林 晶,鐘培英,王 宇,李廣權(quán)
(成都三六三醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川成都 610041)
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混勻?qū)Σ煌4鏃l件下血清生化結(jié)果影響的研究
林晶,鐘培英,王宇,李廣權(quán)△
(成都三六三醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川成都 610041)
摘要:目的研究混勻?qū)Σ煌4鏃l件下的血清生化結(jié)果的影響。方法對(duì)收集的20例患者新鮮血清分別檢測(cè)常規(guī)生化項(xiàng)目后,各自分裝于4組編號(hào)相同的樣本管中,兩組置-20 ℃保存,一組4℃冰箱保存,一組室溫保存,24 h后檢測(cè)常規(guī)生化項(xiàng)目,對(duì)-20 ℃保存的兩組血清,一組不混勻檢測(cè),一組充分混勻后檢測(cè)。結(jié)果室溫放置24 h后血清生化結(jié)果與初始結(jié)果比較,除ALT,AST,TBIL,DBIL項(xiàng)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)外,其余項(xiàng)目差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);4 ℃冰箱放置24 h后血清生化結(jié)果與初始結(jié)果比較,除TBIL,DBIL項(xiàng)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)外,其余項(xiàng)目差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);-20 ℃保存血清,未混勻血清生化結(jié)果與初始結(jié)果比較,所有項(xiàng)目差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),充分混勻后血清生化結(jié)果與初始結(jié)果比較,所有項(xiàng)目差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論室溫和4 ℃冰箱保存的血清,各種化學(xué)成分的均一性不受影響;-20 ℃保存后的血清,復(fù)融后上層血清化學(xué)成分濃度明顯低于下層血清,為保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性,檢測(cè)前務(wù)必充分混勻。
關(guān)鍵詞:混勻;保存條件;冰凍保存;生化結(jié)果
臨床檢驗(yàn)工作中常有不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本,需在室溫、4 ℃冰箱或冰凍保存。而血液離開(kāi)人體后在不同的條件下會(huì)發(fā)生不同的反應(yīng)和作用,從而導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差[1]。如血液中的有形成分如紅細(xì)胞、白細(xì)胞等在室溫條件下放置一定時(shí)間,在試管中有自然沉降的現(xiàn)象。那么血清中的化學(xué)成分如糖、脂、蛋白、無(wú)機(jī)鹽等在常溫、4 ℃、冰凍不同保存條件下是否也存在自然沉降現(xiàn)象?目前未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此,本文主要研究血清樣本在不同儲(chǔ)存條件下保存一定時(shí)間后生化結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,現(xiàn)報(bào)道如下。
1材料與方法
1.1樣本來(lái)源收集當(dāng)天20例患者新鮮血清于20個(gè)樣本管中,20例血清標(biāo)本中至少10例標(biāo)本谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT),谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(AKP)、總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、尿素(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)項(xiàng)目中至少有一項(xiàng)或多項(xiàng)同時(shí)存在異常結(jié)果,溶血脂血標(biāo)本除外,每例研究對(duì)象血清確保4 mL以上。
1.2儀器與試劑儀器采用日本HITACHI7600-010生化儀。試劑:ALT、AST、GGT、AKP、TBIL、DBIL、BUN、Cr、HDL-C試劑由日本和光株式會(huì)社提供,UA、GLU、TG、TC、TP、ALB由四川邁克公司提供。多項(xiàng)目校準(zhǔn)液由德國(guó)羅氏公司提供(批號(hào):177955),質(zhì)控液(包括中值和高值)由英國(guó)朗道公司提供。
