張敏

[摘要] 目的 探討普伐他汀聯(lián)合紫杉醇、順鉑對人前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖的影響。 方法 將人前列腺癌細(xì)胞PC-3進(jìn)行體外培養(yǎng)24～72 h，普伐他汀、紫杉醇、普伐他汀聯(lián)合紫杉醇作用細(xì)胞48 h，普伐他汀、順鉑、普伐他汀聯(lián)合順鉑作用細(xì)胞48 h，采用MTT比色法檢測各組對細(xì)胞的增殖抑制作用，測定吸光度（A）值，并按公式計(jì)算相互作用指數(shù)。 結(jié)果 普伐他汀、紫杉醇和順鉑分別作用PC-3細(xì)胞，均可抑制細(xì)胞增殖，且此作用呈時(shí)間-劑量依賴性；（2、5、10）μmol/L普伐他汀分別聯(lián)合紫杉醇、順鉑作用PC-3細(xì)胞48 h，可將兩種抗癌藥物的IC50值降低，此作用呈劑量依賴性；普伐他汀和紫杉醇、順鉑的相互作用指數(shù)均小于1。 結(jié)論 普伐他汀聯(lián)合紫杉醇、順鉑對PC-3細(xì)胞均具有協(xié)同抗瘤作用，且普伐他汀聯(lián)合紫杉醇的協(xié)同抗瘤作用較強(qiáng)。

[關(guān)鍵詞] 普伐他??；前列腺癌；紫杉醇；順鉑；PC-3

[中圖分類號] R737.25 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）09-0065-03

[Abstract] Objective To discuss the effects of combining pravastatin with paclitaxel and cisplatin on the human prostate cancer cell PC-3. Methods PC-3 cells were cultured in vitro for 24-72 hours. After PC-3 cells were treated with pravastatin，paclitaxel，combining pravastatin with paclitaxel for 48 hours，and similarly，with pravastatin，cisplatin，combining pravastatin with cisplatin for 48 hours， the cell proliferation was examined by MTT test， the A values were computed， the combination indexes were performed according to the formula. Results After PC-3 cells were treated with pravastatin，paclitaxel and cisplatin respectively，the cell proliferation was inbibited，and it worked in a dose-dependent and time-dependent manner. The IC50 values of paclitaxel，cisplatin were reduced after the two drugs combining with 2 μmol/L， 5 μmol/L， 10 μmol/L pravastatin on PC-3 cells for 48 h，and this worked also in a dose-dependent manner. The combination indexes of combining pravastatin with paclitaxel，cisplatin were both less than 1. Conclusion Combining pravastatin with paclitaxel，cisplatin show synergistic antitumor effects on PC-3 cells，and the synergistic effect of combining pravastatin with paclitaxel seemed more powerful.

[Key words] Pravastatin； Prostate cancer； Paclitaxel； Cisplatin； PC-3

在歐洲和北美，前列腺癌是最常見的實(shí)體性惡性腫瘤之一，致死率僅次于肺癌[1]。與大部分亞洲國家一樣，我國前列腺癌發(fā)病率并不高[2]，但由于居住環(huán)境的惡化、飲食結(jié)構(gòu)調(diào)整及人口老齡化加速等因素，我國前列腺癌的發(fā)病率有明顯上升趨勢[3]。由于缺乏PSA篩查，患者就診時(shí)前列腺癌多已發(fā)生進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。國內(nèi)多中心研究數(shù)據(jù)顯示，初診前列腺癌患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高達(dá)68%，而對于此類晚期進(jìn)展性前列腺癌患者，內(nèi)分泌治療是主要治療手段。前列腺癌具有雄激素依賴性，內(nèi)分泌治療通過阻斷雄激素使得激素依賴性前列腺癌細(xì)胞凋亡而達(dá)到治療目的。但隨著內(nèi)分泌治療進(jìn)程中雄激素受體信號通路的持續(xù)激活，前列腺癌往往會從激素依賴性轉(zhuǎn)化為非激素依賴性，最終發(fā)生激素抵抗。而對于這些內(nèi)分泌治療耐受或無效的前列腺癌，化療成為重要的治療手段，但化療藥物的有效率偏低。因此如何提高化療藥物的療效成為非激素依賴性或激素抵抗性前列腺癌治療領(lǐng)域中亟待解決的問題。

目前，他汀類藥物在臨床上普遍用于降低血膽固醇水平從而治療高脂血癥、降低心肌梗死及腦血管卒中的發(fā)生。近年來研究顯示，他汀類藥物能通過阻滯膽固醇生物合成過程中的甲羥戊酸途徑而具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用[4，5]，進(jìn)而一些學(xué)者報(bào)道了他汀類藥物對化療藥物的增敏作用[6]。本文通過MTT法觀察了普伐他汀聯(lián)合紫杉醇、順鉑對激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞PC-3的相互作用，發(fā)現(xiàn)普伐他汀和紫杉醇、順鉑具有協(xié)同抗瘤作用。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞和試劑

