黃昌艷　周主貴　王曉國　盧家仕　關世凱　卜朝陽

摘要：【目的】研究防城港金花茶種子萌發(fā)及組培快繁技術，初步建立金花茶組織培養(yǎng)體系，為金花茶的組培快繁利用提供參考?！痉椒ā恳越鸹ú璺N子為外植體進行組織培養(yǎng)試驗，設置3個不同種子的發(fā)育程度處理、17個不同培養(yǎng)基的激素濃度處理，測定不同處理對金花茶種子萌發(fā)率、增殖系數、株高、葉片數等的影響，篩選出適宜金花茶組培苗生長的萌發(fā)、繼代和壯苗培養(yǎng)基?！窘Y果】選用胚乳直徑大于1.0 cm的金花茶種子接種于MS+GA3 1.0 mg/L培養(yǎng)基中，萌發(fā)率可達82.4%；金花茶組培苗增殖系數隨6-BA濃度增加呈先上升后下降的變化趨勢，當6-BA濃度為3.0 mg/L時增殖系數最大，達3.79；適宜金花茶壯苗生長的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，其平均株高、葉片數、莖粗等均優(yōu)于其他處理；在黃泥∶泥炭=1∶1組合處理下金花茶組培苗移栽生根率最高，達61%，成活率也較高，為90%。【結論】廣西防城港金花茶適宜的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為MS+GA3 1.0 mg/L、繼代增殖培養(yǎng)以MS+6-BA 3.0 mg/L效果較好、壯苗培養(yǎng)基以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L較適宜、黃泥∶泥炭=1∶1作為金花茶組培苗移栽基質最適宜。

關鍵詞： 金花茶；種子萌發(fā)；快速繁殖

中圖分類號： S685.14 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2016）05-0611-06

Abstract：【Objective】The present experiment was conducted to investigate seed germination and rapid propagation technologies of Camellia nitidissima from Fangchenggang，Guangxi， and establish its tissue culture system， in order to provide a basis for tissue culture and rapid propagation of C. nitidissima. 【Method】The tissue culture experiment was conducted with C. nitidissima seeds at 3 development degrees as explants and 17 kinds of culture media with different hormone concentrations. Then the effects of these treatments on seed germination rate， multiplication coefficient， plant height and leaf number were investigated， so as to screen optimal medium for multiplication and strengthening seedling culture. 【Result】The results showed that， the selected seeds with endosperm diameter of greater than 1.0 cm were inoculated into culture medium of MS+GA3 1.0 mg/L， and the germination rate was up to 82.4%. The multiplication coefficient first rose and then declined with increase of 6-BA concentration， when 6-BA was at 3.0 mg/L， the multiplication coefficient was up to 3.79. Moreover， the optimal culture medium for strengthening seedlings was MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L in this culture medium， the average plant height， average leaf number and average plant height were better than those in other kinds of culture media. When yellow mud/peat ratio in culture substrate for transplantation was 1∶1， the rooting rate of tissue-cultured seedling after transplanting were the highest（61%）， and the survive rate was up to 90%. 【Conclusion】The optimal culture medium for seed germination of Camellia nitidissima from Fangchenggang， Guangxi is MS+GA3 1.0 mg/L， and the optimal culture medium for multiplication is MS+6-BA 3.0 mg/L， the optimal culture medium for strengthening seedlings is MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L， the yellow mud/peat ratio of 1∶1 is optimum in culture substrate for transplantation.

