陳　迪，吳　瑛

(臺山市第二人民醫(yī)院檢驗科，廣東臺山 529224)

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·論著·

臺山地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血基因突變類型分析

陳迪，吳瑛

(臺山市第二人民醫(yī)院檢驗科，廣東臺山 529224)

摘要:目的了解臺山地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血(又稱地中海貧血，地貧)患者基因突變類型及構(gòu)成，為該地區(qū)地貧的防治提供依據(jù)。方法選取2014年1～12月來該院進行地貧基因檢測的患者1 383例，采用PCR技術(shù)與膜雜交法檢測α、β基因。結(jié)果1 383例研究對象有595例基因確診為地貧，陽性率為43.02%。其中α地貧386例，占27.91%；β地貧183例，占13.23%；αβ復(fù)合型地貧26例，占1.88%。α地貧以--SEA/αα為主(64.25%)；β地貧以β41-42/β型為主(28.42%)；αβ復(fù)合型地貧基因以--SEA/αα與β41-42/β復(fù)合型最為常見(19.23%)。結(jié)論臺山市地處地貧高發(fā)地區(qū)，對育齡人群進行地貧基因診斷對降低該地區(qū)地貧患兒的出生率具有重要意義。

關(guān)鍵詞:珠蛋白生成障礙性貧血；基因突變；構(gòu)成比

珠蛋白生成障礙性貧血又稱為地中海貧血(以下簡稱地貧)是一種危害極大的常染色體隱性遺傳的血紅蛋白疾病。在我國，地貧多發(fā)生于長江以南地區(qū)，尤其是廣東、廣西、海南三地[1-2]，該病在廣東已被列為重點防治疾病之一。廣東省人群α及β地貧基因攜帶率高達11.07%，其中α地貧基因攜帶率為8.53%，β地貧基因攜帶率為2.54%。臺山市位于珠三角地區(qū)腹地，針對本地區(qū)地貧基因攜帶研究一直處于空白地帶。本研究對2014年1～12月的1 383例地貧基因檢查結(jié)果進行了分析，旨在掌握本地區(qū)地貧基因攜帶特點，為本地區(qū)地貧的防范及治療提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料選取2014年1～12月來本院進行地貧基因檢測的患者1 383例，其男500例、女883例，平均年齡為23歲。

1.2儀器與試劑檢測儀器為ABI 7300型實時熒光定量PCR儀，α與β地貧基因檢測試劑盒由潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集研究對象采用無菌抗凝管(EDTA抗凝劑)抽取靜脈血2 mL，混勻。標(biāo)本采集后立即送檢，4 ℃保存不超過3 d，未及時檢測的標(biāo)本置-20 ℃保存待測。

1.3.2標(biāo)本的檢測采用PCR與膜雜交法檢測中國人常見的3種缺失型α地貧(--SEA、-α3.7和-α4.2)，2種突變型α地貧(CS、QS)及11種突變型β地貧(CD41-42、CD43、IVSⅡ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVSⅠ-1、CD27-28)。

1.3.3操作步驟(1)DNA分離提?。喝】鼓?00 μL，提取DNA濃度為20～40 ng/μL，A260/A280的值為1.5～2.5，吸取3～6 μL抽提好的DNA標(biāo)本作為模板進行PCR擴增，α、β地貧試驗各設(shè)置陰性對照。(2)PCR擴增：將配制好的擴增試劑充分混勻，8 000 r/min離心1 min，向設(shè)定的n個PCR反應(yīng)管中分別加入配制好的擴增試劑(α地貧加入44 μL，β地貧加入47 μL)，轉(zhuǎn)移到樣品處理區(qū)；在對應(yīng)的PCR反應(yīng)管中分別加入處理好的樣品DNA(20～40 ng/μL)。α地貧擴增試劑中每份樣品加入6 ng DNA，陰性對照加入6 μL純水。β地貧擴增試劑中每份樣品加入樣品DNA 3 μL，陰性對照加入3 μL純水，蓋緊管蓋，8 000 r/min離心1 min。以ABI 7300型實時熒光定量PCR儀進行擴增。(3)PCR產(chǎn)物雜交的操作按試劑盒說明書進行。

