迪麗達爾·希力甫 張向陽

【摘 要】 目的：利用酵母膏（YEP）及氧嗪酸（OA）作為誘導劑，血漿尿酸水平為檢測指標，建立高尿酸血癥動物模型；并通過動物模型的瑞舒伐他汀鈣藥物干預，監(jiān)測血清尿酸（UA）及C-反應蛋白（CPR）指標及CPR蛋白表達水平，綜合分析，評價瑞舒伐他汀鈣對高尿酸血癥大鼠炎性因子的療效。方法：1）將36之SD大鼠隨機分為空白對照組，高尿酸血癥模型組，高尿酸血癥+瑞舒伐他汀鈣10.0m g·kg-1·d-1組。以YEP 21g·kg-1·d-1給予喂養(yǎng)，OA以200mg-1·kg-1·d-1腹腔注射，瑞舒伐他汀鈣以10.0m g·kg-1·d-1劑量灌胃，于建立模型同時進行藥物干預，持續(xù)給藥6周后鑒定該藥對血清UA及CPR水平并取出胸主動脈監(jiān)測血管內皮組織CRP表達水平的影響。結果：1）模型組血UA及CRP水平顯著升高，主動脈內皮組織CRP表達水平增強，與空白對照組呈明顯對比；2）瑞舒伐他汀鈣干預高尿酸血癥動物模型后瑞舒伐他汀鈣降低血清UA及CRP水平，以及CRP蛋白表達水平的效應顯著。結論：本研究結果表明瑞舒伐他汀鈣對高尿酸血癥所致大鼠炎癥反應具有明顯療效，炎癥反應的改善可能是瑞舒伐他汀鈣能降低尿酸的作用機制之一。

【關鍵詞】 高尿酸血癥 氧嗪酸鉀鹽 炎性因子 瑞舒伐他汀鈣

高尿酸血癥（hyperuricemia）在臨床較為常見，是指細胞外液的尿酸鹽呈超飽和狀態(tài)[1]，屬于代謝性疾病。根據(jù)國內外臨床研究報道，血清hs-CRP水平與血尿酸，24 h尿尿酸有顯著正相關關系，提示尿酸代謝紊亂是高尿酸血癥患者血清hs-CRP水平升高的重要相關因素[2]。本研究采用YEP及OA誘導建立大鼠高尿酸血癥模型，在整體水平觀察高尿酸血癥對血管炎性反應以及瑞舒伐他汀鈣對其的影響，并進一步觀察瑞舒伐他汀鈣血管炎性反應作用的可能機制。

1 研究方法

1.1 實驗動物藥物干預

將36只雄性SD大鼠（由新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院動物實驗室提供）隨機分為3組（12只/組），模型制作和藥物干預同步進行，持續(xù)6周。動物以YEP21g·kg-1·d-1給予喂養(yǎng)，其方法參照文獻[3，4]0A用滅菌熱蒸餾水配成20g/L母液，以200mg-1·kg-1·d-1腹腔注射，其空白對照組動物以普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。參照瑞舒伐他汀鈣的臨床用藥劑量和實驗動物研究報道[4，5]熱蒸餾水配成5mg/1ml母液，按10.0m g·kg-1·d-1劑量灌胃。

1.2 標本收集

藥物干預開始后，分周（0、2、4和6周）和分批采集大鼠摘眼球取抗凝血2ml，離心分離血清、分裝并保存于-80℃冰箱。6周后，利用1%戊巴比妥鈉40mg·kg-1腹腔注射麻醉，開腹取出大鼠胸主動脈，用15%中性福爾馬林固定后，石蠟包埋并切成 4μm厚的組織切片，保存于-80℃，用于免疫組化學鑒定。

1.3 指標檢測

利用UA及CRP試劑盒和DXC800 SYNCHRON生化分析系統(tǒng)測定以上代謝產(chǎn)物的血清含量，具體遵照廠家提供的說明書和儀器操作常規(guī)方法。

1.4 免疫組織化學方法

固定和石蠟包埋胸主動脈福爾馬林（4?m）進行脫蠟和水化?？乖诰彌_區(qū)（1mmol/L EDTA /磷酸鹽緩沖鹽水，pH 9）在98°C在水中30分鐘浴。內源性過氧化氫阻斷進行3%過氧化氫10分鐘。接下來入兔抗鼠CRP抗體（一抗，Santa Cruz）在4°C染色切片。次日每張切片加入山羊抗兔辣根過氧化物酶標記抗體（二抗，Goat-anti-rabbit-HRPO）并顯棕黃色。在光學顯微鏡下五個隨機視野觀察CRP陽性細胞染色強度。NSCLC PBAD表達陽性程度得分為：0，0%；1，1%–25%；2，26%–50%；3，51%–75%或4，76%-100%。得分為：0，無污點；1，稻草黃；2，棕色；和3，暗褐色的。根據(jù)陽性細胞著色強的百分比。取1cm個胸主動脈平滑肌平均得分為n。0分為陰性（-），04分為強陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計學分析

應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理。所有實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用One-Way ANOVA作統(tǒng)計推斷，多組間兩兩比較采用單因素方差分析（LSD法），方差不齊者采用Tamhane法，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 高尿酸血癥模型大鼠血UA水平的變化

表1可見，用藥2周后模型組血UA較其他組顯著升高（P<0.01），6周后模型組仍高于其他組（P<0.01）。實驗 2周時瑞舒伐他汀鈣UA水平低于模型組（P<0.01），但較空白對照組高（P<0.05）； 6周時趨向于正常，與對照組比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。

