劉建霞 童翔

摘要：目的 采用高效液相色譜法測(cè)定辛芳鼻炎膠囊中的木蘭脂素和歐前胡素中的含量。方法 HPLC條件為：CAPCELL PAK-C18 色譜柱（5μm，4.6mmI.D.×250mm）；流動(dòng)相為乙腈—水（52：48）；柱溫為30℃；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；結(jié)果 木蘭脂素、歐前胡素8～80μg，0.02028～0.2028μg與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好；平均回收率分別為：123.11%、103.81%。結(jié)論 本法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為辛芳鼻炎膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：木蘭脂素；歐前胡素；辛芳鼻炎膠囊

中圖分類(lèi)號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2016）06-0077-02

辛芳鼻炎膠囊由辛夷、白芷等成分組成，具有發(fā)表散風(fēng)、清熱解毒、宣肺通竅的功效，臨床廣泛應(yīng)用于慢性鼻炎、鼻竇炎等癥的治療。現(xiàn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊(cè)，其質(zhì)量檢測(cè)僅有白芷藥材的薄層色譜鑒別（TLC），且白芷藥材的TLC鑒別易受其它藥材的干擾，致使檢測(cè)結(jié)果不明顯。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床使用安全有效，本文用HPLC法同時(shí)測(cè)定該制劑中木蘭脂素和歐前胡素的含量，以期為建立辛芳鼻炎膠囊新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

文獻(xiàn)顯示，木蘭脂素和歐前胡素[1～3]分別是該中成藥中辛夷和白芷的主要指標(biāo)成分；本文采用HPLC同時(shí)對(duì)木蘭脂素和歐前胡素2種成分定量檢測(cè)，簡(jiǎn)化了操作程序，降低了工作量，實(shí)現(xiàn)了對(duì)該制劑中2種指標(biāo)成分含量的同時(shí)測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀系統(tǒng)（安捷倫科技公司），電子天平（島津AEL-200）；電子天平（賽多利斯BP2110-OCE），超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司KQ-500E），紫外分光光度計(jì)（TV：199011901）。

1.2 材料及試藥 木蘭脂素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110882-200605，供含量測(cè)定用，置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上使用）；歐前胡素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110826-201013，含量以99.6%計(jì)，供含量測(cè)定用）；辛芳鼻炎膠囊（山西華康藥業(yè)股份有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：20111107，20130801，20130901，20131004）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELL PAK-C18（5 μm，4.6 mmI.D.×250 mm）；流動(dòng)相為乙腈-水（52：48）；柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；進(jìn)樣量為10μL。木蘭脂素在約8.3min出現(xiàn)色譜峰，歐前胡素在約15.3 min出現(xiàn)色譜峰，混合對(duì)照品分別在約8.3 min和15.3 min出現(xiàn)色譜峰，見(jiàn)圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取木蘭脂素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110882-200605，供含量測(cè)定用，置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上使用）適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含木蘭脂素0.1 mg的溶液，即得。取歐前胡素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110826-201013，含量以99.6%計(jì)，供含量測(cè)定用）適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含歐前胡素10 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品約1.0 g，精密稱(chēng)定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱(chēng)重，超聲處理（功率240W，頻率45kHz）30 min，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 按處方比例稱(chēng)取缺辛夷、白芷以外的其他藥材，按制備工藝制成陰性制劑，再按2.2.2 項(xiàng)下的方法制備陰性供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取陰性供試品溶液、混合對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定。木蘭脂素和歐前胡素的保留時(shí)間分別約為8.3，15.3 min，與混合對(duì)照品溶液的色譜保留時(shí)間一致；陰性供試品溶液在該色譜條件下對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.3.2 線(xiàn)性關(guān)系 考察精密吸取上述混合對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、15、20 μL分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果表明，木蘭脂素、歐前胡素分別在8～80 μg，0.02028～0.2028 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量和峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，且r值分別為0.9999、0.9999。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一混合對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下的方法連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定木蘭脂素、歐前胡素的峰面積，峰面積RSD分別為0.2%、0.4%。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)辛芳鼻炎膠囊（20111107）6份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果木蘭脂素、歐前胡素的含量分別為3、5550、0、0851 mg/g，RSD分別為1%、1.2%。