普伐他汀為美國Sigma公司產(chǎn)品，將普伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品用無水乙醇溶解，NaOH激活，鹽酸滴定，加無菌蒸餾水至終濃度為1 mmol/L，備用。紫杉醇為市售揚(yáng)子江制藥公司產(chǎn)品，順鉑為市售齊魯制藥集團(tuán)產(chǎn)品，均溶解于無菌0.9%生理鹽水，按實(shí)驗(yàn)設(shè)定用培養(yǎng)基稀釋配制成所需終濃度。人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3由河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院科研研究中心惠贈。

1.2 操作方法

將對數(shù)生長期的PC-3細(xì)胞進(jìn)行消化、離心、重懸、計(jì)數(shù)，制成單細(xì)胞懸液，以1×105/mL的密度接種于96孔板上。待細(xì)胞貼壁生長成熟后，加入含普伐他汀、紫杉醇、順鉑的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h。實(shí)驗(yàn)設(shè)細(xì)胞對照組（單細(xì)胞懸液）、藥物組1（紫杉醇和普伐他汀不同濃度單藥組及兩藥聯(lián)合組）、藥物組2（順鉑和普伐他汀不同濃度單藥組及兩藥聯(lián)合組）。收集細(xì)胞前，每孔加入MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后加入DMSO，振蕩后上機(jī)測定570 nm處的吸光度值（A值）。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，根據(jù)測得的A值計(jì)算細(xì)胞生長抑制率：

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，行AVOVA方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞生長抑制率結(jié)果

應(yīng)用MTT比色法分析普伐他汀、紫杉醇、順鉑對PC-3細(xì)胞增殖的作用，結(jié)果顯示（2、5、10）μmol/L普伐他汀分別作用細(xì)胞48 h后，吸光度A值顯著低于對照組（F=343.850，P<0.05），10-9、10-8、10-7 mol/L紫杉醇作用細(xì)胞后，A值亦顯著低于對照組（F=98.516，P<0.05），（0.1、0.5、1.0）μg/mL不同濃度順鉑分別作用細(xì)胞后亦呈此種趨勢（F=399.766，P<0.05）（見表1）。根據(jù)公式計(jì)算出普伐他汀聯(lián)合紫杉醇作用PC-3細(xì)胞后的生長抑制率及其聯(lián)合順鉑后的生長抑制率。根據(jù)生長抑制率圖（封三圖1、封三圖2）計(jì)算出聯(lián)合不同濃度（2、5、10）μmol/L普伐他汀可將紫杉醇的IC50值分別降低至10-6.40 mol/L、10-6.61 mol/L、10-7.40 mol/L（單藥紫杉醇的IC50值為10-6.13 mol/L），可將順鉑的IC50值分別降低至1.15 μg/mL、0.92 μg/mL、0.52 μg/mL（單藥順鉑的IC50值為1.44 μg/mL）。我們發(fā)現(xiàn)隨著普伐他汀聯(lián)合用藥濃度的增加，紫杉醇、順鉑的IC50值降低越明顯，即普伐他汀對兩種抗癌藥物的協(xié)同作用隨著其濃度的增大而增強(qiáng)。

2.2 相互作用指數(shù)結(jié)果

我們計(jì)算了普伐他汀聯(lián)合化療藥物達(dá)到細(xì)胞生長抑制率為50%時(shí)的CI值。普伐他汀聯(lián)合紫杉醇的CI值均值為0.63；普伐他汀聯(lián)合順鉑的CI值均值為0.95，二者均<1。按照文獻(xiàn)報(bào)道，CI值<1.0表明兩藥具有協(xié)同作用，CI值越小協(xié)同作用越強(qiáng)；CI值=1.0表明兩藥具有相加作用；CI值>1.0表明兩藥具有拮抗作用，CI值越大拮抗作用越強(qiáng)。因此我們得出結(jié)論：普伐他汀和紫杉醇、順鉑具有協(xié)同抗瘤作用。此外，我們發(fā)現(xiàn)兩組別藥物聯(lián)合的CI值不同，普伐他汀聯(lián)合紫杉醇的CI值均值為0.63，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其和順鉑聯(lián)合的CI值均值，由此可推斷出普伐他汀和紫杉醇的協(xié)同作用相對較強(qiáng)。

3 討論

羥甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-CoA）在HMG-CoA還原酶的作用下還原成甲羥戊酸（MVA），此為體內(nèi)合成膽固醇的關(guān)鍵步驟。他汀類藥物通過抑制HMG-CoA還原酶而發(fā)揮阻滯膽固醇的生物合成的作用，是臨床上治療高膽固醇血癥重要的一類藥物[7]。他汀類藥物阻滯膽固醇合成的同時(shí)由于抑制了膽固醇合成途徑中的中間產(chǎn)物[8]，從而干擾了細(xì)胞信號傳遞、細(xì)胞增殖及凋亡和細(xì)胞分化等多種生物學(xué)效應(yīng)。近年來，他汀類藥物的抑制腫瘤細(xì)胞生長[9-11]、降低腫瘤細(xì)胞粘附、侵襲與轉(zhuǎn)移[12]、影響腫瘤細(xì)胞信號傳導(dǎo)、逆轉(zhuǎn)耐藥[13]等作用越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。

