黃香凌，莫緒串

（桂林師范高等專科學(xué)?；瘜W(xué)與藥學(xué)系，廣西 桂林 541001）

生羅漢果的提取及其自由基清除活性研究

黃香凌，莫緒串

（桂林師范高等?？茖W(xué)?；瘜W(xué)與藥學(xué)系，廣西 桂林 541001）

在超聲波輔助下，分別以水、乙醇、乙酸乙酯對(duì)羅漢果肉和皮進(jìn)行提取1 h，濃縮后得到粗提取物SGW E、SG EE、SG EA E、M PW E、M PEE和M PEA E，并對(duì)粗提物清除D PPH自由基的活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，羅漢果肉和皮粗提物均具有良好的D PPH自由基清除活性，它們的半數(shù)清除率濃度IC50顯著小于標(biāo)準(zhǔn)值10mg/mL；提取溶劑對(duì)提取物清除D PPH·的活性具有重要影響。

羅漢果；超聲波提取；自由基清除活性

研究表明，人體內(nèi)過多的自由基和活性氧可誘發(fā)多種慢性疾病，如癌癥、高脂血癥、炎癥、糖尿病等，[1-2]及時(shí)補(bǔ)充外源性的自由基清除劑可起到防治這些疾病的功效。因此，尋找能有效清除人體內(nèi)過量自由基的外源活性清除劑目前正成為人們研究關(guān)注的熱點(diǎn)。而許多植物果蔬中的活性成分能夠有效地吞噬活性氧和自由基，展示出良好的自由基清除活性，因此從天然植物果蔬中篩選自由基清除劑或抗氧化劑成為當(dāng)前研發(fā)新型自由基清除劑或抗氧化劑的重要途徑。[3-4]

羅漢果（Siraitia grosvenorii）是葫蘆科多年生藤本植物，其果實(shí)可入藥和用作保健品，被人們譽(yù)為“神仙果”，是中國(guó)廣西桂林著名特產(chǎn)。研究表明，羅漢果可用于治療呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病等與自由基存在密切關(guān)系的疾病[5-6]，因此，羅漢果藥效活性的提取分離和自由基清除活性的研究受到人們的廣泛關(guān)注。

圖1 羅漢果肉粗提取物的制備技術(shù)路線

前人對(duì)羅漢果的研究主要圍繞干羅漢果，而對(duì)生羅漢果活性成分的提取分離以及自由基清除活性的研究尚為少見。而實(shí)際上生羅漢果在民間用于治療呼吸系統(tǒng)疾病和炎癥的效果并不亞于干羅漢果，故生羅漢果常用于煮水來防治小兒咳嗽、咽喉腫痛等疾病。為進(jìn)一步挖掘生羅漢果潛在的藥用價(jià)值和作用機(jī)制，本文用三種不同溶劑對(duì)生羅漢果進(jìn)行了粗提，并對(duì)這些粗提物的自由基清除活性進(jìn)行了研究，探討了基于生羅漢果研發(fā)新型自由基清除劑或抗氧化劑的可能性，為合理研發(fā)生羅漢果產(chǎn)品提供一些指導(dǎo)意義。

一、實(shí)驗(yàn)部分

（一）材料與儀器

材料：生羅漢果（將其剝開分為肉和皮），二次蒸餾水，其余化學(xué)試劑均為分析純。

儀器：TU-1901雙光束紫外可見分光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），KQ5200-B型超聲波提取設(shè)備（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司），SHB-Ⅲ循環(huán)水式真空泵(江蘇金壇市華歐實(shí)驗(yàn)儀器廠)，RE501型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(常州諾基儀器有限公司)，冷凍設(shè)備。

