李燁（平陽縣食品藥品檢驗檢測中心，浙江平陽325401）

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高效液相色譜法同時測定果醬中12種添加劑

李燁
（平陽縣食品藥品檢驗檢測中心，浙江平陽325401）

摘要：建立果醬中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅和赤蘚紅12種添加劑的高效液相色譜測定法。采用ZORBAX SB-C18柱，以甲醇和0.02 mol/L乙酸銨為流動相進行梯度洗脫，二極管陣列檢測器變波長（230nm和254nm）檢測，外標法定量。方法的回收率為85.7 %～115.1 %，RSD小于5.0 %。該法操作簡單、快速、準確，適用于果醬中常見添加劑的同時測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；果醬；添加劑

果醬是人們生活中常見的食品。為了保持或增加果醬的色、香、味等品質(zhì)，提高防腐效果，延長保存時間，常常加入多種添加劑。然而市場上濫用這類添加劑的違法行為時有發(fā)生，濫用食品添加劑對人體有一定的毒害作用，因此我國食品安全國家標準對果醬的添加劑添加量有嚴格的規(guī)定[1]。目前，對果醬中多種添加劑同時測定方法的研究比較少。建立簡單、快速、準確的方法測定果醬中食品添加劑非常必要。本試驗采用梯度洗脫，可變波長程序，建立用于同時檢測果醬中12種食品添加劑的高效液相色譜法。

1　材料與方法

1.1儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器）：美國安捷倫；SK5210HP型恒溫超聲清洗器：上?？茖С晝x器有限公司；離心機：上海盧湘儀器離心機儀器有限公司；PHS-25型數(shù)顯pH計：上海精密科學儀器有限公司。

1.2試劑

甲醇（色譜純）：德國默克公司；乙酸銨（分析純）：上海試四赫維化工有限公司；氨水：西隴化工股份有限公司；苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、赤蘚紅：中國計量科學研究院；安賽蜜、新紅：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；酸性紅：Dr. Ehrenstorfer GmbH公司。

1.3色譜條件

色譜柱：ZORBAXSB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃；進樣量：10 μL；檢測波長：安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉230 nm；檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、赤蘚紅254nm；流動相：0.02 mol/L乙酸銨/甲醇，洗脫梯度見表1。

表1　梯度洗脫表Table 1 Program of gradient elution

1.4樣品處理

稱取5.0 g樣品，加水溶解，在50℃下超聲20 min，用氨水調(diào)節(jié)pH至7，用水定容至25 mL，離心（5 000 r/min）10 min，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，供HPLC進行檢測。

2　結(jié)果與討論

2.1檢測波長的選擇

國家標準推薦使用的測定波長分別為安賽蜜214 nm[2]，糖精鈉、山梨酸和苯甲酸230 nm[3]，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、赤蘚紅254 nm[4]，誘惑紅和酸性紅254 nm[5]，本方法經(jīng)反復試驗，采用變波長檢測，選擇230 nm測定安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉；其余8種色素在254 nm下測定，以提高方法靈敏度。

2.2色譜柱的選擇

比較了不同類型和長度的C18色譜柱的分離效果?？疾炝薊clipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）3種色譜柱對于目標化合物的分離效果。Eclipse XDB所得的峰形較寬，完全分離目標化合物需要35 min，無法滿足快速檢測需求。ZORBAX SB-C18（150 mm）在20 min完成分離，但分離度較差。ZORBAX SB-C18（250 mm）所得峰形尖銳且分離度好，其色譜分離如圖1所示。

圖1　12種食品添加劑標準溶液色譜圖Fig.1 Chromatogram of 12 food additive standards solution

25 min內(nèi)完成目標化合物的分離滿足快速檢測需求。因此選擇ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱進行檢測。

2.3標準曲線和檢出限

逐級稀釋的標準混合工作液按試驗的色譜條件分別進行測定，以濃度（X，mg/L）為橫坐標，以其相應(yīng)的峰面積（Y，mAU*s）為縱坐標，繪制標準曲線得線性回歸方程。以3倍信噪比計算方法檢出限，結(jié)果見表2。

表2　12種添加劑的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限Table 2 Linear ranges，regression equations，correlation coefficients and detection limit of 12 additives

2.4方法的回收率和精密度

在樣品中添加3個濃度的12種食品添加劑，每個添加水平重復測定6次，計算平均加標回收率和精密度（RSD），結(jié)果見表3。

表3　樣品中12種添加劑的回收率與精密度（n=6）Table 3 Recovery and precision of 12 additives（n=6）

續(xù)表3樣品中12種添加劑的回收率與精密度（n=6）Continue table 3 Recovery and precision of 12 additives（n=6）

試驗結(jié)果表明，各組分平均回收率范圍在85.7 %～115.1 %，精密度（RSD）為0.21 %～4.88 %。方法的精密度和準確度能滿足實際樣品檢測分析的要求。

3　結(jié)論

本試驗采用蒸餾水超聲波輔助提取，高效液相色譜檢測分離和定量果醬中常見的12種食品添加劑，本方法回收率和精密度符合檢測要求。方法操作簡單，速度快，提高了工作效率可應(yīng)用于實際樣品的檢測。

參考文獻：

[1]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 2760-2014食品安全國家標準食品添加劑使用標準[S].北京:中國標準出版社,2014:4-113

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.140-2003飲料中乙?；前匪徕浀臏y定[S].北京:中國標準出版社,2003:206

[3]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局,中國國家標準化管理委員會.GB/T 23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法[S].北京:中國標準社,2009:3

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標準化管理委員會. GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測定[S].北京:中國標準出版社,2003:278

[5]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T 1743-2006食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍、日落黃的含量檢測高效液相色譜法[S].北京:中國標準出版社,2006:2

Simultaneous Determination of 12 Additives in Jam by High Performance Liquid Chromatography

LI Ye
（Pingyang Inspection Center for Food and Drug，Pingyang 325401，Zhejiang，China）

Abstract：An analytical method for the determination of additives including acesulfame potassium，benzoic acid，sorbic acid，sodium saccharin，tartrazine，new red，amaranth，ponceau 4R，sunset yellow，allura red，carmoisine，erythrosine in jam was developed by HPLC methods. The 12 additives in jam were separated on ZORBAX SB-C18 column by using methanol and 0.02 mol/L ammonium acetate as mobile phase，detector（DAD）

at 230 nm and 254 nm respectively. The quantification was performed by the external standard method. The extraction recoveries were between 85.7 %-115.1 % and the RSD all less than 5.0 %.This method was found to be simple，rapid and accurate，and can be used for the simultaneous determination of common additives in jam.

Key words：high performance liquid chromatography；jam；additives

收稿日期：2016-01-21

作者簡介：李燁（1986—），女（漢），助理工程師，本科，從事食品質(zhì)量安全的檢測工作。

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.08.038