Key words： Camellia nitidissima； seed germination； rapid propagation

0 引言

【研究意義】金花茶（Camellia nitidissima）是世界珍稀觀賞植物和種質資源，與銀杉、桫欏、珙桐等珍貴“植物活化石”齊名，國外稱之為神奇的東方魔茶，被譽為“植物界大熊貓”、“茶族皇后”，觀賞價值極高（韋霄等，2010）。金花茶不僅有較高的觀賞價值，還具有一定的藥用和營養(yǎng)價值，其葉和花為壯族民間用藥；此外，金花茶含有特殊的色澤遺傳基因，具有重要的科研價值。金花茶組植物在自然狀態(tài)下的自我繁殖能力較弱，對生長環(huán)境的要求較苛刻，而近年來人類對其不合理的采挖和利用導致其生境條件遭受嚴重破壞，致使金花茶組植物資源種群發(fā)展受到嚴重威脅。為有效保育金花茶組植物種質資源，通過人工快速繁育及栽培，可大力發(fā)展金花茶組植物種植業(yè)，充分發(fā)揮金花茶種質資源的應有價值?！厩叭搜芯窟M展】關于金花茶繁殖方面的研究國內已有一些報道。顏慕勤等（1988）研究了廣西7種金花茶的組織培養(yǎng)技術，篩選出適宜的培養(yǎng)基為改良ER培養(yǎng)基（ER培養(yǎng)基的硝態(tài)氮含量從472.2 mg/L減為374.6 mg/L，胺態(tài)氮含量從210.0 mg/L減為174.2 mg/L），產生胚狀體的培養(yǎng)基附加激素量為2，4-D 2.0 mg/L+BA 0.5 mg/L，產生叢生芽的激素為BA 2.0 mg/L+IAA 1.5 mg/L。楊成華等（1996）和蔣橋生等（2007）均認為金花茶在黃心土的扦插成活率最高。楊泉光等（2013）認為用河沙培育東興金花茶種子最有利于種苗的發(fā)育，其發(fā)芽率、苗高、須根數、須根長均優(yōu)于黃土和珍珠巖所培育的種苗。楊舒婷等（2013）報道崇左金花茶幼嫩葉片愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基為改良MS+5.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2，4-D；幼嫩莖段愈傷組織誘導最佳培養(yǎng)基為改良MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2，4-D；種子愈傷組織誘導最佳培養(yǎng)基為改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L 2，4-D。鄧蔭偉等（2014）研究表明，金花茶芽苗砧嫁接除萌的最佳時間以嫁接定植75 d剪除砧木萌芽時留葉2片待30 d再剪除全部砧木萌芽的處理最佳，該處理下嫁接苗成活的保存率、抽梢率均較好?！颈狙芯壳腥朦c】目前，已有利用金花茶種子進行組培快繁的研究報道，但不同品種對培養(yǎng)基的要求不同，不同激素對不同金花茶品種的效應也有所不同?！緮M解決的關鍵問題】采用金花茶種子進行組織培養(yǎng)研究，篩選出金花茶適宜的萌發(fā)、繼代、壯苗培養(yǎng)基，建立其快速繁殖體系，為金花茶的組培快繁利用提供技術依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

選取廣西防城港市原生種金花茶7～8成熟、尚未開裂、綠色、飽滿、無病蟲害的果實為供試材料。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 種子收集及處理 用毛刷刷干凈果實表面的雜質，然后用飽和洗衣粉水浸泡20 min，流水沖洗20 min；置于超凈工作臺用75%酒精浸泡15 min，無菌水洗3次，然后用解剖刀剖開果實，取出種子，放入0.1%升汞中浸泡7 min，無菌水洗4次，最后在接種盤中切開種皮，取出胚乳，接入誘導培養(yǎng)基中，將有胚芽的一端置于培養(yǎng)基底部，操作過程中不得傷及種子胚芽部分。

1. 2. 2 種子發(fā)育程度對萌發(fā)的影響 將獲取的胚乳視發(fā)育程度分為3個等級：?。ㄖ睆叫∮?.5 cm）、中（直徑為0.5～1.0 cm）、大（直徑大于1.0 cm）。將種子接入MS+GA3 1.0 mg/L培養(yǎng)基中，60 d后觀察種子萌發(fā)情況，統計萌發(fā)率并測量芽的高度。

培養(yǎng)基均采用MS為基本培養(yǎng)基，瓊脂0.45%，蔗糖3.00%，pH 5.8，經121 ℃滅菌23 min后冷卻使用；培養(yǎng)條件：光照強度1500～2000 lx，光照時間每天12～14 h，溫度（26±2）℃（下同）。

1. 2. 3 不同激素及濃度對種子萌發(fā)的影響 選取大小一致的胚乳分別接種到7個處理的誘導培養(yǎng)基（表2）中，60 d后觀察種子萌發(fā)情況，統計萌發(fā)率并測量芽的高度。

