，導(dǎo)致蟲體成畸形而死亡。該藥對(duì)鱗翅目害蟲有特效，對(duì)天敵安全。荔枝（Litchi chinensis）是我國(guó)熱帶、南亞熱帶氣候區(qū)的特色水果，因色、香、味俱佳被譽(yù)為“果中之王”（王麗敏等，2014），但在荔枝整個(gè)生長(zhǎng)期常有荔枝蛀蒂蟲發(fā)生，特別在果實(shí)發(fā)育及成熟期為害，嚴(yán)重影響荔枝產(chǎn)量（姜子德等，2011）。當(dāng)前化學(xué)農(nóng)藥仍是荔枝生產(chǎn)上主要的病蟲害防治手段，其中除蟲脲是一種常用藥劑（高強(qiáng)，2011）。目前除蟲脲在我國(guó)荔枝上沒有登記，依據(jù)我國(guó)農(nóng)藥管理?xiàng)l例，農(nóng)藥登記后方可使用，但實(shí)際生產(chǎn)中存在該藥非法使用問(wèn)題，因此急需制定相應(yīng)的限量標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)該藥在荔枝上使用的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。【前人研究進(jìn)展】目前，除蟲脲的檢測(cè)多在蔬菜、水果、小麥和茶葉上。高曉輝等（1989）報(bào)道了蘋果和土壤中除蟲脲的降解情況，除蟲脲在蘋果中的半衰期為39～75 d，降解較慢，在土壤中為8～10 d，較在蘋果中快。黎其萬(wàn)等（2007）采用高效液相色譜法測(cè)定了雪蓮果中除蟲脲等3種農(nóng)藥的殘留，其中除蟲脲的檢出限為0.02 mg/kg。裴亞托（2007）采用高效液相色譜研究了除蟲脲在白菜和油菜上的殘留規(guī)律，結(jié)果表明，除蟲脲在白菜和油菜上的半衰期分別為9.1和10.0 d，其水冼去除率在60%以上。張清明等（2008）建立了梨中除蟲脲等3種苯甲酰脲類農(nóng)藥的殘留分析方法，方法的平均回收率為84%～98%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。唐淑軍等（2010）采用固相萃取小柱測(cè)定了蔬菜中除蟲脲的殘留，方法的平均回收率為98%～105%，變異系數(shù)為3.90%～7.75%，檢出限為0.008 mg/kg。蔡亞萍（2012）采用HPLC-MS/MS建立了茶葉中除蟲脲的檢測(cè)方法，方法的平均回收率為105%，檢出限為0.016 mg/kg?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)僅有除蟲脲在蔬菜、茶葉、小麥等基質(zhì)上的分析方法，以及除蟲脲在蘋果上的消解報(bào)道，尚無(wú)除蟲脲在荔枝上的殘留研究報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用高效液相色譜法（HPLC）建立除蟲脲在荔枝上的殘留檢測(cè)方法，研究除蟲脲在荔枝上的殘留消解動(dòng)態(tài)，明確除蟲脲在荔枝上的消解規(guī)律及最終殘留水平，為除蟲脲在荔枝上的合理使用及最大殘留限量的制定提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試?yán)笾ζ贩N為淮枝，分別來(lái)自廣東省廣州市黃埔區(qū)東圃果園和廣西南寧市江南區(qū)明陽(yáng)農(nóng)場(chǎng)；供試農(nóng)藥40%除蟲脲懸浮劑由績(jī)溪農(nóng)華生物科技有限公司生產(chǎn)。

儀器：Surveyor高效液相色譜儀，配二極管陣列紫外檢測(cè)器（PDA），美國(guó)菲尼根有限公司；T18-Basic高速勻質(zhì)器，德國(guó)IKA公司；0.45 μm Filter Unit濾膜，美國(guó)戴安（DIONEX）公司；Y-4水浴恒溫振蕩器，江蘇金壇金城國(guó)勝試驗(yàn)儀器廠；SHZ-Ⅲ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，無(wú)錫星海王生化設(shè)備有限公司；N-EVAP24氮吹儀，美國(guó)Organomation儀器有限公司。

試劑：除蟲脲標(biāo)準(zhǔn)品99.4%，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer Gmbh公司；丙酮、二氯甲烷、石油醚、無(wú)水硫酸鈉等試劑為分析純；弗羅里硅土、中性氧化鋁（層析用，60～100目）。

1. 2 田間試驗(yàn)方法

1. 2. 1 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照區(qū)、高劑量處理區(qū)、低劑量（推薦劑量）處理區(qū)和消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)區(qū)。參照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》，2013、2014年分別在廣東省廣州市黃埔區(qū)東圃果園和廣西南寧市江南區(qū)明陽(yáng)農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行40%除蟲脲懸浮劑在荔枝上殘留消解動(dòng)態(tài)和最終殘留試驗(yàn)。