阻滯膽固醇合成所需的他汀類藥物濃度與抑制腫瘤細(xì)胞增殖所需的藥物濃度不同，后者遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于前者，而大劑量使用他汀類藥物會產(chǎn)生一定的副作用如高血糖、肝酶升高、肌病等。因此惡性腫瘤臨床治療領(lǐng)域中他汀類藥物的應(yīng)用和推廣受到一定限制。為了解決這一實(shí)際問題，許多學(xué)者研究了聯(lián)合應(yīng)用他汀類藥物和化療藥物以期達(dá)到增效減毒的作用。Yandong Shi等[14]報(bào)道，對于乳腺癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞，洛伐他汀能通過作用于細(xì)胞DNA損傷和氧化應(yīng)激而強(qiáng)化順鉑的抗腫瘤效應(yīng)。楊士杰[15]對肝癌細(xì)胞SMMC-7721進(jìn)行細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)辛伐他汀和化療藥物吡喃阿霉素具有協(xié)同細(xì)胞毒作用。本實(shí)驗(yàn)中，按iobolanalysis公式，我們計(jì)算出普伐他汀聯(lián)合紫杉醇的CI值及其聯(lián)合順鉑的CI值都小于1，且前者小于后者，說明普伐他汀聯(lián)合化療藥物后可協(xié)同這兩種化療藥物的抑瘤作用并且對紫杉醇的協(xié)同作用較強(qiáng)。因此，普伐他汀聯(lián)合紫杉醇、順鉑治療激素非依賴性前列腺癌有望減少化療藥物的劑量，達(dá)到增效減毒的作用，這種作用在協(xié)同紫杉醇時(shí)更明顯。但是，本實(shí)驗(yàn)只是體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其臨床應(yīng)用有待進(jìn)一步深入研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Siegel R，Naishadham D，Jemal A. Cancer statistics 2012[J].Cancer J Clin，2012，62：10-29.

[2] Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：Globocan 2008[J]. International Journal of Cancer，2010，127（2）：2893-917.

[3] 唐志柳，白潔，顧麗娜，等. 2000～2010年我國前列腺癌和乳腺癌流行狀況的系統(tǒng)性綜述[J]. 中國腫瘤，2013， 22（4）：260-265.

[4] Liu H，Wan g Z，Li Y，et al. Pravastatin prevents proliferation and bone metastases of lung adenocarcinoma in vitro and in vivo[J]. Neoplasma，2013，60（3）：240-246.

[5] Shen YY，Yuan Y，Du YY，et al. Molecular mechanism underlying the anticancer effect of pravastatin on MDA-MB-231 human breast cancer cells[J]. Molecular Medicine Reports，2015，12（1）：623-630.

[6] Osmak M. Statins and cancer：Current and future prospects[J].Cancer Lett，2012，324（1）：1-12.

[7] Reboulleau A，Robert V，Vedie B，et al. Involvement of cholesterol efflux pathway in the control of cardiomyocytes cholesterol homeostasis[J]. J Mol Cell Cardiol，2012，53： 196-205.

[8] Garcia-Ruiz C，Morales A，F(xiàn)ernandez-Checa JC. Statins and protein prenylation in ancer cell biology and therapy[J].Anticancer Agents Med Chem，2012，12：303-315.

[9] W. Gibson Wood，Urule lgbavboa，Walter E. Muller，et al. Statins，Bcl-2 and Apoptosis：Cell Death or Cell Protection？ [J]. Mol Neurobiol，2013，48（2）：308-314.

[10] Chen J，Liu B，Yuan J，et al. Atorvastatin reduces vascular endothelial growth factor（VEGF） expression in human non-small cell lung carcinomas （NSCLCs） via inhibition of reactive oxygen species （ROS） production[J]. Molecular Oncology，2012，6（1）：62-72.

[11] Zhu Y，Casey PJ，Kumar AP. Deciphering the signaling networks underlying pravastatin-induced apoptosis in human cancer cells：Evidence for non-canonical activation of RhoA and Rac1 GTPases[J]. Cell Death Dis，2013， 4（4）：e568.

[12] Al-Haidaril AA，Syk l，Thoriacius H. HMG-CoA reductase regulates CCL17-induced colon cancer cell migration via geranylgeranylation and RhoA activation[J]. Bio-chem Biophys Res Commun，2014，446（1）：68-72.

[13] Jeon CY，Pandol SJ，Wu B，et al. The association of statin use after cancer diagnosis with survival in pancreatic cancer patients：A SEER-Medicare analysis[J]. PLoS One，2015，10（4）：e0121783.

[14] Yandong Shi，F(xiàn)elley-Bosco E，Marti TM，et al. Differential effects of lovastatin on cisplatin responses in normal human mesothelial cells versus cancer cells：implication for therapy[J]. PLoS One，2012，7（9）：e45354

[15] 楊士杰. 辛伐他汀聯(lián)合吡喃阿霉素對肝癌SMMC-7721細(xì)胞的協(xié)同抑制作用[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20（7）：1343-1344.

（收稿日期：2015-12-03）