1. 2. 4 6-BA對組培苗繼代培養(yǎng)的影響 在初始繼代培養(yǎng)中，將胚乳及胚芽取出，切掉頂芽及部分胚乳，剩余部分接入繼代培養(yǎng)基；切除頂芽后，易產生側芽，形成芽團，隨著胚乳營養(yǎng)的逐步消耗，后期繼代培養(yǎng)中切除胚乳。試驗過程中，選擇芽的高度小于1.5 cm的小芽或芽團接入4個處理的繼代培養(yǎng)基（表3）中，接種前統計芽的數量，60 d后觀察植株生長情況，并統計總芽量，計算增殖系數。

增殖系數=總芽量/原芽量

1. 2. 5 不同培養(yǎng)基對壯苗的影響 將叢生芽取出，并把高于1.5 cm的小芽切出，接入6個壯苗培養(yǎng)基（表4）中，50 d后觀察植株生長情況，測量株高、莖粗，統計葉片數。

1. 2. 6 生根移栽 將壯苗過程中的小苗放置于煉苗室進行煉苗，煉苗溫度（25±7）℃，光照強度5000 lx，20 d后移栽。移栽前2 d，打開瓶蓋，讓小苗適應外部空氣濕度；取出小苗，洗去培養(yǎng)基，將小苗的基部置于750 mg/L IBA溶液中浸泡10 min，然后分別種植在純黃泥、純泥炭、黃泥∶泥炭=1∶1等3種基質中。調試自動噴淋系統，8：00～18：00期間每間隔1 h噴水1次，每次噴淋30～60 s，根據不同季節(jié)調整噴淋時間，一般夏季長、冬季短。60 d后，觀察植株生長情況，計算成活率、生根率。

1. 3 統計分析

試驗數據采用南京農業(yè)大學王紹華設計的STST方差分析軟件進行分析和差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2. 1 種子發(fā)育程度對萌發(fā)的影響

從表1可以看出，胚乳大小對萌發(fā)率影響顯著（P<0.05，下同），其中小等級處理與中、大等級處理間達極顯著差異水平（P<0.01，下同）；芽平均高度在3個等級處理間達極顯著差異水平，表現為胚乳直徑越大，萌發(fā)率越高。直徑小于0.5 cm的胚乳，其萌發(fā)率只有1.3%；直徑大于1.0 cm的胚乳，其萌發(fā)率可達89.3%，且萌發(fā)的芽粗壯，長出葉片，部分種子長出胚根，根毛多，部分胚芽長側芽。因此，選用胚乳直徑大于1.0 cm的種子作為初代材料萌發(fā)率最高（圖1）。

2. 3 6-BA對組培苗繼代培養(yǎng)的影響

從表3可以看出，隨著6-BA濃度的升高，金花茶組培苗的增殖系數先上升后下降，并在3.0 mg/L時達最大值（3.79），其增殖系數與其他處理間達極顯著差異水平，此時產生大量側芽，原芽單株長高變壯，部分葉片伸展（圖2）；當6-BA濃度為1.0 mg/L時，產生的側芽較少；當6-BA濃度為5.0 mg/L時，產生的側芽不但偏少，而且呈畸形、透明狀，生長緩慢，原芽的葉片易卷縮、掉落。因此，適宜金花茶繼代增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L。

2. 4 不同培養(yǎng)基對組培苗壯苗的影響

從表4可以看出，在相同NAA水平下，高濃度6-BA容易使金花茶組培苗長出側芽，但不利于單株變壯，因此壯苗適合選用較低濃度的6-BA；在低濃度6-BA下，添加0.05 mg/L NAA處理的長勢比不添加的長勢好，平均株高、葉片數、莖粗均優(yōu)于不添加的處理，但差異不顯著（圖3）；在高濃度6-BA處理下添加NAA容易使植株產生愈傷組織，但不利于單株變壯。研究還發(fā)現，添加活性炭1.0 mg/L的處理，組培苗的褐化程度降低，表明活性炭有利于減少金花茶在組培過程中因褐化而導致的死亡，但單株長勢不如未添加的好。綜合考慮，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L最適宜金花茶壯苗生長。