2.2 各組大鼠血清CRP水平的變化

表2可見，實驗2周后模型組和藥物干預組血清CRP水平均開始升高，與空白對照組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.01）；4周至6周，模型組CRP水平繼續(xù)升高，與空白對照組及藥物干預組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.01）。實驗4周起，藥物干預組CRP水平開始下降，到了6周，CRP水平下降顯著，與模型組有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.01）。

2.3 各組大鼠動脈組織CRP表達的判定

模型組CRP表達為強陽性，空白對照組CRP的表達為陰性（P<0.05）。瑞舒伐他汀鈣10mg/kg干預組CRP表達強度較模型組顯著減弱，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。

3 討論

近些年來，眾多研究發(fā)現(xiàn)[6，7，8]高尿酸血癥與CRP、TNF-α、IL-6等炎性因子有密切關系，Kanellis等[9]學者發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)的人內皮細胞和血管平滑肌細胞均有C-反應蛋白mRNA和蛋白表達，提示血管細胞是產(chǎn)生C-反應蛋白的另一來源，尿酸能上調C-反應蛋白的表達，這進一步提供了尿酸的前炎癥因子和致動脈粥樣硬化作用的直接證據(jù)。本研究通過檢測炎癥反應相關性血清指標后發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥大鼠血清UA升高的同時，血清CRP水平也顯著升高。CRP染色后出現(xiàn)主動脈內皮細胞胞漿呈陽性反應，表現(xiàn)為內皮細胞胞漿有較多棕黃色顆粒，CRP的蛋白表達顯示強陽性，炎性因子升高程度蛋白表達強度與尿酸水平呈正相關性。與文獻報道一致。有學者認為[10]，尿酸鹽本身作為啟動白細胞釋放炎癥因子的始動因素[11]，可能不僅引起炎性損傷，還參與炎性損傷的發(fā)生、發(fā)展。

本研究結果提示，瑞舒伐他汀鈣顯著降低血清CRP同時減弱主動脈內皮細胞CRP的表達。他汀類藥物的抗炎的可能機制包括[12]：1）抑制巨噬細胞生成細胞因子，并通過降低巨噬細胞的活性穩(wěn)定斑塊；2）抑制黏附分子表達。他汀類藥物通過減少血管內皮細胞表達的P選擇素、細胞間黏附分子1（ICAM-1）、巨噬細胞黏附分子1（Mac-1）、血管細胞黏附分子1（VCAM-1）及單核細胞表達的CD11b/CD18和CD40增加，抑制單核細胞與內皮細胞的黏附，從而減少血管實質的損傷[13]；3）降低C-反應蛋白，C-反應蛋白是炎癥急性期的反應產(chǎn)物，在早期動脈粥樣硬化斑塊中就有沉積，其水平可反映與缺血性病理相關的炎癥程度。

參考文獻

[1] Johnson， Richard J， Kang， et al. Is There a Pathogenetic Role for Uric Acid in Hypertension and Cardiovascular and Renal Disease？[J]. 2003 American Heart Association. 2003， 41（6）：1183-90.

[2] 李佳， 李晨鐘， 薛耀明等. 高尿酸血癥患者血清炎癥介質水平與胰島素抵抗. 華中科技大學學報（醫(yī)學版）[J]. 2006， 35（6）：804-06

[3] 陳光亮， 張清林， 馬曉芹等. 酵母致小鼠高尿酸血癥模型[J]. 中國藥理學通報， 2003， 19（4）：467-9.

[4] 陳 奇. 中藥藥理研究方法學[M]. 人民衛(wèi)生出版社. 2000：1103-05.

[5] 馬培奇. 美FDA批準瑞舒伐他汀鈣治療無心血管疾病臨床證據(jù)成人以降低他們的心血管疾病風險[J]. 上海醫(yī)藥， 2010， 31（4）：192.

[6]Singh U， Dasu M， Yancey PG， et al. Human C-reactive protein promotes oxidized low density lipoprotein uptake and matrix metalloproteinase-9 release in Wistar rats[J]. J Lipid Res， 2008， 49（5）：1015-23.

[7]Siqueira DA， Sousa AG， et al. Correlation between plaque composition as assessed by virtual histology and C-reactive protei[J]n. Arq Bras Cardiol 2013 Jun Epub ahead of print]

[8]宓宇仙， 景影， 甄錫云等. 超敏C反應蛋白、血尿酸與無癥狀腔隙性腦梗死的關系[J]. 中國實驗診斷學， 2009， 13（7）：943-4.

[9]左 勇. 冠心病患者血清尿酸和超敏C反應蛋白的測定及分析[J]. 中國誤診學雜志， 2010， 10（13）：3087-8.

[10]Tsunoda S， Kamide K， Minazni J， et al. Decreases in serum uric acid by amelioration of insulin resistence in overweight hypertensive patients：Effect of a low-energy diet and an insulin-sensitising agent[J]. AmJ Hypertens， 2002， 15：697-01.

[11]aranlilloM， GodboutM， NaeeaehePH， et al. Signaling events involved in macrophage chemokin exression in response to monosodium urate crystals[J]. J Biol Chem， 2004， 279：52797-805.

[12]金鑫， 李擁軍. 他汀類藥物在心血管疾病中應用的研究進展[J]. 臨床薈萃， 2010， 25（1）：86-9.

[13]Tsiara S， Elisaf M， Mikhailidis DP. Early vascular benefits ofstatin therapy[J]. Curr Med Res Opin， 2003， 19（6）：540-556.