唐新 鐘彩娜

（廣西康華藥業(yè)有限責任公司，廣西 南寧 530003）

【摘 要】目的：建立高效液相色譜法測定慈航顆粒中鹽酸水蘇堿的含量。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（5μm，4.6 mm×250 mm），乙腈-水（70∶30）為流動相，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為200nm。結(jié)果：鹽酸水蘇堿在50.24～502.40μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，r=0.999 2，平均回收率為98.37%，RSD=0.52%。結(jié)論：該法簡便、快速、專屬性好，結(jié)果準確、可靠。

【關鍵詞】慈航片；鹽酸水蘇堿；高效液相色譜法

【中圖分類號】R286 【文獻標識碼】A 【文章編號】1674-0688（2016）04-0079-03

慈航顆粒為部頒中成藥地方標準上升國家標準品種“慈航片”的升級換代品種，由益母草、當歸、川芎組成，具有逐瘀生新的功效。臨床上用于婦女經(jīng)血不調(diào)，瘤瘕痞塊，產(chǎn)后血暈，惡露不盡。方中君藥為益母草，性味辛苦涼，入心、肝、膀胱經(jīng)。具有活血、祛瘀、調(diào)經(jīng)、消水的功效。治月經(jīng)不調(diào)，胎漏難產(chǎn)，胞衣不下，產(chǎn)后血暈，淤血腹痛，崩中漏下，尿血，瀉血，癰腫瘡瘍。它具有促進子宮興奮和抗血小板聚集、改善冠脈循環(huán)、保護心臟、增強心血管的收縮、讓呼吸中樞興奮的藥理作用。它的主要有效成分為鹽酸水蘇堿[1]。臣藥當歸，性溫，味甘辛。歸心、肝、脾經(jīng)。補血和血，調(diào)經(jīng)止痛，潤燥滑腸。治月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉腹痛，癥瘕結(jié)聚，崩漏；血虛頭痛，眩暈，痿痹；腸燥便難，赤痢后重；癰疽瘡竊，跌撲損傷。臣藥川芎，辛，溫。歸肝、膽、心包經(jīng)?；钛袣?，祛風止痛。用于胸痹心痛，胸脅刺痛，跌撲腫痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，頭痛，風濕痹痛。目前，慈航片的含量測定方法是檢測阿魏酸的含量，因當歸和川芎均含有阿魏酸[2-3]，專屬性差，所以不能有效地排除相互干擾。本文改用高效液相色譜法測定君藥益母草中鹽酸水蘇堿的含量，可提高專屬性和結(jié)果的準確性，能夠有效地控制成品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技公司；Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱，5μm，4.6 mm×250 mm。

鹽酸水蘇堿對照品（中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110712-200508），乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷化鍵和硅膠為填料；以乙腈-水（70∶30）為流動相；檢測波長為200 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為室溫。

2.2 測定方法

精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，用甲醇溶解并稀釋成約含鹽酸水蘇堿0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液；另取慈航顆粒，捻碎混勻，精密稱取約10 g，置50 mL容量瓶中，加入適量甲醇搖勻，超聲處理30 min，取出，定容，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液；另取慈航空白樣品顆粒（缺益母草），捻碎混勻，精密稱取約10 g，置50 mL容量瓶中，加入適量甲醇搖勻，超聲處理30 min，取出，定容，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為空白溶液。取3種溶液各10μL，用外標法以主峰面積定量。

2.2.1 提取方法的選擇

考察超聲處理和過氧化鋁-活性炭洗脫兩種提取方法，具體如下。

（1）超聲處理：取本品，捻碎混勻，精密稱取約10 g，置50 mL容量瓶中，加入適量甲醇搖勻，超聲處理30 min，取出，定容，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。

（2）過氧化鋁-活性炭洗脫：取本品，捻碎混勻，精密稱取約10 g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，稱定重量，超聲（250 W，40 kHz）處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，過氧化鋁-活性炭柱（堿性氧化鋁5 g，濕法裝柱，上覆層析用40～60目活性炭2 g，甲醇預洗），收集甲醇洗脫液100 mL，蒸干，殘渣用流動相定容于10 mL量瓶中，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