2. 5 基質對金花茶組培苗移栽的影響

從表5可以看出，3種基質中以純黃泥土處理金花茶組培苗的移栽成活率及生根率均最低，可能是由于純黃泥的基質黏性太高，透氣性差，不利于組培苗生長；純泥炭處理的金花茶組培苗移栽成活率較高，達92%，但該處理的生根率較低，只有39%；在黃泥∶泥炭=1∶1組合處理下金花茶組培苗移栽生根率最高，達61%，成活率也較高，為90%，添加泥炭能在一定程度上緩解黃泥土黏性太高的缺點，同時該處理的組培苗長勢好，根多且壯（圖4）。因此，選用黃泥∶泥炭=1∶1作為金花茶組培苗移栽基質最適宜。

3 討論

隨著金花茶市場的日漸走俏，種苗缺口不斷擴大，篩選出一種高效、快速的金花茶種苗繁育技術尤為重要。目前，金花茶人工繁殖方法以枝條扦插為主，但枝條扦插繁殖耗費的枝條多，成活率低，繁殖速度慢，不能滿足市場的需要，而采用組織培養(yǎng)技術進行金花茶離體培養(yǎng)，可以加快金花茶繁殖速度，并獲得大量組培苗。鄧桂英（2001）對我國金花茶研究的文獻進行了分析，從中得出金花茶研究的學科領域主要集中在遺傳育種、形態(tài)解剖與分類、種苗和木材等方面，雜交育種、染色體數目和核型、金花茶的分類與系統發(fā)育、營養(yǎng)繁殖和組織培養(yǎng)是其研究熱點。在金花茶外植體滅菌方面，楊舒婷等（2013）認為幼嫩葉片和種子滅菌的效果較好，幼嫩葉片較好的滅菌方法為洗潔精清洗外植體表面+流水沖洗30 min+75%酒精30 s+

0.1% HgCl2 5 min；種子較好的滅菌方法為洗潔精清洗外植體表面+流水沖洗30 min+75%酒精40 s+0.1% HgCl2 20～30 min+0.2% HgCl2 20 min。李桂娥等（2015）使用的滅菌方法為剝掉金花茶種子種皮，先用75%酒精表面消毒30～60 s，然后用5%～10%的NaClO溶液消毒20～30 min，最后在超凈工作臺上用無菌蒸餾水沖洗。本研究中用75%酒精浸泡果實15 min，無菌水洗3次，然后用解剖刀剖開果實，取出種子，放入0.1%升汞中浸泡7 min，無菌水洗4次，試驗中滅菌方法采用保留種皮滅菌，能更好地保護種胚，避免其受到升汞的毒害導致發(fā)芽率降低。莖段的消毒相對較難，普遍認為采用分段滅菌的方法效果較好（林莉和賴鐘雄，2005；楊舒婷等，2013），幼嫩莖段采用洗潔精清洗外植體表面+流水沖洗30 min+75%酒精25 s+

0.1% HgCl2 10 min+0.2% HgCl2 5 min的滅菌方法好；半木質化莖段采用洗潔精清洗外植體表面+流水沖洗30 min+75%酒精35 s+0.1% HgCl2 12 min+0.2% HgCl2 6 min的滅菌方法好。芽和花苞的消毒最難，采用NaClO原液+HgCl2分段滅菌，并逐次剝去外層苞片進行滅菌的方法也難以達到預期效果。

本研究結果表明，選用胚乳直徑大于1.0 cm的種子接種于MS+GA3 1.0 mg/L培養(yǎng)基中，種子萌發(fā)率可達82.4%，與周健等（2005）認為GA3能較好地促進茶樹芽頭生長成為小苗的試驗結果相似，但在金花茶組培文章中尚未見試用GA3進行種子誘導萌發(fā)的報道。