1. 2. 2 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn) 每2株荔枝樹為一小區(qū)，設(shè)1個(gè)處理，3個(gè)重復(fù)。于荔枝生長(zhǎng)到成熟個(gè)體一半大小時(shí)，以40%除蟲脲懸浮劑按有效成分187.5 mg/L的劑量噴霧施藥1次，分別于施藥后當(dāng)天（2 h）及1、3、7、10、14、21、28和35 d采樣，每次從小區(qū)果樹的上、中、下部的內(nèi)、外側(cè)隨機(jī)采集不少于1 kg生長(zhǎng)正常、無(wú)病害的荔枝個(gè)體，去核，計(jì)核重后切碎混勻，四分法留500 g。樣品貯存于-20 ℃冰箱，待前處理及分析測(cè)定。

1. 2. 3 最終殘留試驗(yàn) 分別設(shè)推薦劑量125.0 mg/L及1.5倍推薦劑量187.5 mg/L 2個(gè)劑量處理，各噴藥3次和4次，小區(qū)按順序排列，每次施藥間隔7～10 d。每2株荔枝為一處理小區(qū)，3次重復(fù)。分別于末次施藥后7和10 d，從小區(qū)的上、中、下部的內(nèi)、外側(cè)隨機(jī)采集不少于2 kg生長(zhǎng)正常、無(wú)病害的荔枝個(gè)體。全果樣品：取1 kg荔枝，去核，計(jì)核重后切碎混勻；果肉樣品：取1 kg荔枝，除去果皮、果核，將果肉切碎后混勻。樣品均貯存于-20 ℃冰箱，待前處理及分析測(cè)定。

1. 3 分析方法

1. 3. 1 樣品前處理 荔枝全果和果肉：稱取20.00 g（精確至0.01 g）荔枝全果或果肉樣品，放入玻璃三角瓶中，加入60 mL丙酮，用高速勻質(zhì)器勻質(zhì)2 min，振蕩30 min，用60目石英砂作助濾劑抽濾，殘?jiān)?0 mL丙酮?jiǎng)蛸|(zhì)，抽濾，合并抽濾液。將丙酮抽濾液濃縮至約20 mL，加入10%氯化鈉溶液20 mL，用50 mL二氯甲烷萃取3次，二氯甲烷萃取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水后在50 ℃水浴上減壓濃縮至少許，用2 mL二氯甲烷/甲醇（95∶5，v/v）溶解，待柱凈化。

稱取2.00 g弗羅里硅土（5%減活）和1.00 g中性氧化鋁（5%減活）混合裝柱，柱頂與底端各加1.5 cm厚的無(wú)水硫酸鈉層，用15 mL石油醚預(yù)淋層析柱。將上述溶解物移入層析柱中，用50 mL二氯甲烷/甲醇（95∶5，v/v）混合液洗脫，收集；減壓濃縮至少量；用氣流吹干， 2 mL甲醇定容，供液相色譜測(cè)定。

1. 3. 2 儀器條件 液相色譜儀：菲尼根Surveyor 高效液相色譜儀配二極管陣列紫外檢測(cè)器（PDA）；色譜柱：依利特ODS2（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；柱箱溫度30 ℃；流動(dòng)相：乙腈∶水=85∶15（v/v），流速0.5 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，進(jìn)樣體積10 μL。

2 結(jié)果與分析

2. 1 分析方法的線性范圍、檢出限、準(zhǔn)確度及精密度

2. 1. 1 分析方法的靈敏度 在本研究設(shè)計(jì)條件下除蟲脲的最小檢出量為5×10-10 g。根據(jù)添加回收率試驗(yàn)，除蟲脲在荔枝全果、果肉中的最低檢測(cè)濃度均為0.01 mg/kg。

2. 1. 2 分析方法的線性關(guān)系 準(zhǔn)確稱取除蟲脲標(biāo)準(zhǔn)品并用乙腈溶解，稀釋配制成0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)液，然后分別進(jìn)樣10 μL，按含量（ng）—峰面積（Area/uV）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為

y=371641x-12523，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

2. 1. 3 分析方法的準(zhǔn)確度和精密度 準(zhǔn)確稱取空白荔枝（全果、果肉）樣品，進(jìn)行0.01、0.10、1.00 mg/kg 3個(gè)水平添加回收試驗(yàn)，每濃度5次重復(fù)，譜圖見圖1。按1.3.1的條件進(jìn)行提取、凈化和測(cè)定。計(jì)算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。從表1可以看出，當(dāng)添加水平在0.01～1.00 mg/kg范圍內(nèi)時(shí)，除蟲脲在荔枝果肉和全果中的平均回收率分別為84.1%～84.8%和82.7%～84.9%，RSD分別為2.9%～4.3%和3.2%～4.2%，符合殘留分析要求。