2.3.5 中間精密度試驗(yàn) 用Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫科技公司），CAPCELL PAK-C18色譜柱（5 μm，4.6 mmI.D.×250 mm）；在不同人員操作下，精密吸取同一混合對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下的方法連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定木蘭脂素、歐前胡素的峰面積，峰面積RSD分別為0.09%、0.6%。取同一批號(hào)辛芳鼻炎膠囊（20111107）6份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果木蘭脂素、歐前胡素的含量分別為3.52906、0.08617 mg/g，RSD分別為0.7%、1.2%。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 吸取按2.2.2項(xiàng)下的制備條件制備的供試品溶液，于室溫放置0、2、6、9、10、12、24 h后按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行，分別測(cè)定木蘭脂素、歐前胡素的峰面積，RSD分別為0.7%、2.8%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)辛芳鼻炎膠囊（20111107）9份，每份約0.5 g，精密稱(chēng)定，分別置于錐形瓶中，取木蘭脂素對(duì)照品溶液（1.8 mg/mL），歐前胡素對(duì)照品溶液0.02028 mg/mL，分別于1，2，3號(hào)樣中精密加入0.5和1 mL，4，5，6號(hào)樣中精密加1和2 mL，7，8，9號(hào)樣中精密加1.5和3 mL精密吸取1、2、3 mL，各3按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下的色譜條件，依次測(cè)定，計(jì)算平均回收率，分別為113.1%，103.8%，RSD分別為1.5%，0.9%。

2.3.8 樣品測(cè)定 取3批辛芳鼻炎膠囊，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中，在上述相同色譜條件下記錄2種成分的峰面積值，求得3批樣品的每粒木蘭脂素的含量分別為0.91，0.90，091（mg/粒）；歐前胡素含量分別為0.02，0.02，0.02（mg/粒）。

3 討論

3.1 提取溶劑與提取時(shí)間的選擇 本實(shí)驗(yàn)前期進(jìn)行了樣品中有效成分的提取方法的考察，分別是加甲醇超聲1 h、加乙酸乙酯浸泡30 min超聲30 min[4]、加乙酸乙酯熱回流提取[3]、加60%甲醇浸泡過(guò)夜[5]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加甲醇超聲1 h提取的樣品含有量較其他溶劑高，且雜質(zhì)影響較小。同時(shí)按2.1項(xiàng)下的方法考察了加甲醇超聲20、30、40 min不同超聲時(shí)間對(duì)樣品的影響，實(shí)驗(yàn)表明，超聲30 min時(shí)所測(cè)峰面積較大，超聲時(shí)間較短，且所測(cè)成分穩(wěn)定。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 為確定木蘭脂素和歐前胡素的檢測(cè)波長(zhǎng)，對(duì)木蘭脂素、歐前胡素對(duì)照品（均為10 μg/mL）進(jìn)行紫外全波段掃描，木蘭脂素在210、222.5、230.5、254、278 nm處有較大吸收，歐前胡素在219、231、248.5、276、300.5nm處有較大吸收。取木蘭脂素和歐前胡素的混合對(duì)照品，濃度均為0.02 mg/mL，按2.1項(xiàng)下的方法分別考察在210、215、219、230、278 nm波長(zhǎng)下對(duì)混合對(duì)照品的影響，發(fā)現(xiàn)在230 nm波長(zhǎng)時(shí)，2種對(duì)照品所測(cè)的峰面積較為理想，且無(wú)雜質(zhì)峰，故選擇在230 nm波長(zhǎng)下測(cè)定。

3.3 柱溫的設(shè)定 取木蘭脂素和歐前胡素的混合對(duì)照品，按2.1項(xiàng)下的方法分別考察在20、25、30、35、40℃柱溫下對(duì)混合對(duì)照品的影響，考察發(fā)現(xiàn)所測(cè)峰面積受溫度影響較小，所以柱溫設(shè)定為30℃。

3.4 流動(dòng)相及洗脫方式的選擇 參閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]，分別使用了乙腈-水不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，各流動(dòng)相中主峰之間的分離度均大于1.5，且乙腈：水（52：48）流動(dòng)相能更好地分離木蘭脂素與歐前胡素，且能使出峰時(shí)間提前，考察時(shí)間最短，陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

參考文獻(xiàn)：

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[2]王德才，李珂，徐曉燕，等.杭白芷香豆素組分解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2005，12（11）；36.

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[5]劉梅，劉新，王飛，等.RP-HPLC同時(shí)測(cè)定辛芷提取物中的木蘭脂素和歐前胡素[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，3（2）.

[6]朱志峰.HPLC法測(cè)定鼻淵片中木蘭脂素的含量[J].中成藥，2012，10.

（收稿日期：2016-03-15）