在愈傷組織誘導方面，金花茶的幼嫩葉片、幼嫩莖段和種子均可以進行愈傷組織誘導。在金花茶莖段離體培養(yǎng)方面，廖漢刃等（1987）報道以改良MS為基本培養(yǎng)基，附加6-BA 0.5～4.0 mg/L+IAA（或IBA）0.5～ 1.0 mg/L，腋芽同樣能生長成芽團和無根苗。林莉和賴鐘雄（2005）認為在10～11月采摘金花茶的幼嫩莖段較易獲得無菌芽，并篩選出適合誘導腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基：改良WPM附加2 mg/L 6-BA及0.5 mg/L IAA，萌發(fā)率達57.1%，芽苗在附加3 mg/L 6-BA及0.2 mg/L IAA的改良WPM培養(yǎng)基上增殖效果較好；王友生（2013）以3月采集的顯脈金花茶莖段為外植體進行研究，其最佳啟動培養(yǎng)基配方為WPM+6-BA 7 mg/L+NAA 0.25 mg/L；最佳增殖培養(yǎng)基為： 改良WPM（NO3-∶NH4+=2∶1）+

6-BA 5.00 mg/L+NAA 0.05 mg/L。本研究篩選出的金花茶繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L，未使用生長素。一般來說，在金花茶組培苗快速繁殖時，生長素的水平應低一些，因為高濃度的生長素會導致愈傷組織形成，而愈傷組織的形成會降低增殖系數。同時，高濃度的6-BA能有效降低愈傷組織形成，有利于芽的誘導和生長。在壯苗培養(yǎng)基中，本研究采用的是MS+ 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，與李桂娥等（2015）在專利中使用的IAA 0.5 mg/L差別較大，這兩種培養(yǎng)基均能促進金花茶組培苗單株變壯，可能是由于品種不同所致。

生根難是木本植物組織培養(yǎng)中常遇到的難題，主要與植物的基因型、采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件有關。在金花茶組培苗生根研究方面，瓶內生根的基本培養(yǎng)基多為1/2MS（廖漢刃等，1987；林莉和賴鐘雄，2005），添加的激素及濃度為IBA 3.0～4.0 mg/L或NAA 4.0～6.0 mg/L。李桂娥等（2015）先將獲得的金花茶無菌苗基部浸泡于800 mg/L的IBA溶液中15 min，然后轉接于MW 生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，生根率可達98%，根系發(fā)達，須根較多，因此今后可采用上述方法進行改進。從金花茶瓶外生根效果看，黃曉娜等（2014）利用200 mg/L IBA浸泡金花茶無菌苗10 min，種植于黃泥∶泥炭土=3∶1基質中，生根率達85%，高于本研究結果，可能是由于本研究選擇的激素濃度過高導致生根率低，今后要進行更多的對比試驗，篩選適宜的激素濃度、基質配比、移栽方式方法等，選出最優(yōu)的金花茶瓶外生根方法。

4 結論

本研究初步篩選出MS+GA3 1.0 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L可分別作為廣西防城港金花茶種子萌發(fā)、繼代增殖、壯苗的適宜培養(yǎng)基。

參考文獻：

鄧桂英. 2001. 我國金花茶研究的文獻分析[J]. 廣西熱帶農業(yè)，（1）：40-42.

Deng G Y. 2001. Literature analysis on Camellia nitidissima in China[J]. Guangxi Tropical Agriculture，（1）：40-42.

鄧蔭偉，馮玉能，鄧益德，唐生森. 2014. 金花茶芽苗砧嫁接除萌研究[J]. 園藝與種苗，（10）：22-24.

Deng Y W，Feng Y N，Deng Y D，Tang S S. 2014. Removing bud of seedling after grafting Camellia nitidissima[J]. Horticulture & Seed，（10）：22-24.

黃曉娜，葉品明，黃連冬，羅燕英. 2014. 金花茶組培苗試管外生根研究[J]. 安徽農業(yè)科學，42（18）：5751-5752.

Huang X N， Ye P M， Huang L D，Luo Y Y. 2014. Study on non-tube rootage for golden camellias tissue culture plantlet[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences， 42（18）：5751-5752.

蔣橋生，李潔維，李純，胡興華. 2007. 金花茶大棚設施扦插育苗技術[J]. 廣西園藝，18（4）：41-42.