（二）羅漢果提取物的制備流程

羅漢果肉和皮粗提取物的制備工藝流程如圖1和圖2所示，分別經(jīng)過打漿、提取和濃縮等步驟，最后制得粗提物。

圖2 羅漢果皮粗提取物的制備技術(shù)路線

（三）實(shí)驗(yàn)步驟

1.生羅漢果提取物的制備

（1）生羅漢果肉粗提物的制備

分別稱取20.0g生羅漢果肉醬置于燒瓶中，加水、乙醇、乙酸乙酯置燒瓶中，70℃下在超聲波輔助下提取1h，然后分別過濾并將濾液進(jìn)行減壓濃縮，以水、乙醇、乙酸乙酯為溶劑進(jìn)行提取分別得到具有濃香甜味的淡棕色膏狀提取物SGWE、SGEE和SGEAE，收率分別為15.4%、13.3%和6.8%。這些粗提物均具有濃郁的甜香味，可能是由于富含羅漢果甜甙的緣故。[7]

（2）生羅漢果皮粗提物的制備

分別稱取20.0g生羅漢果皮醬置于圓底燒瓶中，分別加200mL水、乙醇、乙酸乙酯，70℃下在超聲波輔助下提取1h，然后分別過濾并將濾液進(jìn)行減壓濃縮，以水、乙醇、乙酸乙酯為溶劑進(jìn)行提取分別得到具有濃香甜味的淡棕色膏狀提取物MPWE、MPEE、MPEAE，收率分別為7.8%、7.2%和3.6%。這些粗提物均具有濃郁的甜香味，可能是由于富含羅漢果甜甙的緣故。[7]

2.生羅漢果提取物的紫外吸收光譜

圖3 粗提物的紫外吸收?qǐng)D

把提取物SGWE、SGEE、SGEAE、MPWE、MPEE和MPEAE分別配成濃度為3mg/mL的二甲基甲酰胺（DMF）溶液，掃描它們的紫外吸收，結(jié)果如下圖3所示。由圖3可見，提取物SGWE、SGEE、SGEAE、MPWE、MPEE和MPEAE在200-350nm范圍內(nèi)有吸收，可能歸屬為羅漢果中的活性成分羅漢果甜甙、黃酮等的紫外吸收，故可推測(cè)提取物中含有羅漢果甙、黃酮等活性成分。[7-8]

3.生羅漢果肉的水、乙醇、乙酸乙酯提取物對(duì)DPPH自由基清除活性測(cè)試

二苯代苦味酰(DPPH)自由基是一種常用自由基，其乙醇溶液具有較好的穩(wěn)定性，呈深紫色，[9]該溶液在波長(zhǎng)517nm附近有強(qiáng)吸收，主要?dú)w屬為DPPH·上的孤電子。當(dāng)孤電子與自由基清除劑或抗氧化劑配對(duì)后，其在波長(zhǎng)517nm附近的吸收減弱或消失，且其吸收減弱或消失的程度與自由基清除劑或抗氧化劑的濃度呈線性正比關(guān)系，故這種關(guān)系被設(shè)計(jì)成DPPH·清除作用的測(cè)試模型，用于測(cè)試和評(píng)估自由基清除劑的清除DPPH·性能。[9]由于該種測(cè)試模型具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用。參照參考文獻(xiàn)，[10]我們先將提取物配成系列濃度的DMF溶液，并通過紫外分光光度計(jì)測(cè)試系列濃度溶液對(duì)DPPH·的清除率，然后繪制清除率-濃度曲線圖（圖4），最后將曲線圖線性歸一后可計(jì)算出提取物的IC50。由圖4可見，羅漢果提取物展示了明顯的DPPH·的清除作用。

圖4 提取物清除DPPH·的清除率-濃度示意圖

二、結(jié)果與討論

抗氧化劑對(duì)DPPH·的清除能力，是衡量其自由基清除活性的重要測(cè)試模型之一，可通過比較提取物的半數(shù)清除率濃度IC50與標(biāo)準(zhǔn)值（10mg/mL）的大小來評(píng)估其自由基清除活性或抗氧化活性。當(dāng)被測(cè)物的IC50小于標(biāo)準(zhǔn)值10mg/mL時(shí)，可認(rèn)為其具有良好的自由基清除活性及抗氧化活性[11]，而當(dāng)被測(cè)物的IC50小于常用自由基清除劑或抗氧化劑如BHT時(shí)，則說明被測(cè)物具有優(yōu)良的自由基清除活性和抗氧化活性。提取物對(duì)DPPH·的清除作用結(jié)果見表1。