1.3方法(1)按實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)化操作程序(SOP),確保當(dāng)天的質(zhì)控結(jié)果通過(guò)后,將收集的20份樣本分別編上號(hào),并進(jìn)行ALT、AST、GGT、AKP、TBIL、DBIL、BUN、Cr、HDL-C、UA、GLU、TG、TC,TP、ALB檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果以初始結(jié)果表示。檢測(cè)后立即分裝在4組編號(hào)相同容量為1 mL有蓋樣本管中,每個(gè)樣本管分裝1 mL血清,分裝后密閉保存。將兩組樣本直立放置于-20 ℃冰箱保存,一組直立放置于4 ℃冰箱保存,一組置室溫(25 ℃)保存。(2)當(dāng)4組分裝血清保存24 h后,將室溫保存的血清和4 ℃冰箱保存的血清及時(shí)進(jìn)行上述生化指標(biāo)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果分別以室溫保存后結(jié)果和4 ℃保存后結(jié)果表示;將兩組-20 ℃保存血清取出室溫復(fù)融30 min后,將其中一組血清(確保不進(jìn)行任何形式的傾斜混勻)進(jìn)行上述生化指標(biāo)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果以未混勻結(jié)果表示;將另外一組-20 ℃保存血清充分顛倒混勻后再進(jìn)行上述生化指標(biāo)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果以混勻后結(jié)果表示。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量資料采用M(P25~P75)表示,組間比較采用配對(duì)秩和檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1室溫保存后生化結(jié)果與初始結(jié)果比較20例樣本經(jīng)25 ℃室溫保存24 h后檢測(cè)ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、HDL-C項(xiàng)目結(jié)果平均水平與初始結(jié)果平均水平比較、采用配對(duì)秩和檢驗(yàn),對(duì)應(yīng)Z值分別為-2.362、-2.230、-1.023、-0.983、-0.994、-0.950、-2.846、-2.545、-1.025、-1.572、-1.020、-1.020、-1.683、-1.688、-0.982,除ALT、AST、TBIL、DBIL 4項(xiàng)目P<0.05外,其余項(xiàng)目均P>0.05,表明血清樣本室溫放置24 h后,除ALT、AST、TBIL、DBIL 4項(xiàng)目結(jié)果與初始結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)外,其余生化項(xiàng)目結(jié)果與初始結(jié)果的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。
2.24 ℃冰箱保存后生化結(jié)果與初始結(jié)果比較20例樣本經(jīng)4 ℃冰箱保存24 h后檢測(cè)ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、HDL-C項(xiàng)目結(jié)果平均水平與初始結(jié)果平均水平比較,對(duì)應(yīng)Z值分別為-1.764、-1.685、-1.515、-1.410、-1.012、-0.982、-2.366、-2.241、-1.520、-1.322、-1.423、-1.623、-1.645、-1.781、-1.322,除TBIL、DBIL兩項(xiàng)目對(duì)應(yīng)的P<0.05外,其余項(xiàng)目的P>0.05,表明血清樣本經(jīng)4 ℃冰箱放置24 h后,除TBIL、DBIL兩項(xiàng)目結(jié)果與初始結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余生化項(xiàng)目結(jié)果與初始結(jié)果的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表2。
2.3-20 ℃冷凍保存24 h復(fù)融后未混勻檢測(cè)結(jié)果與初始結(jié)果比較20例樣本經(jīng)-20 ℃保存24 h復(fù)融后未混勻就檢測(cè)ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、 TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、 HDL-C結(jié)果平均水平與初始結(jié)果平均水平比較,采用配對(duì)秩和檢驗(yàn),對(duì)應(yīng)Z值分別為-3.922、-3.890、-3.473、-3.883、-3.174、-3.920、-3.846、-3.141、-3.920、-3.922、-3.920、-3.920、-3.847、-3.883、-3.922,所有項(xiàng)目P<0.05,表明血清樣本在-20 ℃冷凍保存24 h復(fù)融后未混勻就檢測(cè),其常規(guī)生化項(xiàng)目結(jié)果與初始結(jié)果的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表3。
表1 室溫保存24 h后測(cè)定生化結(jié)果與初始結(jié)果比較
表2 4℃保存24 h后測(cè)定生化結(jié)果與初始結(jié)果比較