結(jié)果：采用超聲處理方式得到供試品含量為1.05 mg/g，采用過氧化鋁-活性炭洗脫提取方式得到供試品含量為1.03 mg/g，相差0.02 mg，差別很小，考慮到超聲處理方法相對簡便，故本法采用超聲提取方法。

2.2.2 提取（超聲）時間的選擇

本試驗分別對提取時間15 min、30 min、45 min進行考察，結(jié)果提取時間分別為15 min、30 min、45 min時，樣品含量分別為0.92 mg/mL、1.03 mg/mL、1.04 mg/mL，提取時間為15 min時，鹽酸水蘇堿的含量最小，而提取時間為30 min和45 min時，其鹽酸水蘇堿含量相差不大，相對標準差為0.68%。為縮短檢驗時間、提高勞動效率考慮，最終確定提取時間為30 min。

2.3 色譜效果

在上述色譜條件下，各取以上3種溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖如圖1所示。

2.4 線性關系

精密稱取鹽酸水蘇堿對照品25.12 mg，放置于50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取以上對照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分別放置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以對照品含量為縱坐標，峰面積積分值為橫坐標繪制標準曲線，則回歸方程為Y=8.1958X+29.356，r=0.999 2，表明鹽酸水蘇堿在50.24～502.40μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗

取對照品溶液重復進樣5次，每次10 μL，測得鹽酸水蘇堿的峰面積的RSD為0.46%。

2.6 重復性實驗

對同一批慈航顆粒（批號131003），按正文擬訂的方法平行測定6份，結(jié)果鹽酸水蘇堿含量的平均值為1.05 mg/g（RSD=0.42%，n=6），結(jié)果表明，本法的重復性較好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

取同一供試品溶液（批號131003）在室溫下立即測定，放置4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h重新測定，結(jié)果峰面積測得值分別為1 567 089、1 598 012、

1 570 234、1 589 012、1 560 132、1 584 121、

1 562 131，平均值為1 575 189，RSD為0.86%，峰面積基本一致，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率實驗

稱取已知含量的慈航顆粒約10 g，共9份，精密稱定，放置于50 mL量瓶中，加甲醇適量，另分別精密量取鹽酸水蘇堿對照品溶液（含量為0.202 mg/mL）10 mL、10 mL、10 mL、15 mL、15 mL、15 mL、20 mL、20 mL、20 mL，分別加入以上量瓶中，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成3個不同濃度的供試品溶液各3份；分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。按外標法計算回收率分別為98.36%、99.03%、98.99%、98.87%、98.84%、97.53%、98.35%、97.55%、98.21%，平均回收率為98.37%，RSD為0.52%。

2.9 樣品測定

精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，用甲醇溶解并稀釋成約含鹽酸水蘇堿0.202 mg/mL的溶液，作為對照品溶液；另取慈航顆粒適量，捻碎混勻，精密稱取10 g，放置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇，搖勻，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。取2種溶液各10μL，用外標法以主峰面積定量（見表1）。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

鹽酸水蘇堿易溶于水和醇，因此采用甲醇溶解。

3.2 波長的選擇

在500～190 nm波長范圍進行掃描，結(jié)果顯示，鹽酸水蘇堿對照品溶液在200 nm波長處有最大吸收，故本法選200 nm為紫外檢測波長。

3.3 結(jié)論

本文建立的高效液相色譜法測定慈航顆粒中鹽酸水蘇堿的含量，結(jié)果較為準確，且簡便、快速、專屬性強、可靠。

參 考 文 獻

[1]萬斯斯，黃琳瑯.益母草及其成方制劑中鹽酸水蘇堿含量測定方法[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2010（19）：107-108.

[2]康軍.當歸化學成分及其藥理作用研究進展[J].中醫(yī)中藥，2005（23）：120.

[3]周江.川芎有效成分及其藥理作用研究概況[J].浙江中醫(yī)雜志，2007（10）：615-616.

[責任編輯：陳澤琦]

【作者簡介】唐新，男，廣西南寧人，廣西康華藥業(yè)有限責任公司執(zhí)業(yè)藥師，研究方向：新藥的研究及推廣；鐘彩娜，女，廣西南寧人，廣西康華藥業(yè)有限責任公司執(zhí)業(yè)藥師，研究方向：新藥的研究及推廣。