表1 羅漢果提取物清除DPPH·的IC50

根據(jù)表1可見，羅漢果提取物的DPPH·半數(shù)清除率濃度IC50值顯著小于標(biāo)準(zhǔn)值10mg/mL（p＜0.05），說明羅漢果提取物具有良好的自由基清除活性。由表1的測(cè)試結(jié)果可見，生羅漢果肉提取物SGEE、SGEAE、SGWE的半清除率濃度IC50分別為255.62μg/mL、275.38μg/mL、225.78μg/mL，顯而易見提取物SGWE活性最優(yōu)，提取物SGEE的活性次之，提取物SGEAE的活性最差，由此可見，提取溶劑對(duì)DPPH自由基清除活性有較大的影響：以水為提取溶劑最優(yōu)，乙醇次之，乙酸乙酯最差；而生羅漢果皮提取物MPEAE、MPAE、MPWE的半清除率濃度IC50分別為275.21μg/mL、254.70μg/mL、225.63μg/ mL，顯而易見提取物MPWE活性最優(yōu)，提取物MPAE的活性次之，提取物MPEAE的活性最差，由此可見，提取溶劑對(duì)DPPH自由基清除活性有較大的影響：以水為提取溶劑最優(yōu)，乙醇次之，乙酸乙酯最差。綜上可見，泡生羅漢果茶時(shí)，以水為溶劑是一種恰當(dāng)?shù)倪x擇。較為遺憾的，所有提取物清除DPPH自由基的活性均小于常用抗氧化劑BHT（IC50=14.5μg/mL）。

三、結(jié)論

在超聲波輔助下，分別以水、乙醇、乙酸乙酯為溶劑對(duì)生羅漢果肉和皮進(jìn)行初提，并對(duì)提取物的自由基清除活性進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果表明，生羅漢果肉和皮的提取物均展示了良好的DPPH·清除活性，具有開發(fā)為優(yōu)良的復(fù)方自由基清除劑的潛力。以上研究有望為進(jìn)一步基于生羅漢果研究新型高效低毒的自由基清除劑和抗氧化劑提供指導(dǎo)意義。

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Abstrac:Under ultrasound,the fresh and peel of the mangosteen were respectively extracted with water,ethanol and ethyl acetate to offer six crude extracts SGWE,SGEE,SGEAE,MPWE,MPEE and MPEAE.Their free radical scavenging activities were the evaluated against DPPH·.The results showed that all IC50 of these extracts were much lower than the standard value 10 mg/mL in DPPH·assays,suggesting all these extracts displayed good free radical scavenging activities,while the solvent effects had important influence on the scavenging activities.

Study of the Extracts from the Raw Mangosteen and Its Free Radical Scavenging Activeness

Huang Xiangling,Mo Xuchuan
(Dep.of Chemistry and Pharmacy,Guilin Normal College,Guilin,Guangxi 541001,China)

mangosteen;ultrasound-extracted;free radical scavenging activities

062

A

1001-7070（2016）02-0115-03

10.16020/j.cnki.cn45-1302/z.2016.02.030

（責(zé)任編輯：楊建香）

2016-01-20基金項(xiàng)目：廣西高?？蒲匈Y助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2013YB284）；廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金課題資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：FPRU2013-6）。

黃香凌（1984-），女，廣西百色人，桂林師范高等專科學(xué)校教師，研究方向?yàn)樘烊挥袡C(jī)化學(xué)；莫緒串（1987-），男，廣西陽朔人，桂林師范高等專科學(xué)校助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)樘烊挥袡C(jī)化學(xué)。