2. 2 除蟲脲在荔枝上的消解動(dòng)態(tài)

除蟲脲在荔枝上的消解動(dòng)態(tài)結(jié)果見表2和圖2。其在荔枝上的消解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，降解呈先快后慢并逐漸趨于平緩的趨勢(shì)。2013和2014年，廣東點(diǎn)荔枝上除蟲脲的原始沉積量分別為0.30和0.26 mg/kg，第7 d時(shí)其消解率分別為73.2%和81.5%，到第14 d時(shí)消解率達(dá)94.4%和98.5%，半衰期分別為4.4和4.7 d；2013和2014年，廣西點(diǎn)的原始沉積量分別為0.52和0.21 mg/kg，第7 d時(shí)消解率為76.5%和56.3%，到第14 d時(shí)消解率達(dá)93.9%和90.1%，半衰期分別為3.5和4.9 d。

2. 3 除蟲脲在荔枝上最終殘留量測(cè)定結(jié)果

2013和2014年，廣東、廣西兩地除蟲脲在不同施藥劑量及不同采樣期的最終殘留量測(cè)定結(jié)果見表3。由表3可知，40%除蟲脲懸浮劑分別按有效成分125.0和187.5 mg/L的劑量噴施3～4次，距末次施藥后7和10 d采樣，荔枝果肉中除蟲脲的殘留量均<0.01 mg/kg，施藥后7和10 d全果中的殘留量分別為0.05～0.23和0.01～0.05 mg/kg。

施藥后7 d，荔枝果肉占全果的比例為60%～75%，全果的除蟲脲殘留量是果肉的5～23倍，表明除蟲脲主要?dú)埓嬖诠ど稀?/p>

目前，我國(guó)、國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）、美國(guó)、澳大利亞等尚未制定除蟲脲在荔枝上的最大殘留限量（Maximum residue limit， MRL），歐盟為0.05 mg/kg。本研究結(jié)果表明，當(dāng)采收間隔期為7 d時(shí)荔枝全果中除蟲脲的殘留量超過(guò)0.05 mg/kg。因此，荔枝采收期除蟲脲的安全間隔期10 d較合適。

3 討論

本研究通過(guò)除蟲脲在廣東、廣西兩地荔枝中殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，證明除蟲脲殘留量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低，施藥14 d后其消解率均在90.0%以上，且半衰期較短，屬于易降解農(nóng)藥。最終殘留試驗(yàn)結(jié)果表明，除蟲脲在荔枝上的半衰期為3.5～4.9 d，與已報(bào)道的除蟲脲在白菜和油菜上半衰期分別為9.1和10.0 d（裴亞托，2007），在蘋果上39～75 d、土壤8～10 d（高曉輝等，1989）相比，本研究中除蟲脲在荔枝上的半衰期較在白菜、油菜和蘋果等作物上的明顯偏短，其原因可能與作物不同、氣候條件不一致等因素有關(guān)，且在廣東和廣西的荔枝采收期間多雨水，也是影響半衰期的主要因素。

根據(jù)公式：理論每日最大攝入量（TMDI）=農(nóng)藥每日允許攝入量（ADI，mg/kg）×體重（63 kg），F(xiàn)AO/WHO農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議（JMPR）制定除蟲脲的ADI值為0.02 mg/kg，參照我國(guó)膳食結(jié)構(gòu)中每日水果的消費(fèi)量約457 g（王隴德，2005），根據(jù)理論MRL=TMDI/水果消費(fèi)量，計(jì)算得除蟲脲的TMDI和理論MRL值分別為1.26和2.8 mg/kg。目前CAC和我國(guó)尚未制定除蟲脲在荔枝中的MRL值，歐盟制定的限量為0.05 mg/kg，根據(jù)本研究結(jié)果推薦我國(guó)除蟲脲在荔枝上的MRL為0.05 mg/kg。

本研究未進(jìn)行除蟲脲膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，僅根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果推薦荔枝上除蟲脲的最大殘留限量值，下一步工作將查詢除蟲脲在我國(guó)的登記使用情況及各國(guó)的限量標(biāo)準(zhǔn)制定情況，并依據(jù)我國(guó)的膳食數(shù)據(jù)進(jìn)行除蟲脲的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，除蟲脲在荔枝中的殘留消解符合一級(jí)動(dòng)力方程，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則，除蟲脲屬于易降解農(nóng)藥。依據(jù)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有技術(shù)資料及本研究結(jié)果，除蟲脲防治荔枝蒂蛀蟲用藥量以125.0 mg/kg為宜，施藥次數(shù)3次，安全間隔期10 d。推薦我國(guó)除蟲脲在荔枝上的MRL值為0.05 mg/kg。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）