1.3.4結(jié)果判斷(1)陰性對照檢測結(jié)果膜條無草藍紫色斑點出現(xiàn)；(2)若在突變或缺失檢測探針處出現(xiàn)顯色強度與相應(yīng)的正常對照探針相近的藍紫色斑點，則該點為地貧突變或缺失的雜合子；(3)若在突變或缺失檢測探針處出現(xiàn)藍紫色斑點，而相應(yīng)的正常對照探針處未出現(xiàn)藍紫色斑點，則該位點為地貧突變或缺失的純合子；(4)若僅正常對照探針處出現(xiàn)藍紫色，則待檢樣品沒有上述16種地貧突變或缺失。見圖1(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2結(jié)果

2.1一般情況1 383例進行基因檢測的患者中，595例為地貧，陽性率為43.02%。其中α地貧386例，占27.91%；β地貧183例，占13.23%；αβ地貧雙重雜合子26例，占1.88%。

2.2α地貧基因突變類型及構(gòu)成比386例α地貧中，大部分為--SEA/αα型，占64.25%；其次為-α3.7/αα，占18.13%。各基因類型及構(gòu)成比見表1。

表1　　386例α地貧基因突變類型及構(gòu)成比

2.3β地貧基因突變類型及構(gòu)成比183例β地貧研究對象進行基因分型，大部分為β41-42/β型，占28.42%，其次為β654/β型，占28.42%。各基因類型及構(gòu)成比見表2。

表2　　183例β地貧基因突變類型及構(gòu)成比

2.4αβ復(fù)合型地貧基因突變類型及構(gòu)成比26例αβ復(fù)合型地貧患者進行基因分型，--SEA/αα，β41-42/β復(fù)合型所占比例最高，占19.23%；其次為-α3.7/αα，β41-42/β和-α3.7/αα，β654/β復(fù)合型，各占15.38%。各基因類型及構(gòu)成比見表3。

表3　　αβ復(fù)合型地貧基因突變類型及構(gòu)成比

3討論

地貧分為α型、β型、δβ型和δ型4種，其中以β和α地中海貧血較為常見?，F(xiàn)階段對于地貧尚無理想治療方法，重在預(yù)防，產(chǎn)前地貧基因檢測是降低地貧嬰兒出生的重要手段。珠海市開展的大規(guī)模人群地貧預(yù)防控制計劃，使α地貧患兒出生率年均下降達30%[3]，現(xiàn)廣東省已將地貧篩查列入婚前常規(guī)檢查項目。

α地貧主要由發(fā)生于16號染色體短臂末端α-珠蛋白基因簇內(nèi)α基因的缺失引起，少數(shù)由點突變引起。中國人群中α地貧主要以缺失型為主，常見類型有東南亞缺失型(--SEA)，右側(cè)缺失型(-α3.7)和左側(cè)缺失型(-α4.2)。本研究在1 383例人群中共檢出386例α地貧患者。大部分α地貧為--SEA/αα型，占64.25%，其次為-α3.7/αα，占18.13%。說明本地區(qū)α地貧以--SEA/αα型為主，與國內(nèi)同類研究結(jié)果相一致[4-5]。如東南亞缺失型患者應(yīng)對配偶也進行地貧篩查，避免因配偶為東南亞缺失型而有可能造成子代出現(xiàn)血紅蛋白H病或Bart′s水腫胎。

β地貧主要發(fā)生在位于11號染色體短臂的β基因內(nèi)的點突變引起，在我國β地貧基因突變類型有34種，本次研究檢出的183例β地貧患者中大部分為β41-42/β型，占28.42%，其次為β654/β型，占28.42%，這與廣東已有的報道一致[6-7]，可能與同一省基因分布變化不大有關(guān)系。

健康人的血紅蛋白四聚體由α鏈和非α鏈合成平衡，維持紅細胞正常功能與形態(tài)，地貧患者由于打破此平衡而引起貧血，αβ復(fù)合型地貧由于減輕了α和β珠蛋白鏈間的不平衡狀態(tài)，因此其臨床癥狀可不明顯，但其攜帶致病基因如果傳遞給后代可造成重癥患兒的出現(xiàn)。本次研究檢出的26例αβ復(fù)合型地貧基因患者中大部分為--SEA/αα，β41-42/β復(fù)合型，占19.23%；其次為-α3.7/αα、β41-42/β、-α3.7/αα和β654/β復(fù)合型，分別占15.38%。由于地貧臨床主要表現(xiàn)為慢性溶血性貧血，目前尚無有效的治療方法[8]。因此，通過婚前檢查或產(chǎn)前診斷減少重型地貧患兒的出生是目前最為有效的預(yù)防措施。