2.4-20 ℃冷凍保存24 h復(fù)融并混勻后檢測(cè)結(jié)果與初始結(jié)果比較20例樣本經(jīng)-20 ℃保存24 h復(fù)融并混勻后檢測(cè)ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、HDL-C項(xiàng)目結(jié)果平均水平與初始結(jié)果平均水平比較,采用配對(duì)秩和檢驗(yàn),對(duì)應(yīng)Z值分別為-1.564、-1.615、-1.415、-1.310、-1.112、-0.982、-1.366、-1.441、-1.320、-1.122、-1.220、-1.525、-1.547、-1.683、-1.122,所有項(xiàng)目P>0.05,表明血清樣本經(jīng)-20 ℃保存24 h復(fù)融并混勻后,其常規(guī)生化項(xiàng)目結(jié)果與初始結(jié)果的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表4。
表3 -20 ℃冷凍保存24 h復(fù)融后未混勻測(cè)定生化
表4 -20 ℃保存24 h復(fù)融并混勻后測(cè)定生化
3討論
在臨床檢驗(yàn)工作中,受方法學(xué)及樣本數(shù)量的制約,許多標(biāo)本常需在4 ℃或低溫冷凍保存;以及臨床科研中,一些標(biāo)本的采集因?yàn)閲?yán)格的時(shí)間限制如術(shù)前、術(shù)中、臥位、立位等特殊情況,這些標(biāo)本很難具有成批性[2];另外,隨著醫(yī)療服務(wù)質(zhì)量的不斷改善,病人要求隨到隨抽血,如果加上待檢項(xiàng)目需要用放射免疫法或酶免疫法,這些標(biāo)本更需在4 ℃或甚至-20 ℃條件下保存一定時(shí)間[3]。市場(chǎng)上大多數(shù)校準(zhǔn)品、質(zhì)控品都是干粉制劑,一般用去離子水復(fù)溶后需要分裝保存[4]。所以選擇恰當(dāng)?shù)谋4娣绞?,使血清的化學(xué)成分的穩(wěn)定性不受影響顯得非常重要。目前實(shí)驗(yàn)室保存血清的主要方式有:室溫,4 ℃冰箱以及-20 ℃冰凍保存。根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),25 ℃左右室溫條件和4℃冰箱密閉保存24 h的血清樣本,其化學(xué)成分的均一性基本不受到影響,只是一些酶或膽紅素會(huì)不同程度降低,室溫保存條件下降低更明顯。而-20 ℃冰凍保存24 h后的血清樣本,充分顛倒混勻后其化學(xué)成分水平與初始結(jié)果并無(wú)明顯差異,顯然,在保存時(shí)間要求不是很長(zhǎng)的情況下,-20 ℃冰凍保存是血清樣本的最佳保存方式,優(yōu)于室溫保存和4 ℃冰箱保存方式[5],由于不需要特殊的設(shè)備,也是目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室容易實(shí)現(xiàn)的方式。
-20 ℃冰凍保存作為實(shí)驗(yàn)室血清樣本的常用保存方式,從本次實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),-20 ℃冷凍保存24 h后血清上下層各種化學(xué)成分的均一性很差。主要表現(xiàn)為血清上層的化學(xué)成分的濃度明顯低于血清下層的濃度,導(dǎo)致這一現(xiàn)象的原因目前有不同的解釋。有研究認(rèn)為這是由于低溫條件下各種化學(xué)成分的飽和度下降導(dǎo)致結(jié)晶的析出,而結(jié)晶沉積在樣本管底部,血清上層化學(xué)成分濃度就降低[6-7]。而據(jù)筆者觀察室溫復(fù)融30 min后未發(fā)現(xiàn)樣本管底部結(jié)晶存在。也有研究認(rèn)為這一現(xiàn)象主要是由于低溫條件下化學(xué)成分的自然沉降有關(guān)[8]。有研究發(fā)現(xiàn),若將冷凍保存后的血清由上至下分成多層,血清中各種化學(xué)成分的濃度由上至下是逐漸增加的[9]。但是化學(xué)成分為什么在低溫條件下會(huì)沉降?至今還無(wú)很合理的解釋。所以上下層血清化學(xué)成分濃度差異大確切的原因還有待進(jìn)一步探討。
在實(shí)驗(yàn)操作中非常強(qiáng)調(diào)加樣本或試劑后通過(guò)攪拌、震蕩方式混勻使反應(yīng)更充分,而保存樣本檢測(cè)前需混勻常被大家忽視,特別是低溫冷凍保存后的血清樣本。這是因?yàn)槟壳按蠹覍?duì)低溫冷凍保存后血清樣本化學(xué)成分上下層巨大的濃度差異認(rèn)識(shí)不足有關(guān)。對(duì)低溫冷凍保存后的血清樣本,復(fù)融后充分混勻再檢測(cè)尤為重要,建議寫(xiě)入相關(guān)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。當(dāng)然,可以利用低溫冷凍保存后的血清上下層濃度差異大的特點(diǎn),通過(guò)檢測(cè)冷凍保存后的下層血清的腫瘤、病毒及核酸標(biāo)志物濃度,以提高檢測(cè)靈敏度。
本研究表明,經(jīng)室溫或4 ℃冰箱保存24 h的血清,各種化學(xué)成分的均一性基本不受影響,但是一些酶和膽紅素會(huì)不同程度降低,室溫保存的血清降低更明顯;-20 ℃保存的血清,復(fù)融后上下層血清化學(xué)組分的均一性很差,上層血清化學(xué)成分濃度明顯低于下層血清,為保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性,檢測(cè)前務(wù)必充分混勻。
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(收稿日期:2016-01-11)
DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.050
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1673-4130(2016)08-1130-03
△通訊作者,E-mail:499191009@qq.com。
·臨床研究·