Jiang Q S，Li J W，Li C，Hu X H. 2007. Technique of raising seedlings by cutting for Camellia nitidissima in greenhouse[J]. Guangxi Horticulture，18（4）：41-42.

李桂娥，李志輝，羅燕英，黃曉娜，蔣昌杰，黃連冬，文萍，葉品明. 2015. 一種金花茶組培繁殖方法：中國，104285813 A[P]. 2015-01-21.

Li G E， Li Z H， Luo Y Y， Huang X N， Jiang C J， Huang L D， Wen P， Ye P M. 2015. A method for propagation of Camellia nitidissima： China， 104285813 A[P]. 2015-01-21.

廖漢刃，周傳明，董學軍，李富福. 1987. 金花茶組織培養(yǎng)及其試管苗嫁接繁殖試驗初報[J]. 廣西農學院學報，（2）：66-70.

Liao H R，Zhou C M，Dong X J，Li F F. 1987. A report on the tissue culture of Camellia chrysantha and the graft propagation of their plantlet[J]. Journal of Guangxi Agricultural College， （2）：66-70.

林莉，賴鐘雄. 2005. 金花茶成年樹莖段離體器官發(fā)生[J]. 亞熱帶農業(yè)研究，1（4）：25-29.

Lin L， Lai Z X. 2005. In vitro organogenesis of stem sections from adult trees of Camellia nitidissima Chi.[J]. Subtropical Agriculture Research， 1（4）：25-29.

王友生. 2013. 顯脈金花茶無菌體系建立及增殖培養(yǎng)研究[J].福建林業(yè)科技，40（2）：73-77.

Wang Y S. 2013. Study on sterility system foundation and multiplication culture of Camellia euphlebia[J]. Journal of Fujian Forestry Science and Technology， 40（2）：73-77.

韋霄，柴勝豐，蔣運生，唐輝，李鋒，趙瑞峰. 2010. 珍稀瀕危植物金花茶種子繁殖和生物學特性研究[J]. 廣西植物， 30（2）：215-219.

Wei X， Chai S F， Jiang Y S， Tang H， Li F， Zhao R F. 2010. Seed reproduction and biological characteristics of Camellia nitidissima[J]. Guihaia， 30（2）：215-219.

顏慕勤，陳平，王以紅. 1988. 廣西七種金花茶的組織培養(yǎng)快速繁殖[J]. 實驗生物學報，21（1）：1-9.

Yan M Q，Chen P，Wang Y H. 1988. Rapid clonal propagation of seven species of Camellia chrysanthas of Guangxi[J]. Acta Biologine Experimentalis Sinica， 21（1）：1-9.

楊成華，張廷忠，方小平. 1996. 貴州2種金花茶的扦插繁殖試驗[J]. 林業(yè)科技通訊，（10）：23-24.

Yang C H，Zhang T Z，Fang X P. 1996. Cutting propagation test for two species of Camellia nitidissima in Guizhou[J]. Fo-

rest Science and Technology，（10）：23-24.

楊泉光，宋洪濤，張洪. 2013. 不同基質對東興金花茶種苗發(fā)育的影響[J]. 綠色科技，（12）：107-108.

Yang Q G，Song H T，Zhang H. 2013. Effects of different substrates on seedling of Camellia nitidissima[J]. Journal of Green Science and Technology，（12）：107-108.

楊舒婷，林茂，王華新，唐遒冥，龔建英，孫利娜. 2013. 崇左金花茶的外植體滅菌研究[J]. 北方園藝，（3）：124-126.

Yang S T， Lin M， Wang H X， Tang Q M， Gong J Y， Sun L N. 2013. Study on explants sterilization of Camellia chungtsoensis S. Y. Liang et L. D. Huang[J]. Northern Horticulture， （3）：124-126.

周健，成浩，王麗鴛. 2005. 茶樹組培快繁技術的優(yōu)化研究[J].茶葉科學，25（3）：172-176.

Zhou J， Cheng H， Wang L Y. 2005. The optimization research on tissue culture and rapid propagation of Camellia sinensis[J]. Journal of Tea Science， 25（3）：172-176.

（責任編輯 麻小燕）