近年來，胚胎植入前遺傳學(xué)診斷(PGD)作為產(chǎn)前診斷的更早期方式，為高危地貧夫婦終止妊娠提供了更多的選擇手段[9]。PCR技術(shù)是臨床用于檢測地貧的主要方法[10]，通過研究發(fā)現(xiàn)--SEA/αα、β41-42/β、--SEA/αα與β41-42/β是臺山地區(qū)最常見的α和β地貧基因型，應(yīng)作為重點監(jiān)控對象，采取科學(xué)有效的預(yù)防措施，盡量減少地貧基因攜帶患兒或重型地貧兒的出生。

參考文獻

[1]Xiong F,Sun M,Zhang X,et al.Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies in the Guangxi Zhuang Autonomous Region of southern China[J].Clin Genet,2010,78(2):139-148.

[2]Xu XM,Zhou YQ,Luo GX,et al.The prevalence and spectrum of alpha and beta thalassaemia in Guangdong Province:implications for the future health burden and population screening[J].J Clin Pathol,2004,57(5):517-522.

[3]周玉球，商璇，尹保民，等．1998～2010年珠海市地中海貧血大規(guī)模人群的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷結(jié)果分析[J]．中華婦產(chǎn)科雜志，2012，47(2)：90-95．

[4]王晶晶，朱文彪，黃霜，等．廣州市1 381例育齡人群地中海貧血基因譜分析[J]．中國優(yōu)生與遺傳雜志，2015，23(2)：5-7．

[5]劉愛勝，陳榮貴，文艷．深圳寶安地區(qū)孕婦地中海貧血和G-6PD缺乏現(xiàn)狀調(diào)查研究分析[J]．臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，10(18)：1432-1433．

[6]杜麗，尹愛華，張彥，等．2 171例地中海貧血產(chǎn)前基因診斷回顧性分析[J]．國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2012，39(2)：208-210．

[7]劉冬霞，劉玉線，黃美瓊，等．廣東省清遠地區(qū)地中海貧血基因分型情況分析[J]．中國醫(yī)藥科學(xué)，2013，3(11)：93-95．

[8]呂福通，謝丹尼．地中海貧血的相關(guān)研究進展[J]．中國計劃生育學(xué)雜志，2013，21(7)：490-494．

[9]Kokkali G,Traeger-Synodinos J,Vrettou C,et al.Blastocyst biopsy versus cleavage stage biopsy and blastocyst transfer for preimplantation genetic diagnosis of beta-thalassaemia:a pilot study[J].Hum Reprod,2007,22(5):1443-1449.

[10]Phylipsen M,Vogelaar IP,Schaap RA,et al.A new alpha(0)-thalassemia deletion found in a Dutch family (--(AW))[J].Blood Cells Mol Dis,2010,45(2):133-135.

Gene mutation type analysis of thalassemia in Taishan area

CheDi，WuYing

(DepartmentofClinicalLaboratory,the2ndPeople′sHospitalofTaishan,Taishan,Guangdong529224,China)

Abstract:ObjectiveTo learn the gene mutation type and prevalence of thalassemia in the Taishan area and to provide basis for the prevention and treatment of local thalassemia.Methods1 383 patients who visited the hospital for thalassemia genetic test from January to December 2014 were enrolled for this study.α- and β- genes were determined by using PCR and membrane hybridization methods.ResultsOf the 1 383 patients,595 were diagnosed with thalassemia (positive rate was 43.02%),including 386 cases(27.91%) of α-thalassemia,183 cases(13.23%) of β-thalassemia and 26 cases(1.88%) of αβ-thalassemia.--SEA/αα(accounted for 64.25%) was the major genotype of α-thalassemia,the major genotype of β-thalassemia was β41-42/β(accounted for 28.42%),and --SEA/αα,β41-42/β was the major genotype of αβ-thalassemia (accounted for 19.23%).ConclusionTaishan is located in a high risk area of thalassemia,it is of great significance to perform genetic diagnosis of thalassemia among reproductive population so as to reduce the birth rate of children with thalassemia in the area.

Key words:thalassemia；gene mutation；constituent ratio

(收稿日期：2015-12-10)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.021

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)08-1067-03

作者簡介：陳迪，主管技師，主要從事臨床血液學(xué)的研究。